Способ криоконсервирования ткани

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 93382 1 4 1 00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ИДЕТ ЕЛЬСТВ К АВТОРСКОМ м ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР(56) Авторское свидетельство СССР Ф 572252, кл. А 01 Н 1/00, 1977.(54) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ТКАНИ(57) Изобретение относится к биологии и медицине, предназначено для. ниэкотемпературного консервирования тканей с их последующей трансплантацией. Цель изобретения - повышение эффективности способа за счет сохранения функциональных свойств ткани, Для этого определяют оптимальное время инкубации ткани, для чего определяют температуру начала кристаллизации воды в ткани или максимальное увеличение объема ткани в процессе кристаллизации, строят графики зависимости первого нли второго показателя от времени инкубации и по вреени движения уровня насыщения опре;деляют время и нкубаций ткани . Затем ткань инкубируют с криопротектор ом (107.-ный водный р-р диметилсульфоксида) в течение 5-5 10 с при +10 С. После инкубации ткань охлаждают до -80 С со скоростью 1,5 мин. 3 ил, 3 табл.где ЬЧ макс максимальное изменение1объема образца при егокристаллизации;Ч - значение объема образцапри +10 С (т.е. Чо.Типичный вид зависимости ( --- -=Чо10Е(1) для образцов, инкубируемых в 30 .-ном водном растворе зтиленгликоля, показан на фиг. 3. Иэ графика следует, что оптимальное время инкубации образцов селезенки в данном случае составляет " 9 10 +140 с (15,0+з2,3 мин).Результаты исследования активности включения "4 С-аминокислот в сум-марные белки селезенки после замораживания - оттаивания в зависимости от времени инкубации ее в ЗОБ-ном растворе этиленгликоля (ЭГ) приведены в табл. 2. Представленные данные показывают,25что криозащитное действие ЗОБ-ногораствора этиленгликоля проявляетсятолько после 90 и 120 мин инкубациив них ткани селезенки. В этих условиях .сохраняется 68-707 исследуемойактивности, в то время как после5-60 мин инкубации активность включения фС-аминокислот не превышает4 ЗХ. Дальнейшая инкубация (180 мин)также не приводит к повышению жиз" 35неспособности, что указывает на то,что уже к 90-120 мин инкубации происходит насыщение ткани селезенкиэтиленгликолем, необходимое для проявления ее криозащитного эффекта. 40Способ также применим для определения времени инкубации тканей с непроникающими криопротекторами. Основное действие последних состоит в дегидратации инкубируемых в них тканей, 45Потеря тканью слабо связанной водытакже приводит к заметному уменьшению объемного эффекта при ее кристаллизации, что позволяет и в этом слуопт максчае определять Снк по кривым ДЧ = 50-Е .П р и м е р 3. Щитовидную железубыка разрезают на фрагменты размером2 х 4 х 12 мм и составляют из них образцы для исследований объемом Чо ск 55ф 1 смкаждый,Эти образцы инкубируют раздельно в пробирках, содержащих по 10 смз 307-ного водного раствора ПЭО-ЗООО, который является непроникающим криопротектором. После инкубации вновь замеряют объем образцов Ч и снимают с них дилатограммы в процессе охлаждения от +10 до -80 С по указанной методике. Из полученных дилатограмммаксопределяют МУ как функцию времеКрни инкубации.Данные проведенных экспериментов приведены в табл. 3.Из табл. 3 следует, что по мере увеличения времени инкубации фрагментов железы в ЗОБ-ном водном растворе ПЭОих .объем непрерывно уменьшается, Это демонстрирует эффективность дегидратации тканей в процессе инкубации. Вместе с тем по мере увеличенияуменьшается. и объемный эффект при кристаллизации тка : от 11,5 Х при бринк =О до 3,93 при =600 мин, выходя после 600 мин инкубации практически на насыщение. Исходя иэ полученных данолтных определяют Снк . Принимая за оптвремя, при котором реализуетсяопт 907. защитного эффекта, имеют а в 1 мин + 2,0 мин.Этот результат достаточно хорошо подтверждается данными по исследованию способности щитовидной железы к аккумуляции радиоактивного йода.формула изобретенияСпособ криоконсервирования ткани, включающий инкубацию ткани с криопротектором с предварительным определением оптимального времени инкубации и последующим охлаждением, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения эффективности способа за счет сохранения функциональных свойств ткани, определяют температуру начала кристаллизации воды в ткани или максимальное увеличение объема ткани в процессе кристаллизации, строят графики зависимости первого или второго показателя от времени инкубации и по времени достижения уровня насыщения определяют оптимальное время инкубации.1393382 Таблица 1Включение к контролю,7 Ф 4Условия эксперимента Интактная щитовиднаяжелеза (контроль) 0,169 ф 0,011 Инкубация с 0,97 ИаС 1Инкубация с ДМСО,мин:5 О, 078+0, 006 О, 058+0,009 15 40 60 120 О, 168+0, 015 Таблица 2 Условия эксперимента Включение фС-аминокислотк контролю,7. Интактная селезенка(контроль) О, 294+0, 04 О, 108+0, 06 Инкубацня с 0,9% ХаС 1 0,094+0,01 Инкубация с ЭГ, мин: 3 О, 128+0, 03 30 60 90 0,211+0,04 120 180 О, 196+0, 07 Таблица 3 100% дЧ р Ч%о ин ю мин Включение фЛ к контролю,% 100 0 11,5 10,9 97 86 6,4 30 70 100 600 3,9 58 0,099+0,008 О, 141 ф О, 014 Ое 171+Оэ 015 О, 144+0,02 О, 119+0, 02 О, 189+0, 03 О, 74+0, 02 0,310,01 О, 068+ О, 01 О, 049+0, 02 О, 051+0, 011393382 ю 5 О а а опт бр инк УМУ ИффФФШ инкЧЬг,5оставитель А, Агурееехред М,Моргентал Редактор А. Шандор ер оррект аказ 1899 Проиэводственно-полиграфическое предприятие,город, ул. Проектная/3 Тираж 455 ВНИИПИ Государственног по делам иэобретений 113035, Москва, Ж, РаушПодписноекомитета СССРоткрытийкая наб д, 4/5