Способ определения чистоты и гибридности семян подсолнечника

СООЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9), (11) 5)5 А 01 Н 2 гия, селекния сельноводство, т электрораз родиолученные ными и по и степени ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 1(56) Инструкция по апообации сортовых посевов. М.; Колос, 1972,Кабег А.1., ау СЛ . Сепет 1 сз о 1е 1 естгорЬогет 1 с Уаг 1 айтз и ТЬе.,алпца 1зцпйодег. ТЬе огпа) о 1 Негес 111 у, 76;.335340, 1985 (прототип).Реасос 1 А,С Вцм 1 по ЯЛ.С 1 цееп К.О,Яегцгп рготеи еестгорЬогезз 1 п асгИагп 1 деце 1: Рапегпз Ггоа поггла 1 Ьцщап зцЬестз,Яс 1 епсе, ч.147, Ио 366.4, р. 1451 - 1453, 1965. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве подсолнечника, а также на предприятиях системы хлебопродуктов,Основным методом сортового контроля у подсолнечника является полевая апробация. Сортовой контроль непосредственно по анализу семян не проводят и о сортовой чистоте и степени гибридности семян, поступающих на хлебоприемные предприятия, судят на основе сортового удостоверения, выписываемого на каждую партию сортовых семян.Идентификацию материала проводят на основании морфологических прйзнаков, сильно подверженных влиянию внещнихусловий, Необходимы надежные генетические методы сортового контроля качества семен- ного материала,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСТОТЫ И ГИБРИДНОСТИ СЕМЯН ПОДСОЛНЕЧНИКА(57) Использование: биотехнолоционно-генетические исследоваское хозяйство, селекция и семеСущность изобретения; проводяфоретическое разделение эстетельских и гибридных форм, испектры сравнивают со стандартсопоставлению судят о чистотегибридности, 1 з,п.ф-лы,Такие методы могут быть разработаны на основе принцйпов и подходов бйохимической генетики путем использования электрофоретических способов разделения ферментных белков семян. В прототипе эта задача рещается путем определения аллелькой изменчивости локусов, кодирующих различные изозимы пероксидазы, малатдегидрогеназы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы, фосфоглюкомутазы, глюкозофосфатизомеразы и изоцитратдегидрогеназы, выделенные из проростков. Аналогичные методы работают только при отличиях электрофореграмм отцовской от материнской формы гибрида, При оЦенке чистоты и гибридности растений некоторых гибридов метод может не работать из-за отсутствия полиморфиэма по данным ферментным системам у родительских форм гибрида подсолнечника,Корректор С,Черни Редактор Т,Пилипенко Заказ 2630 Тираж Подписное8 НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, ЖРаушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101 Цель изобретения - повышение точности способа определения чистоты и гибридности семян подсолнечника, а такжеупрощение экстракцииПоставленная цель достигается тем, чтоопределяется изоферментный состав зстераз, катализирующих реакций расщеплениясложных эфиров, которые содержатся в значительных количествах в семенах подсолнечника. При злектрофоретическомразделении получают четкие генотипические различия, Чистота материала характеризуется типичностью иэоферментныхспектров эстераз различныхсемян даннойлинии. Гибридность семян определяется поналичию в изоферментном спектре характерйых для отцовской и материнской форм: и.осле центрифугирования при 5 тыс,об/мин в течение 15 мин при+2 С использовали в качестве сырого экстракта эстераз.Разделение проводили в 7,5-ном полиакриламидном геле, используя трис-боратныйбуферрН 8,3 (3).После электрофореза гели инкубировали в среде ацетатного буфера рН 6,0, содержащей 10 мг 1-нафтилацетата, 20 мг2-нафтйлацетата и 50 мг прочйого голубогоРР (конечнйй объем смеси 100 мл) до появления зон с эстеразной активностью, Электрофореграммы эстераз исследуемогоматериала сравнивали с злектрофореграм"мами ранее изученных форм подсолнечника. Чистоту материала определяют потипичности электрофоретических спектровэстераз различных семян данной линии,Гибридные семена выявляют йо наличию визоферментном спектре характерных дляотцовской формы аллеломорфов фермента,Указанным способом анализировалисьСемена линий подсолнечника селекции Бсесоюзного селекционно-генетического института, Линии Одесский 1036 А, Одесский 1036 Б, Одесский 3369 А, Одесский 3369 Б, Одесский 58 имели тип зстеразных элект рофореграмм. Электрофореграммы эстеразс типом характерны для линий подсолнечника Одесский 18 и Одесский 48. Соответственно гибридные семянки гибрида Одесский 105 (Одесский 1036 Х Одесский 10 18) имеют эстеразы обоих родителей, а следовательно, их можно отличать по электрофореграммам как от одного, так и от другого родителя, Анализ отдельных семянок с последующим подсчетом гибридных и роди тельских типов электрофореграммпозволяет определить процент гибридности данной партии семян гибрида Одесский 105, Аналогично можно определять уровень гибридности гибридов Одесский 122 и Одес ский 123, Гибридность Одесского 128 данным методом установить нельзя, так как оба родителя (Од,3369 и Од.58) по злектрофореграммам эстераэ не отличаются,25 Формула изобретения1. Способ определения чистоты и гибридности семян подсолнечника, включающий выделение ферментов, их электрофоретическое разделение, получе ние изоферментных спектров, анализ и сопоставление их со стандартными спектрами родительских и гибридных форм, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности оценки, в качестве исследуемых 35 ферментов анализируют эстеразы, выделение их проводят из семян и электрофоретическое разделение осуществляют в. полиакриламидном геле в трис-боратнойсреде рН 8,3;402, Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью упрощения зкстракции, выделение эстераз проводят 0,2;0,-ным раствором двууглекислой соды, содержащим 45 20 сахарозы.