Способ получения гистона из растительного сырья

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 091 1 И ГОС БРЕТ ТЕЛЬСТВУ АВТОРСНОМЪ 3/28-138285. Бюл. В 6роненко, Л.В.И ой бо ентал а Ре 1 страгикосЬугеяся,11 о 11 а1 горЬоея: Спея.-АгорЬуя171-17 т-. ль АРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР АМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ ОПИСАНИЕ(72) А.В.Иии С.Г.Романовская (71) Институт экспер таники им. В,Ф.Купре (53) 615.32(088.8) (56) 1. Байеап Р., Р 1 аГоп 1 а 1 пе 1,-0. Е 1 е Б 1 иду оГ Р 1 ал 1 НяСо чЫЬ 7 егСеЪгаСе НЫ 1 ,оГ ВосЬеш 1 я 1 гу апй 1974, чо 1, 161, 9 1,(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИСТОНАИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ путем гомогенизации, фильтрации, центрифугирова"ния, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения выхода целевого продукта, гомогенизацию проводят в среде, содержащей 0,07-0,08 молхлористого натрия, 0,02-0,03 мольЭДТА, 0,005-0,01 моль пиросернистокислого натрия при рН 7,4-7,6, апосле центрифугирования нз осадка обирают верхний слой и промывают егов растворе, содержащем 0,13-0,15 мохлористого натрия, 0,005-0,01 мольпиросернистокислого натрия при тойже величине рН с последующей экстрацией целевого продукта.Составитель Е,КолчинаРедактор Н.Швыдкая Техред Т.Фанта Корректор И.Эрдейи Заказ 163/4 Тираж 722Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035; Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 1139Изобретение относится к биохимии, а именно к способу получения суммарного гистона иэ растительного сырья.Известен способ получения гистона иэ растений; включающий следующие ;операции: исходную ткань (луковицы5 или проростки растений) гомогенизи" руют в среде, состоящей из, молы сахароза 0,25; хлористый кальций 0003 01 Х тритон Хтрис-НСР 0,05; рН 6,0; гомогенат фильтруют через 8 слоев марли; фильтрат центрифугируют при 100010 мин. Осадок суспендируют в 100 мл раствора, состоящего из 0,08 моль хлористого нат рия, 0,02 моль ЭДТА - БаОН, рН 6,3, перемешивают полчаса и центрифугируют при 1500 Г 10 мин. Осадок суспенди-. руют, центрифугируют с последующей очисткой целевого продукта Я .Однако известный способ не обеспечивает достаточного выхода целевого продукта.Целью изобретения является повышение выхода гистона.Поставленная цель .достигается тем, что согласно способу получения гистоиа из растительного сырья путем гомогениэации, фильтрации, центрифугирования, гомогенизацию проводят в среде, содержащей 0,07-0,08 моль хлорисЗО того натрия 0,02-0,3 моль ЭДТА, 0,005-0,01 йоль пиросернистокислого натрия при рН 7,4-7,6, а после центрифугирования из осадка отбирают верхний слой и промывают его в растворе, содержащем 0,13-0,15 моль хлористого натрия, 0,005-0,01 моль ниро-. сернистого натрия при той же величине рН с последующей экстракцией целевого продукта.40П р и м е р. Исходные семена ржи (сорт Харьковская 60) увлажняют в течение суток между слоями фильтровальной бумаги, смоченной дистиллированной водой. Затем 10 г увлажненных45 таким образом семян гомогенизируют в 437 2яшмовой ступке в 500 мл раствора: 0,075 моль БаС 1: 0,025 моль ЭДТА;0,0075 моль БаЯО, рН 7,5 (доведен" ный с помощью БаОН).Гомогенат фильтруют через 4 слоя капроновой ткани, полученный фильтрат центрифугнруют при 250010 мин, Верхнич светлосерый слизистый слой полученного после центрифугирования осадка хроматин осторожно отбирают шпателем и суспендируют в 100 мл раствора: 0,075 моль БаС 1; 0,025 моль ЭДТА, 0,0075 моль БаЯ 05, рН 7,5 (доведенный с помощью БаОН) и центрифугируют при 250010 мин. Полученный осадок хроматина суспендируют в 100 мл раствора: 0,14 моль БаС 1; 0,0075 моль БаЯ 05, рН 7,5 (доведенный с помощью БаОЙ) и центрифугируют при 25001 О мин. Полученный осадок промывают таким же образом еще один раз. Из полученного осадка хроматина гистоны экстрагируют два раза 1,5 мл 0,4 н Н ЯО 4 по 30 мин с помощью стеклянного гомогеннзатора с притертыми стенками и последующего центрифугирования каждый раз при 18000 10 мин. Супернатанты объединяют и диализуют против дистил лированной воды в течение не более 24 ч. Полученный раствор гистонов замораживают в жидком азоте и лиофильно высушивают, Все операции при выделении проводят при 4 С, растворы готовят на бидистиллированной воде.Выход препарата гистонов составляет 1,15+0,14 мг. Выход препарата гистонов из семян .ржи на 10 г исходных увлажненных семян при известном и предлагаемом способах выделения составляет 0,5+0,05 и 1,15+0,14 мг соответственно.Как видно из представленных данных, предложенный способ позволяет значительно повысить выход суммарно" го гистона нз растительного сырья,