Способ получения полимерных гидрофильных носителей для хроматографии

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 9) (11) А 3989 59 4 В 01 Т 20/2 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ СССР 1984. 42 о6843,ублик.ИЯ ПОЛИМЕЛЕЙ ДЛЯ НЫХОМАТО ся к областибыть испольсокомолекуляр ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 21) 4169364/23-0522) 29,12,86(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых био."препаратов(56) Авторское свидетельствоУ 1061828, кл. В 01,У 20/22,Насоло Н. Кесепс рго 8 гевв хце 1-расЕдпа шасег 1 а 1 в апййесессопвГог шойегп 1 хцпЫ сЬгошасоягарЬУ дп,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНГИДРОФИЛЬНЬИ НОСИТЕГРАФИИ(57) Изобретение относхимии полимеров и можезовано для разделения ных соддинений с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Изобретение позволяет получать поли" мерные гидрофильные носители для хроматографии, обладающие прочностью до давления 30 Мра, низкой неспецифической сорбцией (7 злюции с носителя 97-1003) и высокой разрешающей способностью . простым и быстрым способом (отсутствует стадия обработки щелочью, а время синтеза сокращено до 5 ч), что достигается использованием для суспензионной сополимеризации глицидилметакрилата и пентаэритритолдиметакриф, лата в качестве органического растворителя для сомономеров смеси изоами- лового спирта,н-бутанола и додекано- , ла,взятых в массовом соотношении (30-35):1,5 :(1-6) или смеси иэоамилового спирта, монохлорбензос ла и циклогексанола, взятых в массовом соотношении (1,5-10) :(2,5-30):(1-30), а также использованием в качестве гидроксилсодержащего соединения моноэпоксиэфира сорбита или гомополисахарида. 3 табл., 4 ил.теля (Солоэа Н) составляет 1000-300000 д.П р и м е р 6. Все операции проводят по примеру 3 но в качестве расФ5 ворителя для мономеров и инициатора используют смесь 30 мас.ч. циклогексанола, 1 О мас.ч. изоамилового спирта и 35 мас.ч. моноклорбензола массовое соотношение 5:17,5 :15,. Область фракционирования декстранов для носителя (Солоэа Н) составляет 10000-1000000 д.П р и м е р 7. Все операции проводят по примеру 3, но в качестве раст ворителя; для мономеров и инициатора используют систему: 2,5 мас.ч,. циклогексанола, 3 мас.ч. изоамилового спирта, 70 мас.ч. монохлорбензола (массовое соотношение 1,5:35;1). Об ласть фракционирования декстранов для носителя (Солоза Н) составляет 100000-40 х 10В табл. -3 приводятся данные по элюции носителями белков, структуре 25 носителей и их физико-химические свойства.Условия проведения экспериментов по декстрановой порометрии одинаковы для всех носителей: колонка 10,0 х 30 х 0,9 см; элюент - дистиллированная вода; скорость подвижной фазы 0,3- 0,4 мл/мин; количество вводимой пробы 50-100 мкл; концентрация декстранов в пробе 0,17, или 1 мл/г; детектор - проточный рефрактометр; температура 20 С; диаметр гранул носителя 50- 70 мкм.На фиг.1-4 приводятся зависимости, характеризующие работу носителей 40 калибровочные кривые элюции белков носителями и хроматограммы разделения белков на носителях.График кривых на фиг,1 показывает зависимость коэффициента распре деления (К ) от логарифма молекулярной массы (1 я Мщ) декстранов для носителей Солоэа Н и ТБК-НЮ, где ( кривые 1-5) - Солоза Н; 50;55; 60; 65 соответственно; ( . кривые 3-5) - ТЯК НЮ; 60; 65 соответственно; ( кривая б) - носитель полученный при использовании циклогексанола для растворения мономеров и инициатора. 55 На фиг2 и 3 показаны калибровочные кривые элюции белков с носителей Солоэа Нн ТЯК-НУсоответствейно.Условия олюции: колонка 0,9 х х 27,7 см; элюент - фосфатный буфер, рН б,б, 0,1 КСЙ; скорость подвижной фазы 23,3 мл/чсм;детектор - УЧ 280;:;206 нм; зернение геля 30-60 мкм,На фиг.4 показаны хроматограммы разделения смесей белков на носителе Солоэа Н: а. 1 - голубой декстран,2-ферритин,3 глобулин;4 --лактоглобулин,5 - цитохром С; б.1 - ферритин (примесь),2 в .ферритин, 3 - -.-лактоглобулин, 4 - рибонуклеаза; в. 1 - голубой декстран, 2 - -глобулин, 3 -4 лактоглобулин 4 - цитохром С, 4 - фрагмент цито- хрома С.Условия разделения; колонка 1,5 х х 37 см; элюент - 1/30 М фосфатный буфер, рН 7,0 + 0,2 М КС; скорость 0,6 мл/мин; температура 20 С детектор - Ч 280 нм.Формула изобретенияСпособ получения полимерных гидрофильных носителей для хроматографии путем радикальной водно-суспензионной сополимериэации раствора соли глицидилметакрилата, пентаэритритолдиметакрилата и инициатора в органическом растворителе в присутствии водорастворимого стабилизатора суспензии и последующей обработки суспензия сополимера гидроксилсодержащим соединением, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения разрешающей способности носителей, снижения их неспецифической сорбции и упрощения процесса, в качестве органического, растворителя используют смесь изоами, лового спирта, н-бутанола и додеканола в массовом соотношении (30-35): :1,5:(1-6) или смесь изоамилового спирта, монохлорбенэола и циклогексанола в массовом соотношении (1,5- 10):(2,5-35,0):(1-30), а в качестве гидроксилсодержащего соединения - мо. ноэпоксиэфир сорбита или гомополисахарида.398902 Таблица Элюция белков с носителя Солоза Ни прототипа Элюируемый белок 3560 х 1 67 х ьбумин 00 х 10 10-Лактоглобули 9 1780 оглобин 000 охр параметрам структуры носителей Солоз и ТЯК-Н аблица нные апаэо молекулярньемых компо э дел Протеинь 00 - 10. 10 100 - 8 ф 10Удельная Носитель ного геля,м /см г5 Солоза Н -60 86,2 115 Прототип ТАК-НЧ1,46 80 140 58,5 1,4 1,46 6 Солоза Н"65 Прототип ТЯК-НЮ63 32,1 Истиннаяплотность,г/см поверхность сухого геля,и /г Удельнаяповерхность влажКоэффициентнабухания вН Ог сухогогеля1398902 оставитель В.Чупехред Л.Олийнык орректор А Обруча Редактор И.Петрова аказ 261 8/7 роектная; ическое предприятие, г, Ужгород,роизводственно-поли Тираж 519 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж, Раушская йаб д. 4/5