Способ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротектором

(57) Игии икотемп ол я низе н с цельюции. Цел ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ 3985502/28-1410.12.8507.09.87. Бюл. 1 Ф 33Институт проблем криобиоломедицины АН УССРТ.П. Линник, В.А,ЧуЛ.Г,Карпенко и Л.А612.015(088.8)Авторское свидетельство С252, кл, А 01 1)1 1/00, 197 СПОСОБ КОНТРОЛЯ НАСЫЩЕНИЯСКОЙ ТКАНИ ЖИДКИМ КРИОПРО бретение относится к бдицине, предназначно длатурной консервации ткпоследующей их транспль изобретения - повыше БРЕТЕНИЯ чувствительности способа. Для этоготкань после определения ее исходноймассы и влажности инкубируют в водномр-ре диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменениемассы ткани, экстрагируют ДМСО хлороформом и определяют концентрацию ДМСИК-спектрофотометрией, рассчитываютнасыщение ткани ДМСО по формуле С+6 щ, где Ч - объем инкубационнойсреды, взятый для анализа; С, - концентрация ДМСО в среде до инкубации;С- концентрация ДМСО в хлороформе;К - коэффициент распределения ДМСО всистеме вода - хлороформ; В - исходная влажность ткани; в - масса тканидо инкубации; ьщ - изменение массыткани после инкубации. 2 табл.Изобретение относится к биологиии медицине и может быть использованопри низкотемпературном консервировании тканей с целью последующей их.)трансплантации.Дель изобретения - повышение чувствительности способа,Поставленная цель достигается тем,что ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируютв водном растворе диметилсульфоксида(ДМСО) и после инкубации определяютизменение ее массы, экстрагируют ДМСОхлороформом и определяют в нем концентрацию ДМСО методом ИК-спектрофотометрии, после чего рассчитывают насыщение ткани ДМСО по формуле С .(1+К) 1+ Ьш100где Ч - объем инкубационной среды,взятый для анализа, мм;С, - концентрация ДМСО в средедо инкубации,7.;С, - концентрация ДМСО в хлороформе,Е;К - коэффициент распределения ЗСДМСО в системе вода - хлороформ, равный 0,058;- исходная влажность ткани,7:- масса ткани до инкубации,г;- изменение массы ткани послеинкубации, г.П р и м е р. Образцы ткани щитовидной железы (5 х 4 х 2 мм) массой 0,2540, 0,2246 и 0,2799 г исходной влажностью 81,87 (влажность определя с ют по известной методике) заливают 2 мп 107-ного водного раствора ДМСО и инкубируют 15, 30 и бО мин при 37 С. Затем от каждой пробы отбирают по 1,5 мл инкубационной среды и при бавляют по 1,5 мл хлороформа. После встряхивания в течение 25 мин и центрифугирования отбирают хлороформен.ный слой и определяют в нем концентрацию ДМСО спектрофотометрически по калибровочной кривой зависимости оптической плотности от концентрации (фиг.1).Спектры снимают на ИК-спектрофотометре н 8 ресогй" в кюветах из СаГ толщиной слоя 0,08 см (в зависимости от концентрации она варьирует в пределах 0,08-5,0 см). В качестве рабочей принимают полосу поглощения валентных колебаний СН -группы(2980- ) в ИК-спектре ДМСО.Кусочки ткани после инкубации промывают путем быстрого погружения вфизиологический раствор и промываютфильтрованной бумагой. Затем взвешивают, определив изменение массы ткани после инкубации, и расчитываютпроцентное содержание ДМСО в тканипо формуле (1).Результаты приведены в табл,1.Из табл,1 видно, что через 15 мининкубации в ткань проникает только3,77. ДМСО, что недостаточно дляконсервирования, через 30 мин в ткани 9,0 Х ДМСО, т.е. то количество,которое обеспечивает криозащитныйэффект, При подготовке данной тканик конвервированию ге необходимо инкубировать в растворе ДМСО не менее30 мин,В табл.2 представлены данные исследования способности щитовиднойжелезы к аккумуляции радиоактивногойода после замораживания в зависимости от времени инкубации.Из табл.2 видно, что ДМСО обеспечивает криозащитный эффект при40 мин инкубации.Предлагаемый способ позволяетопределять концентрацию ДМСО в хлороформе до 10 м, что соответствует-4концентрации ДМСО в инкубационнойсреде 1,5 10 М (т.е. до О,013),следовательно, чувствительность способав 500.раэ выше, чем по известному спо.собу, где чувствительность 57.Формула изобретенияСпособ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротектором, включающий обработку ткани криопротектором с последующим определением его концентрации в растворе, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа при использовании диметилсульфоксида (ДМСО) в качестве криопротектора, ткань инкубируют. в растворе ДМСО, при этом определяют исходный уровень массы, влажность ткани, концентрацию ДМСО в инкубационной среде, объем инкубационной среды после инкубации определяют изменением массы ткани, далее в среду добавляют хлороформ, в хлороформенном экстракте определяют концентрацию ДМСО ме1335238 хл К С (1+К)7 (С -- "- --- )нсх.С В ш- + Ьш100 В ш дш 1 О Таблица 1 Концентрация ДМСО вткани, 7. Концентрация ДМСО вв хлороформе,Е Исходнаямасса,ткани,г Изменениемассы ткаВремя инкубации,мин ни послеинкубации,7 3 ь 7 0,05420,06340,0744 0,2540 0,2246 0,2799 0,55 0,51 9,0 30 0,46 60 Таблица 2 Содержание по отношению к контролю, Х Условия эксперимента Интактная щитовидная железа 0,169-0,011 0,078+0,006 Инкубация с 0,9 Х БаС 1 Инкубация с ДМСО в течение, мин: О, 058+ 0,009 0,099+0,008 15 0,141+0,14 0 171+0 015 60 Составитель Н.ЛитвиненкоРедактор Н.Рогулич Техред В.Кадар Корректор А, Обручар Заказ 3993/6 Тираж 627 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород,ул.Проектная,4 тодом ИК-спектрофотометрии, а насыщение С ткани криопротектором определяют по формуле где 7 - объем инкубационной среды, взятый для анализа; концентрация ДМСО в средедо инкубации;концентрация ДМСО в хлороформе;коэффициент распределенияДМСО в системе вода - хлороформ, равный 0,058;исходная влажность ткани;масса ткани до инкубации;изменение массы ткани после инкубации;