Способ определения чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1 111 И 335 5 3 ГЕЫ.33 1,".3 ЕНИЯ е ицинскии инстиМосковский наий институт пеургии. Стефан ем оценянием е относ Изобре еннок медицине,мунологии,для опрек клиническо быть использо эффек тивно с ти и реди она глюкокортикоидзолона) п чйфоцитов к рови же о опуляциеи лимделенияной теных.Цел окортикоидких боль -твительицу теоичение Тф ольного, чув ных к алкало Ри этом увел субпопучяции ию с контролеии не рологич ре зис тенту (Тф) . Пительной ных ия является повыш щение определени дивидуума к глюк мерулонефрите. рет лимфо ци(беэ об чув тов ние точностичувствительнкортикоидам и уп сравнен лимфоц ст в глюкокортикоидо ри гл ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ П 1 НТ СССР ИСАНИЕ ИЭОБР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71 ) Го рько вский ме дтут им. С.М.Кирова иучно-исследовательскдиатрии и детской хи(56) Архив патологии, 1984У 6, с. 21-26,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОРГАНИЗМА К ГЛЮКОКОРТИКОИДАМПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ У ДЕТЕЙ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано дляопределения эффективности глюкокорти-,коидной терапии у нефрологическихбольных. Целью изобретения являетсяповышение точности и упрощение определения чувствительности индивидуумак глюкокортикоидам при гломерулон фрите, Способ включает обработку лимфа цитов больного 1 п чдСго различнымиконпентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой специфического связывания гормона с лимфоцитами, о котором судят по перераспределению подвлиянием гормона 1 п чСго известныхсубпопуляций лимфоцитов теофиллинчувствительной и теофиллин-(ТФ) -реэистетной. При увеличении Тф-чувствительной субпопуляции лимфоцитов посравнению с контролем (беэ обработкиглюкокортикоидом) констатируют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания Тф-чувствительной субпопуляциилимфоцитов констатируют реэистентность индивидуума к 1 ормону, Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности г глюкокортикоидам, котораядоказывается последующей гормональной терапией, и упрощении основныхэтапов выполнения способа. Способ осуществляется пуки перераспределения под влсвидетельствует о чувствительностипа циен та к го рмону, т. е. позволяетпредположить эффективность гхпококортнкоидной терапии, а отсутствие изме 5нений количественного состава ТФ-чувствительной субпопуляции лимфоцитонсвидетельствует о резистентности индивидуума к глюкокортикоидам,П р и м е р. Кровь в количестве3 мл берут натощак из локтевой веныв сбалансированный солевой раствор(3 мл) с гепарином (25 ед,/мл), центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин и20 С; дважды отмывают по 15 мин при1500 об/мин в среде 199, после чегоподсчитывают концентрацию клеток в1 мл и доводят ее до 210 в 1 мл6.средой 199. В 6 пробирок добавляютпо 0,1 мл лимфоцитов и 0,1 мл раствора преднизолона в разных концентрациях. Расчет дозы преднизолона осуцествляют исходя из возможно-создаваемых концентраций его в крови при1 лспользовании терапевтических доз. 25Для расчета был взят произвольныйбес (30 кг) . Учитывая, что кровь составляет 877, веса тела, объем (масса)ее будет равен 2,4 л, 457. составляетклеточные элементы и 557. плазма, следовательно объем плазмы равен 1,3 л,Исходя из дозы предниэолона 1 мг/кгего количество при весе 30 кг равно30 мг. В 1,3 л плазмы будет 0,03 гпреднизолона (0,030:1300), вмлб23 10 , в 0,1 мл 2 10 преднизолона. Готовят следующие разведенияпредниэолона вмл 0,97.-ного раствора ИаС 1:1 1 10 402 2 О3 3 104 105 5 106 . 61045После 45-минутной инкубации при37 С лимфоциты отмывают средой 199,ресуспензируют,и добавляют 0,1 мл5 мМ раствора ТФ. Инкубируютч при37 С, дважды отмывают средой 199,затем ресуспензируют, добавляют0,1 мл эритроцитов барана, инкубируют 1 0 мин при 37 С, центрифугируют5 мин при 1000 об/мин, затем оставОляют на 1 ч при 4 С, после чего фиксируют 0,03 мл глютарового альдегида26 мин, добавляют избыток дистиллированной воды, центрифугируют 10 минпри 1000 об/мин и делают мазки. Число розеток подсчитывают в мазках послефиксации в метиловом спирте и окраски по Браше. За розетку принимаютлимфоцит, присоединивший 3 и болееэритроцитов барана. Результаты выражают в процентах.Если предварительная обработкалимфоцитов преднизолоном 1 п ч 1 ггоприводит к уменьшению ТФ-резистентнойсубпопуляции с соответствующим возрастанием ТФ-чувствительной по сравнению с контролем без обработкипреднизолоном),констатируют чувствительность пациента к глюкокортикоидам. При отсутствии изменений соотношения ТФ-резистентной и ТФ-чувствительной субпопуляций констатируют резистентность к глюкокортикоидной терапии,Положительный эффект способа состоит в повышении точности определения чувствительности пациента к глюкокортикоидной терапии, о чем можносудить только после проведенного курса лечения. Кроме того, предлагаемыйспособ за счет использования функционального подхода при опенке действиягормона на лимфоциты 1,путем регистрации перераспределения ТФ-резистентнойи ТФ-чувствительной субпопуляций лимфоцитов) значительно проще в исполнении в сравнении с известным,Фо рмула изобретения Способ определения чувствительности организма .к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей, включающий обработку лимфоцитов больного 1 п ч 1 г.- го различными концентрациями глюкокортикоида с последующей оценкой из" менения специфического связывания гормона с лимфоцитами по сравнению с контролем, не содержащим глюкокортикоида, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, оценку связывания гормона с лимфоцитами проводят путем регистрации перераспределения под влиянием гормона субпопуляций лимфоцитов чувствительных и резистентных к теофиллину и при увеличении теофиллинчувствительной субпопу- ляции лимфоцитов определяют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастания теофиллинчувствительной субпопуляции лимфоцитов определяют реэистентность индивидуума к глюкокортико идам.