Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующей активностью

СОЮЗ СОВЕТСКИХсоцИдлистичесн ихРЕСПУБЛИК ОЮ (11) 159 БРЕТЕН ййцц,дктаъст ельство ССС 56, 1981. ьство СССР 715, 1979. УДАРСТБЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМ,Ф СВ 1(21) 3580458/28-13(72) Р.Г.Оводова, В.И,Молчанова,Ю.С.Оводов, Н.Н.Беседнова,Т.А.Кузнецова и Идалия Перера Гарсия(71) Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточногонаучного центра АН СССР и Научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения АМН СССР(56 ) 1. Авторское свидет РВ 906071, кл. А 61 К 35/2. Авторское свидетелВ 703926, кл. А 61 К 31/(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, 1 ,ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ, включающий гомогенизацию животного сырья, его экстракцию неограническим растворителем, очистку и выделение целевого продукта из супернатанта и диализ против дистиллированной воды, о т.л и ч а ю щ и й с я тем, что, .с целью повышения иммуностимулирукщей активности целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют мантию брюхоногого моллюска Я 1 говдцв ккав, экстракцию проводят 5-ным раствором трихлоруксусной кислоты при соотношении 1:5, а обработку супернатанта - койцентрированным раствором щелочи.1098551 ВНИНПИ Заказ 4275/1 Тираж 688 Подписное Филиал НПП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4 Изобретение относится к химико- фармацевтической промышленности и касается получения биологически активных препаратов из животного сырья,в частности из морских беспозвоночных. 5Известен способ получения углевод-белкового соединения, обладающего иммуностимулирующей активностью, иэ мягкого коралла рзеойорФегоНога 1 а авегхсапа путем гомогенизации ткани, 30 экстракции раствором хлористого натрия, осаждения высокомолекулярной фракции 96-ным этиловым спиртом, диализа и лиофилизации 1 3.Наиболее близким к изобретению является. способ получения средства, обладающего иииуностимулирующей активностью, заключающийся в том, что мантию мидии Сгепоаус 1 оз ягауаацз экстрагируют раствором хлористого натрия, осадок удаляют и надосадочную жидкость обрабатывают смесью хлороформ-бутанол. Выпавший осадок денатурированного белка удаляют центрифугированием, затем врдную фазу отделяют от органической и к водному .раствору добавляют этиловый спирт. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде и диалиэуют. Диалиэонанный. раствор концентрируют н вакууме и ЭО лиофилиэуют. Получают препарат (митилан) в вйде белоснежного порошка,. выход 3 от сырого веса исходного материала. митилан содержит в своем составе полисахаридную 35 (90 ) и белковую компоненты. Полисахаридная часть представляет собой разветвленный Э -глюкан 23. Однако известные способы не обес О печивеют получение препарата с достаточно высокой иммуностимулирующей активностью.Целью изобретения является получение средства с более высокой иммуно стимулирующей активностью и расширение сырьевой базы.Поставленная, цель достигается тем, что при способе получения средства, обладающего иммуностимулирующей активностью, включающем 50 гомогениэацию животного сырья, его экстракцию неорганическим растворителем, очистку и выделение целевого продукта из супернатанта и диализ. против дистиллированной воды, в ка честве сырьяиспользуют мантию брюхонсгого моллюска 81 гощЬив какая, экстракцию проводят 5-ным раствором трихлоруксусной кислоты при соотношении 1;5, а обработку супернатанта - концентрированным раствором щелочи.П р и м е р. 100 г мантии свеже- собранного моллюска Еговьаз 61 ааз измельчают, добавляют 50 мл 5-ного раствора трихлоруксусной кислоты, полученную смесь гомогенизируют в течение 10 мин при +4 С, добавляют 5-ный раствор трихлоруксусной кислоты до 500 мл (исходное сырье: эксстрагент = 1:5), для экстракции смесь оставляют при периодическом перемешивании на 6-10 ч при +4 оС, затем центрифугируют при 3 тыс.об/мин н течение 30 мин, нерастворившийся материал отбрасывают, а супернатант осторожно нейтрализуют (до рН 7,6) добавлением концентрированного раствора щелочи (едкого натрия). Раствор диализуют через целлофан против дистиллированной воды в течение 72 ч при двухкратной смене воды ежедневно. Диалиэат лиофилизуют при заморажина.нии н жидком азоте. Получают биополимер в виде белого порошка (выход 6,5 г на 100 г веса сырого исходного материала) практически свободный от белка (содержание белка около 1). Содержание углеводов в его составе достигает 93,7. По данным хроматографии (бумажная и жидкостная)выделенный полисахарид является глюканом (в кислом гидролизате в качестве единственного моносахарида обнаружена глюкоза).Технико-экономическая эффективность изобретения заключается в возможности получить новое средство, выделенное из мантии моллюска БФговЬцв а 1 аав, которое заметно сильнее стимулирует иммуногенез у животных при экспериментальных инфекциях, что известный препарат митилан из мидий. При этом значительно (н 3-4 раза)возрастают показатели поглоти- тельной и переваривающей активности лейкоцитов крови, усиливается лейкоцитарная реакция, выживаемость животных существенно увеличивается (в контроле все животные погибают, под влиянием митилана ныживаемость сос - танляет 66, под.действием предлагаемого препарата из ЯЬговЬцз К 1 Каз она достигает 85). Кроме того, предложенный способ позволяет расширить сырьевую базу для производства иммуностимулирующего препарата использованием для этой цели мантии моллюска Я 1 говЬцз хав