Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб

(51)5 А 01 К 61/00 ИСАНИЕ ИЗС)ВРЕТЕ матривает взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешиванйе икры и спермы, В процессе инактивации инактивируют как Х, так и У- низкоактивные спермии. Для этого позтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с. а в 1 орой - за 5 с до перемешивания спермы с икрой; или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавление к ней воды в количестве 5 от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном обьему икры, и перемешивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды. 6 табл,(21) 4794442/13(71) Тихоокеанский отитут ДальневосточСССР ический инс деления АН го ОПЛОРЫБопло- спечива и редусВ качестве прототипа искусственного оплодотво предусматривающий взяти лей половых продуктов, вк тивацию спермиев с У-х обработку для регулирован ев добавлением к икре за 4 вания ее с молоками воды с на 0,5 ед. превышающем реке обитания рыб, или доб в воду перед смешивание этапа - деление порции спе ные части и двухступенчато вой части в воду за 20 с д икрой, а второй - за 5 с д икрой. ному хое качесттва при и может и рыб на ого оплой взятие рмы для миев пураствора нцентрае хлори- мМ. При у выдерм втечевля ется потомс Недостатком этого спосо остаточная жизнестойкосГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(56) Авторское свидетельство СССРМ 891039, кл. А 01 К 61/00, 1980.Авторское свидетельство СССРМ 1361735, кл. А 01 К 61/00, 1986.(54) СПОСОБ ИСКУССТВЕННОГОДОТВОРЕНИЯ ИКРЫ ЛОСОСЕВЫХ(57) Использование: искусственноедотворение икры лососевых рыб, обевающее повышение качествыживаемости потомства. Способ и Изобретение относится к рыбзяйству, направлено на повышенива и выживаемости потомсискусственном оплодотворениибыть использовано при разведенирыбоводных заводах. Известен способ искусственн дотворения икры рыб, включающ половых продуктов, обработку сп инактивации нежизнестойких спе тем добавления к сперме водного хлористого калия с рН 7,0 - 7,4 и ко цией, обеспечивающей содержан стого калия в смеси, равное 20-60 этом перед обработкой икры сперм живают в смеси с хлористым калие ние 3-5 мин. выбран способ рения икры рыб, е у производителючающий инакромосомами, ихия пола сперми- -1 О с до смешио значением рН это значение в авления спермы м с икрой в два рмы на две равго внесения перо смешивания с о смешивания с45 50 55 вследствие того, что инактивация спермиев с У-хромосомами ведет к увеличению числасамок в потомстве, но не обеспечивает достаточного разделения активных и низкоактивных спермиев. Первым периодом 20 сексоздают слишком большие препятствия для спермиев. вследствие чего инактивируютсяне только слабые спермии, но и часть активных спермиев, которые определяют появление жизнестойкого потомства,Цель изобретения - создание условий, приводящих к элиминации спермиев с дефектными генотипами и препятствующих оплодотворению икры низкоактивными спермиями. В результате этого происходит оплодотворение икры высокоактивными спермиями, что приводит к увеличению выживаемости и улучшению качества потомства.Поставленная цель достигается тем, что в способе искусственного оплодотворения икры лососевых рыб, включающем взятие у производителей зрелых половых продуктов,инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, проводят инактивацию низкоактивных как Х-, тэк и У-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления спермы перед перемешиванием на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с доперемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 50 от обьема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном обьему икры, перемешивания спермы с водой и одновременно с икрой после добавления второй порции воды. Известно. что потеря активности спермиев в воде происходит очень быстро: 80- 100 спермиев сохраняют активность в воде до 5-7 с, после 9-11 с пребывания в воде активны 30-70% спермиев, после 13- 16 с - активны 5-300 спермиев, после 18- 20 с - 1-4% спермиев. Поэтому при использовании двухступенчатого добавления спермы к воде порция спермы делится на две равные части, Первая часть добавляется к равному объему воды, быстро в течение 5 с перемешивается, потом в нее добавляется вторая часть спермы, перемешивается. Вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимает 10 с. Укаэанные интервалы выбраны в связи с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды. 10152025 30 35 40 Таким образом, при использовании способа создают условия, препятствующие оплодотворению икры низкоактивными спермиями, приводящие к элиминации спермиев с дефектными генотипами, а следовательно, уменьшению дефектных генотипов в потомстве, но оставляют достаточное количество высокоактивных спермиев,П р и м е р 1. Смесь икры, взятую отчетырех самок горбуши, разделили на двечасти. Для ее оплодотворения использовалась смесь спермы от пяти производителей, Контрольная икра оплодотворялась с использованием заводского метода.При использовании двухступенчатогодобавления спермы к воде порция спермыделилась на две равные части, Первая часть спермы добавлялась к равному объему воды, быстро перемешивалась (5 с). Эта процедура не может быть выполнена за период менее 5 с, так как при этом не происходит полного перемешивания. Затем в эту смесьдобавлялась вторая часть спермы и также перемешивалась в течение 5 с. Смесь сразу после этого добавлялась к икре, Таким образом, вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимала 10 с.Указанные интервалы выбраны в связи с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды, В табл. 1 приведены данные при невысоком уровне гибели икры и личинок. Из примера видно, что использование способа снижает отход при оплодотворении икры и увеличиваетжизнеспособность икры и личинок в процессе развития.П р и м е р 2, Опыты поставлены так же, как и в примере 1. Использовались самки. в икре которых наблюдался высокий уровень отхода, Как видно из табл, 2, положительный эффект предложенного способа в этом случае увеличивается,П р и м е р 3. Изучено влияние различных периодов воздействия воды на спермии горбуши (табл. 3). Из табл. 3 видно, что в М 9 увеличение первого периода воздействия воды на спермии приводит к увеличению гибели икры и личинок; Еще более увеличивается отход при увеличении второго периода (М 10 и 11).Временные интервалы обосновываются необходимостью создания условий для инактивации малоактивных спермиев с одной стороны, и гарантированностью высокого уровня оплодотворения икры - сдругой. Спермии второй части находятся вводе 5+5 с, При этом низкоактивные спермии первой части спермы теряют активность, высокоактивные сохраняютактивность, Если первый период увеличить(й. 9), то начинают терять активность и высокоактивные спермии. Вторые 5 с нахождения в воде влияют на спермии как первой,так и второй части. Однако в связи с тем, что 5к второй порции спермы приливается нечистая вода, а ее смесь со спермой, потеряактивности второй части спермы происходит не столь быстро, как первой. Этим приемом гарантируется полнота 10оплодотворения икры,Следовательно, двухступенчатый способ разбавления спермы, с одной стороны,приводит к отсеву низкоактивных спермиев, а с другой гарантирует высокий уровень 15оплодотворения икры,Аналогичные данные получены для кетыП р и м е р 4, В емкость собиралась 20 икра, которая занимала 1/3 объема емкости, На икру помещалась сперма, На сперму вливался небольшой объем воды - примерно 1/20 (5) обьема икры, Сперма перемешивалась с водой на поверхности икры в 25 течение 5 с. Далее в емкость вливалась вода в объеме, равном объему икры, и сперма перемешивалась со всем объемом воды и .одновременно с икрой. Таким образом; оплодотворение икры осуществлялось в толще 30 воды (табл. 4, М 9), При этом жизнеспособность икры была выше, чем в контроле, хотя и несколько ниже, чем при двухступенчатом способе (ДВС) добавления спермы к воде (табл. 4, М 18), 35В табл, 4 приведены также варианты, когда в сперму перед оплодотворением добавлялась вода в течение 5 с (М 20) и 7 с (М 21). Они свидетельствуют о том, что такой прием резко увеличивает отходы икры, т,е, 40 при этом не гарантируются высокие уровни оплодотворения и развития икры.П р и м е р 5, Изучены размеры - длина от начала головы до выемки хвостового плавника (АС) и масса 5-ти и 6-ти месячных 45 мальков кеты (табл, 5). При использовании двухступенчатого способа оплодотворения 5+5 с длина мальков несколько больше, чем в контроле. Более существенными оказались различия в массе мальков, особенно 50 между ВМ 24 и 25. Очевидно, что повышенная жизнеспособность мальков кеты, возникающая при использовании предложенного способа, проявляется в повышенных тем 55 пах роста и увеличении массы, Была определена масса погибших мальков, Ее показатели у них оказались очень низкими и колебались в пределах 163-276 мг(средний вес 224 мг). Все погибшие мальки были истощенными.Определено соотношение полов при использовании предлагаемого ДВС 5+5 с. В контроле у кеты количество самок было равно 42,7, а при ДВС - 55,2 )ь. Следовательно, в отношении количества самок ДВС также более предпочтителен.П р и м е р 7, В качестве Фактора, препятствующего свободному оплодотворению, была использована вода с различными рН при воздействии на спермии при оплодотворении двухступенчатым методом 15+5 с (табл, 6), В родной реке рН равно 5,5 (М 26), При подкислении воды до рН=5,0 и использовании ее при оплодотворении отход; увеличивается (М 27). Небольшое лодщелочение воды до рН=5,8 по сравнению с контролем (М 28 напротив снижает отходы за инкубацию, что происходит вследствие создания .ограничений в оплодотворении икры низкоактивными спермиями. Повышение рН до 6,8 увеличивает отход вследствие того, что создаются уже существенные препятствия спермиям. Формула изобретения Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб, включающий взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества и выживаемости потомства, при инактивации проводят инактивацию низкоактивных как Х-, так и У-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с до перемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 5) от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном объему икры, и переме-, шивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды,1746959 Таблица 1 Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермыблиц нные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двух пенчатого способа разбавления спермыотходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухсту способа разбавления спермы с различными периодами воздействия воды наспермии перед оплодотворением икры Заложено икры штОтходы икры по сле оплодоторе ния"ьВарианты оплоотворения икры риант 0 0 с 620 21,5 10 5 1024 7,7 1,2 Двухступенчатоедобавление спермы к воде 5+9 с 41 7 Контроль Двухступенчэт добавление спермы к воде 45 сухступенча добавление ермы к вод+5 с ухступенча добавление ермы к водОтходы икры после оплодотворения,о Отходы икры за инкубацию,Отходы на стадии личинки,17 18 Контроль Двухступенчатое добавление спермы к воде 5+5 с Двухзтапное добавление воды при оплодотворении Добавление воды к сперме в течение периода 5 с перед оплодотворением Добавление воды к сперме в течение периода 7 с перед оплоотво ением 11532 3,7 1,9 33,4 19 2490 2,5 1,7 13.7 3,0 2231 18,3 20 1437 16.2 67,7 10,1 21 354 93,0 25,2 Таблица 5 Данные по весу и размеру мальков кеты при использовании различных способов оплодотворенияВарианты оплоотво ения ик ы 6- ти месячные малькиПредставленные па амет ыДвухступенчатое добавление спермы к воде 5:+5 сКонтроль Вес. мгдлина, смВес, мгдлина, см 398,8 3.,6 324,1 3.3Данные по отходам икры и личинок кеты при использовании различных способов оплодотворения ( Соколовский р/3, 1986-1987 гг, ).Демчик ор каз 2447 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Данные по отходам икры и мальков горбуши при добавлении к сперме горбуши воды с различными значениями рН