Способ подготовки препарата изолированных синаптонемных комплексов для электронно-микроскопических исследований

(51)5 О Н 1128 ОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ П(НТ СССР ИТЕТ РЫТИЯ ИСАНИ К АВТОРСКОМ ДЕТЕЛЬС несе" ицине,ние компна.ующим обосл(71) Институт общей генетики им. Н,И. Вавилова АН .СССР (72) О,И, Карпова и Ю.Ф. Богданов (53) 616-0.89.9 (088.8).(56) П 1 ейг 1 сЬ А.Х А зеццепг 1 а 1 апа 1 уз 1 з оГ гпе йече 1 ориепг оГ гпе зупаргопеша 1 сошр 1 ех 1 п зрегщагосугез оХ где пюцзе Ьу е 1 есггоп ш 1 егозсору .цз 1 пд Ьуйгоху цгеа апй айаг Г 11 гас 1 оп. - Сепег 1 са, 983, Ч. 61, р. 19.(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ИЗОЛИРОВАННЫХ СИНАПТОНЕМНЫХ КОМПЛЕКСОВ Изобретение относится ка именно к цитогенетике. Цель изобретения .получлексов, свободных от хромат Способ осуществляют следразом. Дпя исследования берут препараты комплексов, изолированные под действием ДНКазы из ядер сперматоцитов, нахо дящихся на стадии зиготены-пахитены, Образец комплекса подвергали электрофоретическому разделению в 0,4 Х гори.- зонтальном агарозном геле, приготовленном на 0,04 М трис-ацетатного буфера, рН 8,3, и 0,001 М ЭДТА-Иа,.Гель заливают на стеклянную пластинку с прижатой к ней рамкой, П е полимеризации рамку снимают. В лунку размером 5"2,5 "5 мм вносят 50 мкл образца в растворе 1,5 М сахарозы, 0,0 М трис-НС 1, 0,001 М ЭДТА-Иа. 2ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЦЕДОВАНИЙ(57) Изобретение относится к области медицины, а именно к цитогенетике. Целью является получение чистых фрак ций синаптонемных комплексов ДНП. Цель достигается тем, что до на ния комплекса на сеточки проводят электрофоретическое разделение суспе зии комплексов в агарозном геле, А нанесение комплекса на электронно- микроскопические сеточки проводят путем помещения на пути продвижения комплекса сеточек. Комплекс наползает на сеточки. После их окраски ФВК они имеют вид чистых нитей ДНП. Гель помещают в стандартную камеру д проведения горизонтального электрофо реза. Буфер заливают таким образом, чтобы он бып вровень с гелем. Этимдостигается более полное вхождение комплексй, имеющего значительный молекулярньй вес. ДНП-электрофорез про водят в буфере такого же состава, как и агарозный гель, при постоянном напряжении 1403, при котором ток равен 1 05-120 мА. Препарат комплекса как и свободная ДНК, двигается к аноду. Электрофоретическое разделение проводят 30-40 мин. Далее прибор отключают от источника питания постоянного тока. Берут необходимое количество медных сеточек, покрытых пленкой, сеточки помещают в гель под углом 85-90 к движению комплекоса любой стороной ня расстоянии в 3 мм друг к другу начиняя с 2 до1561019 Составитель Л. СтебаеваТехред Л,Олийнык Корректор С Шевкун Рецактор Л. Пчолинская Тираж 493 Заказ 975 Подписное ВНИИ 1 П 1 Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, осква, Ж.35 Раушская наб д. 4/5Производственноиздательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,01 15 мм от старта. Снова подают на гель напряжение 140 В в течение 5 мин,Сеточки вынимают пинцетом, фиксируют в капле 4 Ж-ного формалина в 0,5 И сахарозы промывают водой, окрашивают 1 Е-ным спиртовым раствором фосфорновольфрамовой кислоты в течение 1 мин, промывают спиртом, сушат, Препараты комплекса готовы дпя 10 изучения цоц электронным микроскопом.П р и и е р. Каплю суспензии клеток, содержащей синапгонемные комплексы, наносят на агаровый фильтр, Затем проводят электрофоретическое разделение и полимеризацию геля,.В лунку вносят образец, а гель помещают в камеру для злектрофореза. Комплекс входит в гель и движется к аноду. На его пути под углом 90 вводят сеточки на 5 мин. На сеточку наползают синаптонемные комплексы. ,Проводят их окрашивание. При просмотре под электронным микроскопом видны чистые нити ДНП. Способ позволяет получить чистую фракцию синаптонемных комплексов ДНП, свободных от хроматина.Формула из обретенияСпособ подготовки препарата изолированных синаптонемных комплексов для электронно-микроскопических исследований путем приготовления суспензии комплексов в трис-НС 1 буфере рН 8,3, нанесения суспензии на агарозный гель с последующим переносом на медные сеточки и окрашиванием фосфорновольфрамовой кислотой, о т л и" ч а ю щ и й с я тем, что, с целью получения комплексов, свободных от хроматина, до нанесения комплекса на сеточки проводят электрофоретическое разделение суспензии синаптонемных комплексов в агарозном геле, а нанесение проводят путем помещения сеточки в гель на пути прохождения комплекса под углом 85-90 , при этом сеточку экспонируют в геле в течение 4- 5 мино