Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей икроликов-mehtabak, способ изготовлениявакцины и способ ee использования

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСоюз Советсних Социалистичесних Республинполнительное к авт, свид 2) Заявлено 07.06.78 (21) 2618901/30 1) .К; . А 61 К 39/0С 12 Х 1/14 С 12 К 1/645 с присоединением заявки Государствеииыи ивмитет СССР(45) Дата опубликования описания 15.07.81 (088.8) о делам изабретеии и открытий 72) Авторыизобретения А Ники ркис ов есоюзныи е имента а Ленина институт ветеринарии(54) ВАКЦИ НА ДЛ Я С П ЕЦИ ф И Ч ЕСКО Й РОфИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ТРИХОФИТИИ ПУШНЪХ ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ МЕНТАВАК, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ А ЦИНЪ И СПОСОБ ЕЕ ИСПОЛЪЗОВАНИЯК 15 Изобретение относится к средствам специфической профилактики и может найти широкое применение в ветеринарной практике для профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов.5Дерматомикозы животных и среди них трихофития пушных зверей и кроликов широко распространены как в нашей, так и в других странах мира. Переболевание зверей трихофитней обесценивает товарные качества шкурковой продукции, срывает племенную работу и планы продажи животных. Больные животные - постоянная угроза и источник заражения обслуживающего порсонала и членов их семей:Средства специфической профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов в отечественной и зарубежной литературе не описаны.Предложенные впервые в мировой прак тике активные средства специфической профилактики трихофитии крупного рогатого скота - вакцины ТФи ЛТФ,30 11 - 3 и трихофитии лошадей 4 не могут быть использованы при трихофитии пуш ных зверей и кроликов, вызванной Тпс)тор)ту 1 оп дурзецгп (Т. гпеп 1 одгортуез), т. к. у животных, иммунизированных ими, не создается иммунитет против данного вида возбудителя трихофитии, Известно, что 3 возбудитель Тпс 1 торпу 1 оп дурзецпт вызывает заболевание у многих видов животных, в т. ч. пушных зверей и кроликов, в отличие от видов Т. еггцсозцгп, Т. е 9 ц 1 пцгп и Т. да 111 пае, в основном выделяющихся от животных определенных видов и,птиц (см. табл. 1 по данным 11 - 4),Данные, полученные при исследовании пушных зверей и кроликов, больных стригущим лишаем в 19 бЗ - 197 б гг., также показывают, что в 90 % случаев от больных трихофитией пушных зверей и кроликов выделяется Тпс)торту 1 оп оурзецтп.Наблюдения и прямые опыты, проведенные на кроликах, серебристо-черных лисицах и песцах, показали, что животные, переболевшие трихофнтпей, вызванной гипсовидным трихофитоном в результате естественного или экспериментального заражения, приобретают иммунитет, но при этом теряются товарные качества шкурок и остается очаг болезни. Это послужило предпосылкой для проведения дальнейших исследований по созданию вакцины против трихофитии пушных зверей и кроликов.Целью изобретения является изготовление высокоэффективной безвредной для человека и животных вакцины для специфической профилактики трпхофитии пушных зверей и кроликов,++ П р и гя е ч а н и е. + - человек, животные, заболевшие при заражении этими возбтлителями,В результате длительной направленно проведенной работы был получен высоко. иммуногенный штамм гриба Тг 1 сЬорЬу 1 оп дурзецгп 135/1963 с повышенными энергией роста, накоплением биомассы и спороношением, полезно измененными культурально-морфологлческими свойствами, резким снижением вирулентных свойств для животных и человека при сохранении иммуногенной активности. Этот штамм был выделен и 1963 г. от серебристо-черной лисицы, больной трихофитией, принадлежащей зверосовхозу Сомовскигй Воронежской областиПолученный штамм зарегистрирован в коллекции культур дерматофитов во Всесоюзном ордена Ленина институте экс.периментальной ветеринарии.Предлагается вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, содержащая культуру гриба штамма Тг 1 сЬорЬу 1 оп дурзешп 1351963 и защитную среду при концентрацци мнкроконидий указанного штамма гриба 100 - 800 млн. на 1 лгл защитной среды следующего состава, вес. %:Сорбит илисахароза 10 - 40Желатин 2,0 - 10,0Вода Остальное.Предлагается также способ изготовления такой вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийся тем, что выращивание гриба проводят при 26 - 28 С в течение 15 - 30 суток.Кроме того, предлагается способ использования этой вакцины, отличающийся тем, что вакцину вводят животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 влил на голову двукратно с интервалами между введениями в 7 - 10 дней.Для получения живой сухой вакцины 5 против трихофитии пушных зверей и кроликов приготовляют две смеси компонентов, содержащие:1) гомогенат живой культуры грибаиммуногенного штамма Т. гпеп 1 одгорЬу 1 ез 10 1351963 в стерильной воде с содержаниемв 1 лгл 200 - 800 млн. живых микроконидий;2) защитную среду, включающую 10 -407, сорбита или сахарозы и 2 - 10% желатина, растворенных в 10 мл воды и про стерилизованных.Смесь первого и второго компонентов всоотношениях 0,5 - с 1 гО к 0,5 - 1,0 послелиофильного высушивания представляет собой вакцину для специфической профилак.тики трихофитии пушных зверей и кроликов.Процесс изготовления предлагаемойвакцины включает выполнение следующих операций:25 а) приготовление питательной среды;б) засев матровых колб и выращиваниегриба;в) приготовление среды высушивания; г) съем культуры с поверхности пита тельной среды;д),измельчение грибницы;е) соединение гомогената с защитноцсредой;ж) дозированный розлив во флаконы;35 з) лиофилизация материала;и) укупорка, этикетировка флаконов; к) контроль вакцины.а Для приготовления, питательной среды стерильное неохмеленное пивное суслоразводят водопроводной водой до содержания 7 - 8% углеводов по Баллингу, подщелачивают до рН 7,0 - 7,4 и растворяют, добавляя при нагревании 2,5 - 3,0% микробиологического агар-агара, затем фильтруют и разллвают до ЗОО мл в матрасы. Стерилизуют при 0,7 атм в течение 40 мин.б) Засеянные матрасы выдерживают в термостате при 26 - 28 С минимально 15, максимально 30, оптимально 2 О - 25 дней. Эти колебания во многом зависят от использованного сусла, сезона года и др.в) В качестве среды высушивания применяют стерильные водные растворы 10 - 40% сорбита или сахарозы и 2 - 10% пищевого желатина или пвптона. Для приготовления этой среды в горячую дистиллированную воду добавляют необходимое количество желатина или пептона и после растворения сорбит или сахарозу фильтруют и устанавливают рН 7,О - 7,4, Стерилизуют три дня подряд: первый день текучим паром 30 мин, второй и третий день 20 лаан текучим паром, затем 40 мин при 0,7 атм.г) Съем культуры проводят в стерильных боксах, для чего специальным скребком снимают грибницу с поверхности сусло-агара и помещают в банки с крышками, Грибную массу снимают, стараясь не захватывать поверхность питательной среды. Сразу после съема грибницу измельчают.д) Размол грибной массы проводят в гомогенизаторах различных систем и коллаидных мельницах, обеспечивающих нужное измельчение и стерильность в работе. Температура во время работы не должна превышать ЗО С. Аппараты загружают из расчета (в конце измельчения): съем грибницы с пяти матрасов в ЗОО мл стерильной воды.е) Гомогенат соединяют с защитной средой в отношениях 1: 1, 0,5: 1 или 1: 0,5 в специальной бутыли, оборудованной воронкой и сифоном для стерильного розлива.ж) Бутыль со смесью устанавливают в шуттель-аппарат и тщательно перемешивают. Затем при периодическом помешивании разливают во флаконы по 50; 100 или 200 доз, что при концентрации микроконидий в вакцине 400 млнмл составляет соответственно 12,5, 5 и 10 мл.з) Кассеты с флаконами под двухслойными марлевыми салфетками после розлива незамедлительно помещают в охлажденную до ( - 40) - ( - 50)С камеру холодильника для быстрого замораживания. Через 12 - 16 ч хорошо промороженные флаконы с вакциной быстро (не допуская оттаивания биопрепарата) перегружают в подготовленную и охлажденную камеру сублиматора (типов КС-ЗО, ТГи др.), подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы. Спустя 1 - 3 ч при достижении показателей вакуума 8 -1 О мВ включают нагрев полок до 30 - 40 С, Нагрев поддерживают таким, чтобы в продукте температура каждый час повышалась на 1 - ,3 С, при температуре продукта 8 - 10 С нагрев снижают до 25 С и поддерживают до окончания сушки. Температура продукта не должна превышать 25 С.Продолжительность сушки в аппарате КСпри полной загрузке и разливе во флаконы по 10 мл (200 доз) составляет 90 - 96 ч.и) После завершения сушки флаконызакрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают.15 к) Для проверки показателей качествапрепарата от каждой серии отбирают по 20 флаконов, 10 используют для испытания качества, другие 10 хранят в архиве. Вакцину контролируют на следующие показа тели: определяют внешний вид, наличиемеханических примесей, растворимость, остаточную влажность, чистоту в бактериальном отношении и в отношении плесени, содержание и жизнеспособность микрокони дий, безвредность и иммуногенная активность. Содержимое флаконов при внесении в них стерильной воды илп физраствора должно раствориться без остатка в течение 2 - 3 мин и не содержать механических 30 примесей (осколки стекла,и др,), Прп высевах на сусло-агар, агар Чапека, МПА, МПБ и Китт-Тароцци посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры. Остаточная влажность долж на составлять не менее 1,0 и не более 3,5%,Концентрация микроконидий в разведенной для употребления вакцине 10 - 20 млн/мл, жизнеспособность не менее 10 млн/мл.Безвредность и иммуногенную активность 40 проверяют на кроликах. Пяти кроликам весом 2,5 - 3,0 кг внутримышечно в область бедра вводят по 1,0 мл вакцины, повторно через 7 дней в той же дозе в то же место, Через 5 - 10 дней после второго введения 45 на месте инъекции на коже может образоваться поверхностная корочка диаметром до 5 - .10 мм. Спустя ЗО - 40 дней 5 иммунизированных и 5 контрольных (не иммунизированных) кроликов подвергают экспериментальному заражению путем втирания в скарифицированный участок кожи гомогената вирулентной культуры гриба Тп- с 1 торЬу 1 оп дурзецгп. Срок наблюдения ЗО - 35 дней. Из 5 иммунизированных кроликов 4 не должны заболеть трихофитией, не менее 4 контрольных должны проявить клинические признаки трихофитии, которые подтверждают результаты микроскопических исследований.Пример конкретного выполнения вакцины и способа ее изготовления.Для приготовления одной серии предлагаемой вакцины в количестве 300 тыс. доз производят засев 200 матрасов культурой Тг 1 сйорЬу 1 оп дурзешп 135/1963. Через 20 -835446 Вакцина сохраняет иммуногенную активность и годна к применению не менееодного года при хранении при 4 - 8 С.Вакцину применяют с профилактиче.. 5 ской и лечебной целью для иммунизациимолодняка, взрослых лисиц, песцов и кро.ликов путем двукратного с интервалами в7 - 10 дней внутри мышечного введения свнутренней стороны бедра в следующихпрофилактических дозах, лгл:Молодняк серебристо-черных лисиц, песцов возраста 1 - 4 мес, 1Старше 4 мес. и взрослые 216 Кролики с 45 дней 1С лечебной целью вакцину вводят потой же методике в удвоенных дозах.На месте введения у животных наблю.дается образование спустя 10 - 15 дней не.20 большого (диаметром до 2 - 8 мл) трихо.фитиеподобного пятна - специфическаяреакция на введение, которая спонтаннопроходит через 15 - 20 дней.Иммунитет у привитых животных на 26 ступает через 20 дней после вакцинации.Продолжительность иммунитета не менеедвух лет,В соответствии с разрешениями Главных управлений ветеринарии МСХ СССР и30 РСФСР было изготовлено 437 тыс. дозопытных серий вакцины, которая была испытана на 87,4 тыс, лисиц и песцов,10,8 тыс, кроликов в пяти крупных зверосовхозах и двух кроликокомплексах, ста 35 ционарно неблагополучных по трихофитии,При этом установлено, что вакцина безвредна, не реактогенна, не оказывает отрицательного действия на воспроизводство,создает у 99,2 - 99,8% животных напряжен.40 ный иммунитет, что позволяет предохранить их от заболевания (см. табл. 2).Таблица 2 Итоги испытания вакцины против трнхофитии пушных зверейв неблагополучных звероводческих хозяйствах (1976 - 1977 гг) Вакцнннровацо Заболело всего голов Ю Лд:1 нснца1 с ссцЛисица 7.160 4838 99,9 99,9 2 , 8 0,1 О, 87487 96 200,2 99,8 Всего: 1 О 1 рнмечаиие; В указанных хозяйствах в голы, предиестзу 1 сгцис заболева ло ьт 10 до 40 % животных.25 дней матрасы с выросшей культурой тщательно просматривают и при малейшем подозрении на загрязнение выбраковывают. Прпготавливают 4,5,г защитной среды и проверяют ее на чистоту. Проводят пробный размол съема культуры с 5 матрасов в 300 лг г стерильной воды и подсчет количества микроконидпй и определяют необходимое для размола количество матрасов с культурой с тем, чтобы содержание микрокониднй в гомогенате составляло 400 млн/лгл. Если содержание микрокониднй выше 400 млн/лгл, то количество матрасов уменьшают, если ниже, то увеличивают. Затем с матрасов снимают необходимое количество грибницы. Установлено, что с одного матраса минимально можно получить 1600, максимально 2400 и оптимально 2 ООО доз вакцины (одна доза - 1 лг,г разведенной вакц ны, содержащей 20 млн/лгл микроконидий), Таким образом, максимальное количество матрасов для приготовления одной серии вакцины в количестве ЗОО тыс. лоз 190, минимальное 125 и оптимальное 150. К гомогенату добавляют защитную среду, перемешивают и разливают во флаконы. При розливе по 10 лл (200 доз во флакон) количество составляет 900 шт., 5 лг г (1100 доз) - 1800, 2,5 лгл (50 доз) - 3600 шт. Возможен и другой метод нивелировки количества микроконидий в вакцине путем изменения соотношения гомогената с защитной средой.,При этом также определяют содержание микроконидий в гомогенате культуры и за счет уменьшения или увеличения точно рассчитанного количества защитной среды (но не более чем соотношения 0,5: 1 и 1: 0,5) достигают нужного соотношения,Лулру" Эстонской ССРКретннгское" Литовской ССРСомовский" Воронежской обл.,Тобольский" Тюменской облОПХ НИИПЭК .Чосковс,:он применению вакцины, трнхофнтней835446 10 Формула изобретения Составитель А. МакаровТехред А. Камышникова Корректор И. Осиновская Редактор 3. Бородкина Заказ 779/620 Изд. Мо 397 Тираж 694 Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк, фил. пред, Патент Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, отличающаяся тем, что содержит культуру гриба штамма Тг 1- сЬорйу 1 оп дурзецтп 135/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба 100 - 800 млн на 1 лл защитной среды следующего состава, вес, %:Сорбит или сахароза 10 - 40 Желатин 2,0 - 10,0 Вода Остальное.2. Способ изготовления вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийся тем, что выращивание гриба проводят при 26 - 28 С в течение 15 - ЭО суток. 3. Способ использования вакцины, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что вакцину вводятживотным внутримышечно с внутреннейстороны бедра в дозах 0,5 - 10 мл на голо 5 ву двукратно с интервалами между введениями в 7 - 10 дней,Примечание: Изобретение носит комплексный характер и его целесообразно защитить как состав, способ его изготовления10 и способ, использования,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе:1. Авторское свидетельство СССР15 372864, А 61 К 39/00, 1971.2, Патент Франции 2189022, С 12 К 5/00,1974.3. Авторское свидетельство СССР268593, А 61 К 39/00, 1974.20 4. Авторское свидетельство СССР548947, А 61 К 39/00, 1976.