Способ определения антиэритроцитарных антител

(311 А 61 К 39 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ с р фффйфй-С 24Н. Васильева,Оловников ститут химичес- Научно-исследо- по биологическим соединенийименение обы и ки аутоии с от Проблекрови,др.нной я диагностической аней Кумбса.переливания60 рица мы г 1975 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР110 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ(71) Ордена Ленина инкой фиэики АН СССР ивательский институтиспытаниям химических(56) Идельсон Л.И. иагрегатгемаглютинациодругих методов длиммунной гемолиттельной пробоематологии иУ. 8, с. 56(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИЗРИТ РОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ путем вэаимодействия исследуемых эритроцитов.с аглютинирующнм агентом, о т л и .ч а ющ и й с я тем, что, с целью повыщения чувствительности способа, в качестве аглютинирующего агента исполь зуют формалинизированную суспенэию ЯйарЬу 1 ососсов ацгеие, и исследуемыеэритроциты обрабатывают иммунной сывороткой против глобулинов человек или чистыми антителами, полученньви иэ антиглобулиновой сыворотки.П р и м е р 1. Отмытые от сывороантитела против 180 человека (концентрация антител 0,0075 мг/мл). Эритро-ЗО Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения физиологического состояния организма, и может быть применено в иммуногематологии и изосерологии.Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения антиэритроцитарных антител. точных белков эритроциты донора 0(1) КЬ(+) сенсибилиэируют разлцчными разведениями антиреэусной сыворотки (титр в пробе Кумбса 1:64) при 37 С в течение 30 мин. Сенсибилизированные ьп чхСго эритроциты отмывают от несвязавшихся белков антирезусной сыворотки и инкубируют с антиглобулиновой сывороткой в соотношении 1:3 при 37 С в течение. 30 мин. Одну каплю 203-ной взвеси отмытых от не- связавшегося белка эритроцитов смешивают с одной каплей 57-ной взвеси формалинизированного вСарЬу 1 ососсцв апгецв (штамм Соуп Т) и в течение 10 мин регистрируют визуально наличие или отсутствие четкой агглютинации.П р и м е р 2. Применяют чистые циты донора 0(1)КЬ(+) сенсибилизируют разведениями антирезусной сыворотки при 37 С в течение 30 мин. Затем отмытые от несвязавшейся антирезусной сыворотки эритроциты инкубируют с чистыми антителами, выделенными из антиглобулиновой сыворотки, при 37 С во течение 30 мин. Одну каплю 207-ной взвеси эритроцитов, отмытых от несвяэавшегося белка, смешивают с одной каплей 57;ной суспензии ВарЬу 1 о. соссцв ацгецв и регистрируют наличие или отсутствие агглютинации.Как установлено в модельных опы" тах, чувствительность предлаваемого способа (БГ-теста) превышает чувствительность АГА-пробы в антиглобулиновом варианте в 3-6 раз при использовании антиглобулиновой сыворотки и в 10-20 раэ при использовании чистых антител.П р и м е р 3. Больная Ц. О., 4 года 3 мес., поступила в клинику 12 января 1982 г. по поводу анемии неясного генеза в состоянии средней тяжести. Из анамнеза известно, что с октября 1980 г. девочку периодически госпитализировали в больницу 10 15 20 25 по поводу низкого содержания гемоглобина, где ставился диагноз железодефицитной анемии. При поступлении в больницу отмечено наряду с низким содержанием гемоглобина (эритроцитов 1500000, Нв 33 ед) увеличение печени, пальпируется селезенка. Прямая проба Кумбса отрицательная,Одну каплю исследуемых эритроцитов больной, отмытых от сывороточных белков, инкубировали с тремя капля" ми антиглобулиновой сыворотки при 37 С в течение 30 мин, отмывали отанесвязавшихся белков. Одну каплю 207-ной взвеси эритроцитов смешали с одной каплей 5 Х-ной формалиниэированной суспензии 81 арйу 1 ососсцв ацгецв, отметили четкую агглютинацию. Таким образом, с помощью БГ-теста, у ребенка выявлено наличие антиэритроцитарных аутоантител; что позволило поставить диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, Назначено лечение, В анализе крови от 8 Февраля 1982 г. эритроцитов 2400000, Нвед.Предлагаемый способ (БГ-тест) позволяет просто и надежно проводить дифференциальный диагноз больных с клиническими признаками гемолиза, что имеет важное значения для оценки прогноза болезни, решения вопроса о дальнейшем исследовании и выбора метода лечения.Чувствительность предлагаемого БГ-теста при использовании антиглобулиновой сыворотки превышает чувст. вительность пробы Кумбса в 16-32 раза, а при использовании чистых антител - в 128-256 раз. Специфичность предлагаемого способа проверяли исследованием 78 доноров и 23 больных с различными формами анемии неиммунного генеза (железодефицитная анемия, болезнь Маркиафавы Микелли, наследственная микросфероцитарная анемия, анемия, обусловленная дефицитом глюкоз-б-фосфатдегидрогенаэы).Предлагаемый способ высокоспецифичен и чувствителен.Оценка реакции не представляет затруднений. Способ прост в выполнении. Все это существенно расширяет возможности применения предлагаемого способа в клинической иммуногематологии и изосерологии и в биологии для иммунологических исследований на, биологических объектах.