Средство, проявляющее противоожоговую активность

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 9) (11) 1 АЗ 51)5 А 61 К 31/2 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНВЕДОМСТВО СССР(71) Институт биологиного отделен ия А Н С.П.Касллов Даль осточ- В,Додицине, а ений, воза на пораят смеси - 3 серии его протиименн никаю женн полиен в каче воожо екарственные средакотерапии для вра, изд, Х, т. 2,бл Содержани начала - эйкоза еновой кислот 100%, Нижняя из того, что уме жание этих ки 30 - 75%.В основу по которым сл раны, были по ределяемые вызванные о из того, что ст сходно с челов ких приз цией аж скопичес овообращ ммыис ыс, восн е предст диагностичес едили за эволю ложены макро нарушения кр жогом. При это роение кожи кр еческой и такж наков, Говой ки опения, одиливном, вляет ОПИСАНИЕ ИЗОБР Изобретение относится к лекарственным препаратам, содержащим органические активные ингредиенты, а именно высшие жирные кислоты,С целью расширения арсенала средств воздействия на живой организм в качестве противоожогового средства в настоящем изобретении применяют омегакислоты.Применение омегакислот из морского сырья при ожоге дало неожиданный результат по качественным и количественным характеристикам, превосходящий результат от применения продажного противоожогового препарата",Линетол" той же природы препарат на основе жирных кислот масла льна),Смесь омегакислот или их производных (например, этиловых эфиров омегакислот) представляет собой маслянистую подвижную жидкость от светло-желтого до слегка коричневого цвета со специфическим "рыбным" запахом. Смесь не теряет жидкую консистенцию даже при -30 С. Смесь не горюча и не имеет в своем составе никаких растворителей. В дальнейшем по тексту смесь омегакислот будет именоваться как препарат омегакислот,ЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕ ОГОВУЮ АКТИВНОСТЬ обретение относится к ме о к фармакотерапии наруш щих при ожогах, Для этог ю поверхность нанос овых жирных кислот омега тве средства, проявляющ овую активность, 2 ил., 2 т е в препарате эффективного пентаеновой и докозагексаможет колебаться от 5 до граница определена исходя ньшение суммарного содерслот ниже 5% значительно или полностью снижает эффективность действия препарата в виду высокого "балластного" содержания других жирных кислот, не обладающих таким действием. Верхняя гра-0 ница соответствует тому моменту, когда в О препарате содержатся только две кислоты - СЛ зйкозапентаеновая и докозагексаеновая О Такой препарат будет обладать наибольшей( эффективностью. Однако, на практике методы получения такого препарата достаточно трудоемки, поэтому, как уже говорилось ра-нее, для применения в медицине эти кисло- ф ты в препаратах концентрируют обычно до .,1собой трехкомпонентную систему, образованную эпидермисом, дермой и подкожной жировой клетчаткой, наиболее выраженной в области спины, В местах, где кожа покрыта волосами, эпидермис у животных построен менее сложно и состоит лишь из трех слоев: базального, шиповатого и рогового, Вследствие этого морфология ожоговой раны крыс отличается от таковой у человека, Так, при ожогахстепени у крыс не происходит образованиепузырей. Кроме того, использованные в наших опытах крысы Вистар - альбиносы, у которых специфическая функция меланоцитов, находящихся в базальном слое эпидермиса, нарушена и они не в состоянии синтезировать меланиновый пигмент.Характерными нарушениями микроциркуляции при термической травме кожи прежде всего являются: двухфазная сосуди. стая реакция (кратковременное сужение и длительное расширение) микрососудов в области поражения; значительное повышение проницаемости стенки посткапиллярных венул, значительное, замедление кровотока (вплоть до его полной остановки - стаза), Наличие сосуцистого стаза является . показателем глубокого поражения тканей,От эритроцитов, вышедших из кровеносного русла в окружающую ткань, происходит отщепление гемоглобина, т.е, гемолиз, который при ожогах весьма типичен, В дальнейшем гемоглобин распадается на ряд продуктов, причем в небольших скоплениях крови, при выходе эритроцитов из сосудов путем диапедеза, обнаруживается только гемосидерин, Он образуется в течение первых 24 ч с момента кровоизлияния, что придает тканям местами ржаво-бурую окраску. На поверхности кожи это проявляется в виде такого вторичного патологического элемента как пятно. Отчетливо выраженный стаз развивается лишь к концу первых суток после ожога. Наличие сосудистого стаза является показателем глубокого поражения тканей, Нередко стазы сочетаются с нарушение трофики тканей. Если подобное явление наблюдается в кожных покровах, то развивается местный некроз, который определяется в виде некротического струпа, Эластичность струпа кожи крыс-альбиносов, как и его цвет(от светло-коричневого до красно- и темно-коричневого), соответствует глубине поражения, той или иной стадии эволюции раневого процесса, а также, насколько мы можем экстраполировать, одной из степеней ожогов, принятых для человека на ХХИ Всесоюзном съезде хирургов в 1960 .На основании вышеизложенного мы сгруппировали ежедневно выявляемые патологические признаки пораженной кожной поверхности в четыре основные группы (по 5 стадиям эволюции ожоговой раны):) кожа на всю толщину эластична, имеются пятна вследствие гемолиза и образования гемосидерина;) кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким светло-коричневым струпом;) кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким красно-коричневым струпом; 15 И) плотный, напоминающий монету, темно-коричневый струп, часто с различным рисунком расширенных кровеносных сосудов в состоянии стаза.Примечание; 20 1, Ни в одном случае в наших опытах с применением вышеуказанных препаратов струп не спаивался с подлежащими мышцами, не расплавлялся, а, при контрольных вскрытиях животных, глубина патологиче ского процесса не доходила дальше подкожной жировой клетчатки.2, После измерения площади, занимаемой патологическим элементом, высчитывали процент этой площади ко всему участку 30 кожной поверхности, который находился в контакте с нагретой частью металлического предмета,3. На четыре группы распределяли иживотных, имеющих ту или иную стадию 35 эволюции ожоговой раны согласно вышеописанным признакам, раздельно по испытуемым препаратам, На каждый день строили гистрограммы распределения крыс. Статистическую обработку проводили 40 в сравнении каждой опытной группы (линетол или препарат омегакислот) с контрольной (вазелин) по формуле:п 102 ., 11+12 где Х - критерий соответствия (критерий2 согласия);1 и 12 - частоты. классов первого и второго рядов; п 1 и п 2 - число особей в каждом из них. Статистически достоверными считали различия при Р0,05.П р и м е р 1, Применение омегакислот как противоожогового средства.В опыте было использовано 63 самки крыс Вистар (из питомника АМН СССР "Столбовая" ) весом 130-150 граммов, которых разделили на 3 группы по 21 животному в каждой, Крысы всех групп находились в клетках по 7 особей, Животные весь период510 15 20 30 40 .проходит быстро и, видимо, менее болез 45 50 55 содержались на стандартной диете, принятой в питомнике, вода аб Ьтоп,группа служила контролем, крысы этойгруппы после ожога обрабатывались вазелином.группа обрабатывались продажнымпротивоожоговым препаратом "Линетол",группа обрабатывалась испытуемымпрепаратом омегакислот(в виде этиловыхэфиров, этих кислот), который представлялсобой, как уже говорилось ранее в описании, маслянистую жидкость светло-желтогоцвета, Суммарное содержание эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот65,8% (эйкозапентаеновой - 33,0%, докозагексаеновой -32,8%). Остальные жирныекислоты, как минорные компоненты, суммарно составляли 34,2%.Перед экспериментом, под легкимэфирным наркозом тщательно выщипывалишерсть с участка кожи размером 25 х 25 ммв области средней трети спины, Ожог вызывали прикладыванием к обнаженной кожемассивного металлического предмета, имеющего в месте контакта ровный круглый выступ диаметром 20 мм. Температураметаллического предмета постоянно поддерживалась регулируемым подогревом,Для получения поверхностной термическойтравмы непосредственно перед отжогомшприцем под кожу вводили до 3 см воздухадля образования в месте контакта воздушной "подушки", Температурная экспозициядлилась 3 секунды, после чего на пораженную кожную поверхность наносили испытуемые препараты комнатной температуры(20 - 22 С) в количестве 150 мг на одно жи-вотное, До полного высыхания препаратакрысы содержались раздельно друг от друга. Эксперимент был проведен с 9 до 12часов, повторно препараты наносили в 1819 ч, Все последующие дни время обработки оставалось прежним, На следующийдень и далее ежедневно с 9 до 10 ч производили осмотр и замер отдельных патологических элементов, образующихся врезультате эволюции окоговой раны, а также их описание согласно методу, предложенному ранее.Результаты обследования приведены втабл, 1, Для наглядности и удобства работыэта же таблица представлена в виде гистрограмм на фиг,1 и 2, Красным цветомвыделена 4-я стадия, как наиболее неблагоприятная, при которой поверхностьпредставляет из себя плотный темно-ко ричневый струп,Как видно из фиг,1, через сутки послеповерхностного ожога кожи крыс металлическим предметом с температурой 80 С в течение 3 секунд, больше половины кивотных, обработанных затем вазелином, имели хорошо определяемую макроскопически гиперпигментацию (в результате распада гемосидерина) и эластичную кожу на месте термической травмы (контакта), Другая часть крыс из этой же группы равномерно "распределилась" по вышеописанным стадиям эволюции ожоговой раны вплоть до некроза и образования твердых, темнокрасных струпьев, заключающих в своей толще ярко-выраженные расширенные тромбированные кровеносные сосуды,Обработка крыс линетолом сдержала развитие патологической картины за исключением седьмой части животных (Р -20,25, см, табл, 1).Обработка препаратом омегакислот стабилизировала на данном этапе патологические процессы на стадии появления пятен(гиперпигментации) (Р 1-з0,01),Вторые и третьи сутки ожоговая рана во всех группах продолжала эволюционировать, но после обработки препаратом омегакислот отмечается статистически достоверное замедление развития патологических элементов: соответственно на 2 и 3 сутки по отношению к контролю Р 1-з0,05 и Рг-з0,025. Обработка линетолом дает при этом Р 1-л0,50 и Р 1-20,75 (см табл, 1).На пятые сутки у крыс, обработанных препаратом омегакислот, только у одной особи появился твердый темно-красный струп, против почти половины таковых в контроле и трети при обработке линетоломНа этот же срок приходится начало отслоения струпьев во всех группах, причем приобработке омегакислотами этот процесс ненно, так как большинство животных в этой группе имеет мягкий и тонкий струп, кожа эластична на всю толщину в месте поражения Р 1-з0,025, у линетола Р 0,90 по отношению к контролю (табл, 1),На седьмые сутки статистически достоверные различия в преимуществах обработки поражений омегакислотами уже составляли Р 1-з0,01, у линетола Р 1-20,50(табл, 1).На девятые сутки струпья во всех группах значительно отходят от поверхности кожи, соединяясь с ней лишь на крайне ограниченном участке в центре, причем при обработке препаратом омегакислот кожа под струпьями эластична и имеет бледнорозовый оттенок, слабо отличаясь от непораженной ожогом кожи, в то время как при обработке вазелином и линетолом она ярко- красная, местами с явлениями вторичногонекроза, т,е. образования вторичныхструпьев, на ощупь утолщена и слабо эластична, с явлениями сращения с подлежащими тканями; что указывает на углублениеожогов.П р и м е р 2, Применение препаратаомегакислот как противоожогового средства,Для подтверждения результатов, полученных в первом эксперименте (пример 1),был проведен повторный эксперимент, нобез линетола, т.к, этот препарат и беэ тогодостаточно апробирован,В опыте было использовано 42.самкикрыс Вистар (из питомника АМН СССР"Столбовая" ) весом 120 - 130 граммов, которых разделили на две группы по 21 животному в каждой. Крысы обеих групп находилисьв клетках по 7 особей, Животные весь период содержались настандартной диете, принятой в.питомнике, вода аб Ьтцп, .группа - служила контролем, крысыэтой группы после ожога обрабатывалисьвазелином,группа - обрабатывалась препаратомомегакислот(в виде их этиловых эфиров),который представлял собой маслянистую. жидкость светло-желтого цвета, Суммарноесодержание эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот 60,0(эйкозапентаеновой - 33,4;4, докозагексановой - 26,6 ).Остальные жирные кислоты. как минорныекомпоненты составляли 40,0 ,Нанесение термической травмы, а также снятия диагностических признаков с последующей их статистической обработкойпроводили как в примере 1,Как видно из фиг.2 в целом повториласьгистограмма распределения животных, обработанных вазелином, по стадиям эволюции ожоговой раны, что и в первом опыте.. Однако в дальнейшем на 2-е, З-и, 5-е суткиданная группа крыс перенесла несколько. более тяжело, чем в первом эксперименте,но практически это различие выразилось вединицах особей,Аналогичная ситуация наблюдалась ипри обработке животных препаратом омега 3 кислот(фиг,2). Тем не менее статистически достоверное различие(Р 1-20,05) по суткамв положительном действии препарата омегакислот не позволяет сомневаться в егоэффективности (достоверность результатов5 по Х см. в табл. 2).Таким образом, описанные наблюдения, их группировка по стадиям эволюцииожоговой раны с последующей статистической обработкой при помощи критерия со 10 ответствия хи-квадрата (Х ) позволяютзаключить, что обработка препаратом омегакислот непосредственно после термического поражения (далее ежедневно) кожикрыс резко задерживает развитие патологи 15 ческих элементов в ожоговой ране, сохраняет эластичность кожи, уменьшаетнекротические процессы, что в конечномсчете менее травматично для пострадавших(пораженных) и обеспечивает более скорое20 и качественное заживление ожоговой раны,исключает вторичные некрозы и углублениеожогов.К достоинствам препаратов омега кислот следует отнести их доступность, т.к,25 способы получения омегакислот хорошоразработаны, безвредность в сочетании свысоким биологическим потенциалом приожогах.В СССР, особенно при дефиците подо 30 бного рода лекарственных средств, исполь-.зование препаратов омегакислотпозволило бы существенно повысить эффективность лечения ожоговых травм и, возможно, в какой-то мере, удовлетворить35 потребности в таких препаратах, В Союзеимеется широкая сырьевая база для получения препаратов, В основном это жиры рыби морского зверя, по которым до сих пор нерешен вопрос утилизации. К тому же разра 40 ботаны технологии получения омегакислот, которые позволяют производить такиепрепараты с хорошим выходом и при минимальных затратах,45 Формула изобретенияПрименение смеси полиеновых жирныхкислот омегасерии в качестве средства, проявляющего противоожоговую активность,Группы/препараты Деление крыс по стадияотезгового процесса 1 сутки 1, Контроль/вазелин 12 3Рс 0,25 (4,200) 3 3 1 1 2. Линетол 18 21 0 0 3. Омегакислоты 0 Р 0,01 (11,454) 2 сутки 1, Контроль/вазелин 8 2 Рс 0,50 (2,667) 3 6 1 10 2. Линетол 8 Омегакислоты ОРсауа 5 (8,191) 87 7 76 Р а,75 (1,295) Ли нето3, Омега кислоты 0 Рс 0,025 (9, 590) 4 8.9 5 6 897 Рс 0,90 (1 у 020) 2. Линетол 3, Омегакислоты 1 Рс 0,025 (9,733) 5 0 6 2 13 Рс 0,50 (2,401) 2. Лннетол О 7 8 3. Омегакислоты 6 Ро,о 1 (12,879) Таблица 2 е Деление крыс по стадии ожогового процесса