Способ оценки биологической активности препаратов из комплекса нуклеотидов

(51)5 С 01 И 1/28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ едицине,ю иэобзнеи биологи что и ки крысах ят испыту препар ат онно мнкчатки и 3. сли в опыт- сдисков увеч ретенины, а ю изо Из областимоло гни,ся повышее относитсяменно к офтал ретения явля способа. т Сп ности едующи. обосуществляют а.шрей сет 1 ммнии офи т ост ав изводного ну-.ение 6 или соответстпутем дека- ксируют вфосфатном ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) 1 а 1 ея С Ренлаг А %1 яоп НИгСегЪцг А Нс:айпд Н, ЫяСо 1 оЯапй Ь 1 осЬешса 1 а 1 цйу 1 пя о 1 а печяСга 1 п оГ йуя 1 гор 1 п.с га 1 я. Ехр, ЕуНея, 1974, ч, 18, р. 119-13 Новорожденным крысам ли Ье 11 с наследственной дист чатки под кожу живота вводя 3,5%-ного раствора ЭНКАДа ляет 3,5 мг вещества (про клеотида) ежедневно в теч 8 дн, На 7-й или 9-й день венно животных умерщвляют питации. Глазные яблоки фи 2%-ном глютаральдегиде на(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КОМПЛЕКСАНУКЛЕОТИДОВ(57) Изобретение относится к ма именно к офтальмологии. Цельретения является повышение точностиспособа. Цель достигается тем,следования проводят на мутантных попигментной дистрофии сетчатлинии СашрЬе 11. Крысам вводемое вещество, в частностиЭНКАД, Далее готовят электрроскопические препаратысетпод микроскопом считают в наружномсегменте фоторецепторов наличие мембранных скоплений дисков. Еной партии кры- копченияличиваются на 10% и бсщее по отношению к контролю, препарат оцениваетскак обладающий активностью для ле ения пигментной дистрофии счетчики.. буфере, задний сектор. Затем глаз раз резают на фрагменты, площадью околомм, фиксируют в 2%-ном глютарапьдегиде в течение 3,5 ч. Промывают в 0,2 М растворе сахарозы на том же буфере в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в течение 1 ч, Затем обеэвожи- . вают в спиртах восходящей крепости (30., 50, 70, 96, 100 ) и заливают в ар алдит.Ультратонкие срезы, содержащие пигмейтный эпителий и наружные слои сетчатки, контрастируют 3%-ным уранилацетатом и нитратом свинца по Рейнольдсу, исследуют в электронном микроскопе, Проводят морфометрию очагов1591665 Формула из обр етения Составитель Л.СтебаеваТехред М,ХоданичА Редактор А.Чандор Корректор Т,Малец Заказ 3046 Тираж 507 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Прои.-водственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 мембраногенеза на 7-й и 9-й день после рождения в контроле и опыте,Подсчет очагов мембраногенеза проводят, в полях зрения. За очаг мембра( ногенеза принимают единичные мембраны или скопление мембранных дисков, которые определяют между апикальным отростком пигментного эпителия и в субретинальном пространстве Оценку мем браногенеэа проводят по четырехбальной системе, отражающей 4 категории условной площади поля зрения, занимаемой дисками:отсутствие мембран в поле зрения (категория О);мембранные комплексы, занимающие около 1/3 поля зрения и меньше(категория 1);мембранные комплексы, занимающие 1/2 поля зрения (категория 2);.мембранные комплексы, занимающие около 2/3 поля зрения и больше (категория 3)Для оценки величины стимулирующе го эффекта ЭНКАЦа используется формулаК= -= -- ": 1001Боо Вка укгде К - величина, отражающая эффективность стимулирующего действия испытуемого препарата, 7;Б - общая площадь, з анимаемаяопмембранными дисками Фоторецепторных клеток в опыте; 35Ь - общая площадь занимаемаякмембранными дисками в контроле.Общая площадь вычисляется путем суммирования произведений условно вы 40 раженной площади полей, занятых дисками в каждой категории,П р и м е р 1. Крысам введено 1 мп 453,57.-ного раствора ЭНКАДа 1 раз вдень в течение 6 дн (серия У 1), Да-лее готовили ультрамикроскопическиесрезы сетчатки. На ср езах просматривали.Г 200 полей зрения. В. контроле крысам введен физиологический раствор,При просчете выявлено, что в опытной пробе скопление мембранных дисков увеличено на 137 от нормл, что дает возможность определить ЭНКАД, как обладающий фармакологической активностью при ретинальной дистрофии,П р и м е р 2. Крысам введено 0,1 мм 3,57.-ного раствора ЭНКАДА 1 раз в.день в течение 9 дн (серия 9 3),. При электронной микроскопии в сетчатке в опыте отмечалось формирование соединительных ресничек, тесно, контактирующих с плаэматической мембраной пигментного эпителия и располагающихся между апикальными отростками, Мембранные диски наружных сегментов при обзорном исследовании выявились лишь в отдельных полях в виде единичных скоплений.При просчете выявлено, что в опытной пробе скопление мембранных дисков не увеличивается по отношению к норме, В связи с этим излученная партия ЭНКАДа не является активной, Пре,парат потерял активностьИзобретение позволяет повысить точность определения фармакологической активности препаратов комплекса нуклеотидов, применяемых для лечения пи гмент ной дистрофии сетчатки. Способ оценки биологической активности препаратов из комплекса нуклеотидов путем офтальмологического исследова"ия, о т л и ч а ю щ и й ся тем, что, с целью повышения точности способа, исследования проводят на мутантных крысах Салье,.1, при этом в сетчатке дополнительно в наружных сегментах фоторецепторов определяют наличие скоплений мембранных дисков и при увеличение их количества на 107 и более от нормы оценивают препарат как активный.В