Способ определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ПИСАН ЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНПРОСТЕЙШИХ КИШЕЧНИКА ВИЗ.ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ, вкобработку материала консервантсителем и приготовление мазков-оотличающийся тем, что, с цельюжизнеспособных цист, обработкупри 17 - 24 С в консерванте, сомертиолят, формалин 40%-ный,ловый 96-градусный, генцианвиолелогический раствор при следующшении компонентов, мас. %МертиолятФормалин 40%-ныйСпирт этиловый96-градусныйГенциан виолетФизиологический раствори по степени прокрашиваемостиделяют наличие жизнеспособнпробах. М. Локтева, н и А. Е, Лаптеваледовательский инробиологии и пара. методике лабораиаза. - Медицинзитарные болезни.574,якова Н. В.,Сомо- Определение функ- животных клеток ителей в люминесловиях переживай культуре. - Не- культивирование 7, с. 191 - 194. 0,0016 - 0,00 4,1 - 4,4 10,4 - 10,9 0,023 - 0,029 Остальное клеток опреых цист в(56) 1. Турдыев А, А. Кторной диагностики амебская паразитология и пар1966, т. 35,5, с. 572 -2. Нефедов В. П., Гомва Л. АСадовская Г. М.ционального состоянияметодами витальных красцентной микроскопии в уния и роста в перевиваемпрерывное управляемоемикроорганизмов. М., 19,ЯО 1133493 Ш б 01 М 1/28 А 61 В 10/00 ИЯ ЦИСТ ПРОБАХ лючающий ом с кратпечатков, выявленияпроводят держащем спирт этит и физиоем соотно 1133493Изобретение относится к медицине, а именно к области лабораторных исследований при выделении микроорганизмов из проб окружающей среды.Известен способ определения цист простейших кишечника в пробе, заключающийся в фиксации и окрашивании мазков раствором Люголя 1.Однако данный способ не дает возможности определить жизнеспособные цисты.Наиболее близким к изобретению по технической сущности является способ определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды, включающий окрашивание витальными красителями 12.Однако известный способ также не позволяет выявлять жизнеспособные ц исты, поскольку краситель не содержит консерванта, что приводит к размножению бактерий в пробе.Цель изобретения - выявление жизнеспособных цист.Цель достигается тем, что при способе определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды, включающем обработку материала консервантом с красителем и приготовление мазков-отпечатков, обработку проводят при 17 - 24 С в консерванте, содержащем мертиолят, формалин 40/о-ный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолЕт и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас, /о:МертиолятФормалин 40 О/о-ныйСпирт этиловый96-градусный 10,4 - 10,9 Генцианвиолет 0,023 - 0,029 Физиологический раствор Остальное и по степени прокрашиваемости клеток определяют наличие жизнеспособных цист в пробах. 0,0016 - 0,0018 4,1 - 4,4Способ осуществляют следующим образом. Отбирают пробы из окружающей среды, к пробе добавляют консервант в соотношении 1:2 при 17 - 24 С. Далее из пробы готовят мазки, которые исследуют под микроскопом и по степени проникновения красителя в клетки определяют жизнеспособность цист микроорганизмов. При уменьшении или увеличении температуры при обработке процент гибели цист простейших в пробах увеличивается в 1,3 раза.Пример 1. Берут пробу сточной воды в количестве 10 л на разных этапах ее очистки. Из проб сточной воды получают осадок методом механического обогащения. К осадку при 17 С добавляют консервант, содержащий мертиолят, формалин 40 О/оный, спирт этиловый 96-градусный, генциан виолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас. О/О.Мертиолят 0,0016 Формалин 40 О/о-ный 4,1Ср этиловыи96-градусный 10,4Генцианвиолет 0,023 Физиологический раствор Остальное Далее готовят мазки, которые исследуют под микроскопом.Цисты простейших, не окрашенные красителем, являются жизнеспособными, и по их содержанию определяют общее количество жизнеспособных цист в пробах воды. Дегенерирующие цисты окрашиваются красителем в фиолетовый цвет.В таблице даны сроки хранения жизнеспособных цист лямблий в консерванте при 17 - 24 С. Срок хранения Содержание цист в консерванте лямблей (%)Живые Дегенерирован 24 ч72 ч75 дн. 97 3 97 3 95 5 Пример 2. Пробы почвы смешивают сконсервантом в соотношении 1:2 при 24 С.Консервант содержит мертиолят, формалин 40 О/о-ный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас. /оМертиолят 0,0018 Формалин 40/о-ный 4,4Спирт этиловыи96-градусный 10,9Генцианвиолет 0,029 Физиологический раствор Остальное Далее готовят мазки, которые исследуют под микроскопом.Цисты простейших, не окрашенные красителем, являются жизнеспособными, и по их содержанию определяют общее количество жизнеспособных цист в пробах воды.Изобретение позволяет сохранить жиз неспособные цисты в пробах за счет составаконсерванта, приводящего к гибели сопутствующей микрофлоры и других клеточных элементов, о чем свидетельствует их интенсивное окрашивание красителем, тогда как цисты простейших сохраняют свою жизнеспособность до 94 - 95 О/, в течение 2 мес.от забора пробы. Это особенно необходимо при оценке эпидемиологической роли отдельных факторов передачи, эффективности и качества дезинвазионных мероприятий в очагах кишечно-протозойных инвазий, при определении эффективности лечения больных и прогнозировании развития инвазионного процесса.