Способ подготовки пробы гемолимфы для электрофоретических исследований

(5 01 М 33 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ инертно спортирую их перево сением на сахароэы Еслироб ложке, и таиных ге(57) Изобре бам биохими родственных ческих иссл тся тем,способу пластины ель достига редлагаемом Фы наносят н атериала, в комнатнойпробы гемоли из инертного на воздухе п и в таком вид руют,сушива емпературеанспортихраня ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(71) Институт биологии внутреннихвод им. И,Д,Папанина(56) Богданов Л,В Коваль Е,ЭЧерноиванов В,А, Рекомендации поиспользованию электрофоретическихданных при межпопуляционных и межвидовых сравнениях, Владивосток,ТИНРО,1980,(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБЬ 1 ГЕМОЛИМ 4 Ы ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ение относится к спосоеской диагностики близковидов и генетико-биохимидований, применяемых при Изобретение относится к способамбиохимической диагностики близкородственных видов и генетико-биохимических исследований, применяемыхпри изучении генетической структурывидов и популяций, а именно к электрофорезу гемоглобиновЦель изобретения - упрощение подготовки пробы и увеличение сроков храненияУказанная ц ечто согласно п У изучении генетической структуры видови популяций, а именно к электрофорезу гемоглобинов, С целью упрощенияподготовки пробы и увеличения сроковхранения проб гемолимфы для электрофореза при положительных: температурах (до 20-25 С), облегчения транспортировки и подготовки в полевых условиях пробы наносят на пластины из го материала, высушивают на воздухе и в таком виде хранят и трант Перед фракционированием дят в жидкое состояние нанемазки 407-ного раствора в трис-глициновом буфере, а находится на твердой поди путем размачивания пропимолимфой кусочков фильтровальной бумаги в 207.-ном растворе сахарозы в трис-глициновом буфере. Перед Фракционированием пробы переводят в жидкое состояние путем нанесения на мазки 407-ного раствора сахарозы в трис-глициновом буфере, если проба находится на твердой пластинке, или путем размачивания пропитанных гемолимфой кусочков фильтровальной бумаги в 207-ном растворе сахарозы в трис-глициновом буфере.П р и м е р. В мае 1986 гна Рыбинском водохранилище были собраны личинки СН 1 гопошця р 1 цшояия (24 экз,) и обработаны следующим образом: каждый экземпляр прокалывали препароваль ной иглой на стеклянной пластинке, часть вытекшей .гемолимфы пастеровской пипеткой переносили в 402-ный раст1536312 Составитель В,ЗотовТехред М.Ходанич Корректор И,Муска Редактор М,Циткина Заказ 106 Тираж 499 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгорол, ул. Гагарина,101 вор сахарозы, в трис-глициновом буфере, оставшуюся на пластинке гемолимфу высушивали на воздухе, Сухие пробы гемолимфы хранили при комнатнойтемпературе (20-24 С) в течениеО 534 дней, Перед фракционированием сухие пробы на стеклянных пластинкахпереводили в жидкое состояние путемнанесения на часть мазка несколькихкапель 403-ного раствора сахарозыв трис-глициновом буфере, Через 3- 5 мин сухая гемолимфа размокала,ее перемешивали с нанесенным раствором и шприцем наносили на гель, 15Электрофорез проводили в блоках7,57 разделяющем полиакриламидном геле (рН 8,9) и 4 Е концентрирующем,,Размер пластины геля 230 х 90 х 2 мм, , Электродный буфер - 0,1 М трис-гли- , циновый (рН 8,3). Режим фракционирования контролировали по силе тока, В режиме предфореза - 60 мА, при концентрировании - 30 мА,при разделении - 25 , 100 мА, После окончания электрофореза пластину геля помещали на 2-3 мин , в 7 Е-ный раствор уксусной кислоты, затем на 5 мин в окрашивающий раствор (2 г бенэидина растворяли в 1 л кипящей воды, полученный раствор г быстро охлаждали, при этом выпадали розово-серебристые хлопья, добавляли 5 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ЗЗЕ-ной перекиси водорода), затем в35 50%-ный этанол на 15 мин, ополаскивали водой или 107.-ным раствором глицерина, промокали между листамифильтровальной бумагиСухие пробы после 6 мес храненияпри комнатной температуре сохранилиспектр, но пероксидазная активностьгемоглобинов изменилась,Использование предлагаемого способа подготовки, хранения и транспортировки проб гемолимфы позволяетхранить пробы гемолимфы при комнатной температуре до 6 мес, осуществлять подготовку проб в полевыхусловиях в многодневных экспедицияхбез применения специальных реактивов и оборудования, обеспечивает простоту транспортировки проб, пересылку их по почте, в том числе в обыкновенных конвертах,Формул а и э обр ет енияСпособ подготовки пробы гемолимфы для электрофоретических исследований, включающий отбор гемолимфы, хранение и перевод в жидкую фазу, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения подготовки пробы и увеличения сроков хранения, пробу помещают на пластину из инертного материала, высушивают и хранят на воздухеопри температуре не более 25 С, а перевод в жидкую Фазу осуществляют 402-ным раствором глюкозы в трис-глициновом буфере при хранении проб на твердой подложке и 203-ным раствором при хранении проб на фильтровальной бумаге,