Способ определения аллергенных свойств химических веществ, нерастворимых в воде

)5 6 01 М 33/53 ОБРЕТЕНИ ОПИСАН ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ нн ицин и Е.П,Кор Л.А. Ал м соед ия к иям,ИЯ АЛЛЕРГЕНКИХ ВЕЩЕСТВ,Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене труда и профессиональной патологии, может быть использовано при изучении аллергенных свойств химических веществ, подлежащих нормированию в объектах окружающей среды.Цель изобретения - повышение чувствительности и точности способа.Способ осуществляется следующим образом.Подопытных животных (морских свинок) сенсибилизируют путем введения 100 мг исследуемого вещества, т.е. 400 мкг на 1 кг веса в объеме 0,2 мл внутрикожно в ухо либо нанесением на кожу химического соединения в концентрации, не вызывающей раздражающих эффектов (что определяется в опытах на интактных свинках). Через 10 дней после сенсибилиэации у животных берут кровь из сердца в смоченную гепарином (1:10) пробирку. Кровь разводят иэотоническим распипеткоиз котортвора, алергенафизиолобу инкубцией хикровью иный осад изводят с кровью лизированных жиют на 55 - 70 мин в ционного периода по характеру осад-. с ровными краями тельную реакцию. тончатыми краями ительная реакция ГОСУДАРСТВ Е ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(71) Львовский государстский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНЫХ СВОЙСТВ ХИМИЧЕНЕРАСТВОРИМЫХ В ВОД(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при изучении аллергенных свойств химических веществ, нерастворимых в воде. Цель изобретения - повышение чувствительности и точности способа, Животных сенсибилизируют исследуемым соединением, затем производят забор крови, Кровь разводят, инкубируют в присутствии исследуемого вещества в ячейках планшета и при выявлении агглютинации эритроцитов определяют аллергенные свойства этого соединения, В сравнении с прототипом при минимальной концентрации исследуемых веществ точность увеличивается на 50%. твором хлорида натрия 1:1 и вносят й по 0,1 мл в 2 лунки планшета, одна ых содержит взвесь изучаемого рас другая является контролем без ал , т.е. содержит 0,5 мл чистого гического раствора. Опытную проируют с наибольшей концентра мического вещества, дающего с нтактных животных резко очерченТе же операции пр контрольных, несенсиби ватных. Планшет помещ термостат при 36-37 С.По истечении инкуба производят учет реакции ка. Компактный осадок оценивают как отрица Осадок с неровными, фес оценивается как полож1681259 Составитель В, ЛитовченкоТехред М,Моргентал Корректор С. Шевкун Редактор Л, Павлова Заказ 3310 Тираж 387 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 45 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101 при одновременном отсутствии реакции в двух контрольных пробах,П р и м е р 1. Подопытных морских свинок в количестве 6 штук сенгсибилизируют дозой 100 мкг/кг веса й-й -дитиодимофолина (ДТДМ). Спустя 10 дней у животных берут из сердца кровь для постановки иммунологических тестов. Для определения рабочей дозы антигена 0,1 мл разведенной в 10 раз цельной крови интактных животных вносят в лунки планшета, содержащие по 0,5 мл взвеси ДТДМ в концентрациях 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000, Планшет помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 С. По истечении инкубационного времени производят учет реакции. В концентрации 1:1000 наблюдают осадок эритроцитов резко очерченной формы и, следовательно, данная концентрация используется как рабочая. С ней производят исследование осаждения эритроцитов крови сенсибилизированных животных, После инкубации крови сенсибилизированных и несенсибилизированных животных с антигеном в концентрации 1;1000 отмечают наличие положительного эффекта в опытной пробе (осадок эритроцитов с кружевными, фестончатыми краями) и отсутствие осадка такого характерав контроле. Таким образом, данное вещество обладает аллергенными свойствами,П р и м е р 2. Аналогично примеру 1 исследуют пробы крови сенсибилиэированных животных с 2-меркаптобензтиаэолом (каптаксом), который по литературным данным является причиной аллергических заболеваний у рабочих резиновых производств,Установлены аллергические свойства у данного соединения. П р и м е р 3, Двум группам морскихсвинок светлой масти на выстриженный участок кожи в течение трех дней наносят аппликации 2,4-динитрохлорбензола (ДНХБ) в5 концентрациях 1;200 и 1:10 в 1-ном спиртовом растворе, Исследование проводятаналогично примеру 1.Использование предлагаемого способапозволяет также выявить аллергические10 свойства у этого соединения,Нерастворимость в воде порошкообразных антигенов является условием постановки РСКЭ в то время, как для РСАЛ иРСЛЛ это обстоятельство усложняет поста 15 новку опыта, требует подбора оптимальногорастворителя (спирт, ацетон, диметилсульфоксид и др.), что не всегда удается.В сравнении с прототипом повышаетсячувствительность способа и точность спосо 20 ба, Так при минимальных концентрацияхисследуемых веществ (50-100 мкг/мл) точность определения с использованием предлагаемого способа равна 83,5-100 ф, а впрототипе -33,3-50=ь, т.е, увеличивается на25 50,формул а и зоб рете н ия Способ определения аллергенныхсвойств химических веществ, нераствори мых в воде, включающий сенсибилизациюживотных, забор крови, инкубирование ее в присутствии химического вещества, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и точности способа, кровь 35 разводят и инкубируют с химическим веществом в ячейках планшета и при наличиии агглютинации эритроцитов определяют аллергические свойства химического вещества.