Средство для повышения резистентности организма птиц к бактериальной инфекции

(5 о 5 А 61 К 31/535 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) Щ 1, : Е Ь ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ рии, овы- ости рно- хна пти ния исле ани И Сд имитва,естн арст- аряду менение леводстве К АВТОРСКСМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Ленинградский научно-исследовательский институт гематологии и переливаниякрови и Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства(56) Машковский М.Д. Лекарственные средства, М.; Медицина, 1984, т, 2, с. 172.Ерэикян К.ЛТрапков В,А. Гликоэаминогликаны; структура и метаболизм - Известия АН СССР, Биологическая серия, 1988,с. 334-345, М 3,Изобретение относится к ветеринав частности к птицеводству и касается ищения неспецифической резистентнорганизма птиц к инфекции.Существующий комплекс ветеринасанитарных мероприятий, направленныповышение здоровья и продуктивности ицы не всегда дает делаемый эффект, Вцеводстве с целью повышерезистентности организма птиц, в том чк бактериальным и вирусным заболевям, в последние годы на базе сбалансиванных по белку кормоввитаминизированными добавками и доблением микроэлементов используют хко-фармацевтические средсантибиотики, а также биологически актные вещества (БАВ) гормональные вещва тимуса, агаро-тканевые препаранеспецифический авиглобулин, авиамтимоген и др.Однако широкое при еквенных препаратов в птиц , н(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПТИЦ К БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ(57) Использование: птицеводство, Сущность изобретения: в качестве средства, повышающего резистентность организма птиц к бактериальной инфекции, применяют гликозаминогликаны лейкоцитов птиц, Гликозаминогликаны лейкоцитов птиц получают из крови птиц убойных цехов птицефабрик. 3 табл,с профилактическим их действием, способствует появлению устойчивых штаммов микробов и,. следовательно, снижению эффективности лечения; обуславливает появление болезней, вызываемых условно-патогенной микрофлорой, Кроме того, антибиотики обладают выраженным иммунодепрессивным действием. Ассортимент же биостимуляторов невелик, стоимость их высока, Применение синтетических химических препаратов также имеет отрицательные последствия, т.к. многие из них активны и оказывают.влияние на генотип организма. накапливаются в органах и тканях, что ведет к снижению качества продукции.Целью предлагаемого изобретения является повышение резистентности организма птиц к бактериальным инфекциям.Поставленная цель достигается тем, что в качестве средства, повышающего резистентность организма птиц. используют гликааминогликаны лейкоцитов птиц, получаемые в результате нематериалоемкой5 10 20 25 30 35 40 45 50 55 1 еюологии из широкодоступного сырья крови птиц убойных цехов пгицефабрик,Ипы 1 ы по применению гликозоаминогликанов (ГАГ) проводили на цыплятах суточного возраста кросса "Бройлер-б", которым с интервалом 7 дней двухкратно внутримышечно вводили ГАГ в конечной концентрации 20 - 50 мкг на кг живсй массы. Содержание цыплят соответствовало существующей на птицефабрики технологии кормления и выращивания, включающей рецепт кормления; комбикорм ПКи премик витаминный и минеральный.В первые сутки жизни цыплятам внутримышечно вводили ГАГ лейкоцитов птиц в 15 концентрации 10, 25, 50 мкг на кгживой массы, на 7 сутки введение ГАГ повторяли в той же концентрации, После чего спустя еще сутки заражали цыплят Е.со штамм Б-б путем подкожного однократного введения 0,6 мл взвеси (исходная концентрация 1 млрд, микробных клеток в 1 мл среды согласно стандарту мутности). В течение 30 дней велось наблюдение за животными производилось определения показания реэистентности, состава микрофлоры кишечника, осуществлялся учет выживаемости,Воздействие ГАГ на выжимаемость животных,Пример 1. Цыплят суточного возрастаразделяли на две группы по 20 алов в каждой, Одной группе вводили ГАГ в дозе 10 мкгна кг живой массы двукратно, внутримышечно с интервалом 7 дней, Контролем служила группа, не получавшая препарата.Через сутки после повторного введенияпрепарата цыплят опытной и контрольнойгрупп заражали Е,со .Спустя 5 дней выживаемость в опытнойгруппе составила 65%, а через 30 дней -38%. В контроле через 5 дней выживаемость составила 240 , а через 30 дней -0,6 ,Пример 2. Схема опыта соответствовалапримеру 1, но ГАГ вводили в дозе 25 мкг накг живой массы двукратно внутримышечнос интервалом 7 дней,На 5 день после заражения выживаемость в опытной группе составила 53%, а вконтроле - 24 , на 30 день в опытной группе выживаемость составила 240 , в контроле вся птица пала.Пример 3, Схема опыта соответствовалапримеру 1, но ГАГ вводили в дозе 50 мкг накг массы двукратно, внутримышечно с интервалом 7 дней. На 5 день после заражения выжимаемость в опытной группе и контроле совпадала и составила 24 , а на 30 день в опытнойгруппе - 10 %, а в контроле - 0 О .Для подтверждения высокой биологической активности ГАГ эффект его действиясравнивали с таковым тималина, как широко известного иммуностимулятора при острых и хронических инфекциях. Введениетималина проводили внутримышечно по тойже схеме, что и ГАГ в конечной концентрации 200 мг на кг массы (согласно инструкциипо применению).Выживаемость цыплят на 5 сутки послезаражения в. группе, получавшей тималинсоставила 470 , на 30 сутки - 20 , а в контроле, соответственно - 240 и 00 ,Следует отметить, что при введении ГАГв конечной концентрации 20 - 50 мкг на кгмассы выживаемость на 5 сутки была выше,чем в контроле на 30 - 400 , на 30 сутки - на20 - 40%, что дает основание рассматриватьконцентрацию в указанных пределах как оптимальную, в то время как в опыте с тималином выживаемость не превышает твковуюконтрольной группы более чем на 20 .Наряду с интегральным показателем -выживаемость птицы после зараженияЕ.соИ были прослежены показатели резистентности у цыплят контрольной группыбез введения ГАГ, опытных - с,введениемГАГ в конечной концентрации 2050, 100 мкгна кг массы и группы с применением тималина в конечной концентрации 200 мкг на кгмассы (см, табл. 1),Из данных табл, 1 следует, что при введении ГАГ цыплятам, зараженным Е.соИ,штамма Б-б происходит усиление защитыорганизма,В частности, содержание 1 цб повышалось, в среднем, на 500 в опытной группепо сравнению с контрольной, процент розеткообразующих клеток - на 31 . Нарядус этим возрастал фагоцитарный индекс ифагоцитарное. число, что свидетельствует онапряженности фагоцитоэа и усилении поглотительной способности зернистых гранулоцитов.Следует отметить, что результаты, полученныее при введении ГАГ (в оптимальнойконцентрации 20-50 мкг на кг массы) побольшинству рассмотренных параметровне уступают таковым при введении тималина, а по ряду показателей, в т.ч. интегральному показателю выживаемости поголовьяпревосходят.Одним из показателей устойчивости жи.вотных к заболеваниям является качественный и количественный состав микробныхсообществ кишечника, т,к, этиологическимиагентами инфекционных заболеваний всечаще становятся условно-патогенные энтеробактерии и грамотрицательные неферментирующие бактерии, прежде считавшиеся вполне безвредными. В связи с этимбыла поставлена задача проанализироватьпопуляцию условно-патогенной микрофлоры цыплят в описанных опытах,Были проведены исследования содержимого слепых кишок у цыплят в опытах сзаражением Е.соИ: контрольной группы,. опытных - с применением ГАГ с конечнойконцентрации 20 мкг, 50 мкг, на кг массы ив группе с применением тималина,Забор материала производили на 5 сутки после заражения Е,соИ, Гомогенат кишок(1 г) разводили десятикратными серийнымиразведениями, высевали на селективныесреды: Эндо, Хогингера, солевой агар и др,Дальнейшую идентификацию проводили спомощью тест-систем АР 1 20 ЕМ Вар 1 д 20 Е(франция), Для родовой идентификации-галактоэидазы, фенилаланиндезаминазы,уреазной активности, образование индолаи сероводорода, утилизация цитрата и малоната Ма, ферментативной активности поотношению к лактозе и лизину.Спектр выделенных микроорганизмовприведен в табл. 2. Из приведенных данныхследует, что общее количество энтеробактерий кишечника цыплят сокращается в среднем на 2 порядка в опытах с ГАГ итималином по сравнению с контролем. Количество лактозоотрицательных энтеробактерий в опытах с ГАГ сокращалось на 7посравнению с конгдрлем, тогда как при введении тималина наблюдалось снижение на4%. Гемолитические Е.соИ и Рготеоз вообщеотсутствовали в группах с применением ГАГи тималина. Гемолитические кокки в группес применением ГАГ в концентрации 20 мкгна кг массы отмечены в единичных количествах, в группе с применением ГАГ в концентрации 50 мкг на кг массыотсутствовали, тогда как в контроле они составляли 10, Еще более значительным бызло действие ГАГ на Яа 1 топеИа. ПопуляцияЯа 1 попе 1 а сократились в опытах 1 п ч 1 чо сГАГ на один порядок, в то время как тималинпрактически не влиял на их содеожание,Таким образом, применение ГАГ в концентрации 20 - 50 мкг на кг массы йриводитк угнетению роста микроорганизмов условно-патогенной флоры кишечника, что можетспособствовать повышению резистентности организма птиц и увеличению сохранности поголовья.Следует отметить, что ГАГ в опытах иччо обладает высокой биологической активностью в сравнительно-низких концентрациях 20 - 50 мкг на кг массы, что выгоднобавляли ледяную дистиллированную воду в соотношении 1:4 для гемолиза эритроцитов с экспозицией 30-40 сек., после чего раствором 2 н ЙаС доводили концентрацию соли до 0,9 н. Затем полученный гемолиз центрифугировали при 1300 об,в. мин на центрифуге Кпри температуре +4 в течение 10 минут и получали в осадке лейкоциты,Получение ГАГ из осажденных лейкоцитов крови птиц проводили известным методом получения ГАГ из лейкоцитов человека (4).Концентрацию ГАГ определяли карбазольным методом по содержанию уроновых кислот 5). 45 50 На основании химического ферментативного расщепления) и электрофоретического анализа на ацетат-целлюлозной пленке вещества. выделенного из лейкоци 55 тов птиц вышеуказанным способом и ГАГстандартов можно сделать заключение, что полученное средство, повышающее резистентность Организма птиц к бактериальной инфекции является ГАГ и включает 3 фракции: хондроитийсульфат - 8. отличает его от общеизвестного биостимулятора тималина оптимальная доза которого в 4-10 раз выше таковой ГАГ.В связи с проблемой салмонеллеза;5 имеющей место в сельском хозяйстве и вптицеводстве в частности, целесообразнобыло выявить влияние ГАГ непосредственно на данный микроорганизм в опытах 1 пч 1 чо (см. табл. 3).10 Для этого в 1 мл среды с Яагпопе 1 ацаИ 1 пагот, начальная концентрация которой в среде составляла 1 О, 10, 10, вносилиГАГ в концентрации 50 мкг, 25 мкг, 12,5 мкг,6,25 мкг, 3 мкг, 1,5 мкг. Контролем служил 115 мл МПБ с начальной концентрациейЯ.цаИ 1 пагое 10, 10, 10, Пробы сутки вы.держивали в термостате; после чего производился высев на плотную агаровую среду с. последующей инкубацией в течение 24 ча 20 сов при оптимальной температуре, затемподсчитывали количество микроорганизмов,Из данных таблицы 3 видно, что дажетакие низкие концентрации ГАГ как 6,2525 мкг/мл, 3 мкг/мл, 1,5 мкг/мл угнетают ростЯ,9 аИ 1 пагогп на 4-6 порядков в опытах 1 пч 11 го,Сырьем для получения ГАГ служиткровь птиц, получаемая в результате плано 30 вых убоев на птицефабриках.Получение лейкоцитов из периферической крови птиц, взятой в присутствии цитрата натрия в конечной концентрации 0,5проводили следующим путем: в кровь до1794453 Таким образом, применение ГАГ лейкоцитов птиц с целью повышения неспецифической резистентности организма птиц в сравнительно низких концентрациях 20 - 50 мкг нэ кг живой массы способствует усиле Формула изобретения Применение гликозэминогликанов лейкоцитов птиц в качестве средства для повыТаблица 1 Тималин 200 ГАГ 20 мкг/кг ГАГ 50 мкг/кг ГАГ 100мкг/кг массы массы массы мкг/кг массы Контроль 4,03+ 1,93 2,97+ 0,59 2,3+ 0 3,4+ 0,22 3,3+ 0,64 390 мг/мл 25,7+ 4,2 19,7+ 2,9 25,0+ 3,6 25,0+ 2,1 21,0+ 2,7 Фагоцитарный индекс 63,5+ 17,4 80,0+ 2,8 63,5+ 6,2 66,6+ 9,9 43,6+ 7,7Розеткообразующие клетки ф) Бактерицидная активность %) Выжимаемость на 5 сутки %) Выжимаемость на ЗО с тки нию резистентности организма и, как следствие, повышению выживаемости поголовья птиц, что может быть использовано в птицеводстве в качестве профилактического лечебного средства,шения резистентности организма птиц кбактериальной инфекции.1794453 10 Продолжение табл,2 Таблица 3 Корректор Н.Буч Редактор В.Трубченко роиэводственно издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10 аз 383ВНИИПИ Составитель М.ХарченкоТехред М.Моргентал Тираж Подписноеарственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5