Среда для разбавления спермы хряков

Номер патента: 1708327

Авторы: Борисов, Величко, Кравнис, Наумов, Островский

ZIP архив

Текст

(54) СРЕД ХРЯКОВ ый 380,5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт биохимии АН БССР, Гродненский сельскохозяйственный институт,Колхоз "Дубна" Мостовского района Гродненской области и Колхоз "Путь к коммунизму" Гродненского района Гродненскойобласти(56) Походня Г.С Кононов В.ПНарижныйА.Г. Достижения и перспективы метода искусственного осеменения свиней. М,: Россельхоэиздат, 1985, с, 21-23,РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМ Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных,преимущественно к средам для разбавления спермы хряков.Известен разбавитель для разбавленияспермы хряков, имеющий следующий состав; на 1 л дистиллированной воды глюкозы - 46 г (или сахарозы - 92 г), сульфатанатрия безводного - 2,8 г, спермосана 250 000 ед,Однако семя, разбавленное этим разбавителем, следует использовать в течение 2 чпосле взятия, так как при более длительномхранении в известном разбавителе проис, ходят морфофункциональные и физико-химические изменения на клеточном,субклеточном и молекулярном уровнях, чтоприводит к снижению биологической полно(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков. Цель изобретения - повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Среда содержит, г/л: глюкоза 40,0-50,0; ЭДТА (хелатон) 2,6 - 3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8 - 4,5; аммоний сернокислый 1,8 - 2,4; двууглекислый натрий 0,5 - 1,0; спермосан250-500 тыс.ед,; молочнокислый литий 0,12 - 0,32. бидистиллированная вода - остальное, при рН среды 7,0 - 7,3, При использовании среды подвижность сперматозоидов хряков возрастает в 2,5 раза, оплодотворяемость увеличивается на 17";ь, многоплодие - на 294% по сравнению с прототипом. 1 табл,ценности спермиев и их оплодотворяющей способности, а также к уменьшению многоплодия в условиях свиноводческих комплексов.Наиболее близким к предлагаемому является среда для разбавления спермы хряков (ГХЦС), содержащая глюкозу, ЭДТА (хелатон) . лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосани бидистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, г на 1 л бидистиллированной воды:Гл 1 окоэа 40 ЭДТА (хелатон) 2,6 Натрий лимоннокислыйтрехзамещенный пятиводнАммоний сернокислыйНатрий двууглекислый40,0 - 50,02,6-3,3 П р и м е р 1, Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 2,6 г ЭДТА (хелатон-З), 3,8 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 1,8 г сернокислого аммония. охлаждают раствор до 40 С, после чего добавляют 40,0 г глюкозы, 0,5 г двууглекислого натрия, 250 тыс. ед, спермосана-З.и 0,12 г молочнокислого лития при рН среды 7,0, Приготовление среды и разбавление спермы проводят в стерильных 5 условиях. Взятую при помощи искусственной вагины. от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов для определения степени ее разбавления и разбавляют, постепенно приливая среду к Спермосан-З, тыс,ед, 250Бидистиллированная вода ОстальноеОднако известная среда ГХЦС для разбавления спермы хряков не обеспечиваетповышение оплодотворяющей способности 5и подвижности сперматозоидов, по которым оценивают их биологическую полноценность.Целью изобретения является повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов,Указанная цель достигается тем, что всреду для разбавления спермы хряков,включающую глюкозу, ЭДТА(хелатон-З), лимоннокислый трехэамещенный пятиводный 15натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосани бидистиллированную воду, дополнительно вводятмолочнокислый литий при следующем соотношении компонентов, г/л: 20Г люкоэа 40,0 - 50,0ЭДТА (хелатон) 2,6-3,3Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5Двууглекислый натрий 0,5 - 1,0 25Сернокислый аммоний 1,8-2,4Спермосан-З, тыс.ед. 250 - 500Молочнокислый литий 0,12 - 0,32Бидистиллированная вода ОстальноеПри значении рН среды 7,0-7,3. 30Предлагаемую среду для разбавленияспермы хряков готовят следующим образом.Берут 1 л бидистиллированной воды инагревают ее до кипения. В горячей воде 35растворяют, г; ЭДТА(хелатон) 2,6-3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводныйнатрий 3,8 - 4,5; сернокислый аммоний 1,82,4; затем раствор охлаждают до 40 С идобавляют: глюкоза 40,0 - 50,0; двууглекислый натрий 0,5 - 1,0; спермосан250500 тыс.ед. и молочнокислый литий 0,120,32, при этом рН среды 7,0-7,3,Приготовленной средой разбавляютконцентрированную сперму в соотношении 45. 1:13 при температуре среды 37 С,Приготовленная таким образом средаможет использоваться в течение 6 сут отмомента приготовления и храниться в холодильнике при 4-.6 С. 50В предлагаемой среде для разбавленияспермы хряков на этапе отработки оптимальных ее параметров было установлено,что наилучший эффект от использования.предлагаемой среды регистрировался при 5добавлении к известной среде 0.12-0,32 г/лмолочнокислого лития и при значении рНсреды 7,0 - 7,3, при этом соотношение остальных компонентов в среде следующее, г/л: ГлюкозаЭДТА (хелатон)Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5 Сернокислый аммоний 1,8-2,4 Двууглекислый натрий 0,5-1,0 Спермосан, тыс.ед, 250-500 Бидистиллированная вода Остальное Увеличение количества вносимого в среду молочнокислого лития 0,32 г/л, а также превышение верхних пределов количеств остальных компонентов среды (глюкоза,ЭДТА (хелатон-З), лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий и спермосан) ведут к повышению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, для которой предназначена среда, что приводит к значительному снижению подвижности сперматозоидов, Уменьшение количества вносимого в среду молочнокислого лития ниже 0,12 г/л, а также снижение нижних пределов количеств остальных компонентов среды, ведут к снижению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, т.е, среда не будет изотонической, что приводит к снижению биологической полноценности живчиков в семени из-за нарушения структурной целостности акросомы, определяющей взначительной степени оплодотворяющуюспособность. Увеличение водородного показателя рН среды свыше 7,3 ведет к потере подвижности сперматозоидов и снижению оплодотворяемости, а снижение этого показателя ниже 7,0, т.е, при сдвиге рН в сторону кислотности, среда вредно действует на сперматозоиды. при этом снижается их переживаемость, подвижность и биологическая полноценность,Экспериментальные испытания предлагаемой среды на сперме хряков,сперме небольшими порциями, тщательно перемешивая при температуре среды 37 С, учитывая, что температура среды в момент разбавления должна равняться температуре самой спермы, Разбавление приготовленной средой спермы производят в отношении (1:1) - (1;3), Инкубацию семени в среде ведут при комнатной температуре (20 С) в течение 3 сут, После 3-суточной инкубации определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидов составила 7 баллов. В качестве контроля использовали известную среду ГХЦС (прототип)., которой разбавляли взятую у этого же хряка сперму и аналогичным образом, как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 4 балла, что свидетельствует о превосходстве новой среды над известной (прототип) по количеству подвижных сперматозоидов через 3-е суток инкубации,П р и м е р 2, Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,0 г ЭДТА (хелатон-З), 4,2 г лимоннокислого трехэамещенного пятиводного натрия, 2,1 г сернокислого аммония, охлаждают раствор дс 40 С, после чего добавляют 45.,0 г глюкозы, 0,8 г двууглекислого натрия, 350 тыс.ед. спермосанаи 0,24 г молочнокислого лития при рН среды 7,15, Приготовленной средой разбавляют взятую от хряка сперму в отношении (1:1) - (1:3), предварительно определив известным способом активность и концентрацию сперматозоидов, Разбавление спермы средой ведут при температуре последней 37 С, После 3-суточной инкубации семени в среде при комнатной температуре (20 ОС) определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидов составила 8 баллов. В контрольной среде ГХЦС (прототип) подвижность сперматозоидов спермы этого же хряка через 3-е суток инкубации составила 3 балла,П р и м е р 3, Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,3 г ЭДТА (хелатон-З), 4,5 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 2,4 г сернокислого аммония, охлаждают раствор до 40 С после чего добавляют 500 г глюкозы, 1,0 г двууглекислого натрия, 500 тыс,ед, спермосана и 0,32 г молочнокислого лития при рН среды 7,3. Взятую от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов и производят разбавление, приливая среду к сперме. Температура среды в момент раэбавления составляет 37 С, Разбавлениеприготовленной средой спермы производятв отношении 1:3. Инкубацию семени в средеведут при комнатной температуре (20"С) в5 течение 3-е суток, после чего определяютподвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидовсоставила 7 баллов. В качестве контроля10 использовали известную среду ГХЦС (прототип), которой разбавляли взятую у этогоже хряка сперму и аналогичным образом,как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 3 балла.15 Сравнительные испытания контрольнойсреды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды с граничным и оптимальным содержанием количества компонентов (1, 11 и 111варианты) по оценке подвижности сперма 20 тозоидов, как описано в примерах 1-3, проводили на 36 животных по 9 хряков каждойгруппы (контроль и три варианта опыта). Вконтрольной группе подвижность сперматозоидов составила 3,0.0,6 балла (30 по25 10-бальной системе); в опытной группе варианта (содержание компонентов среды внижних пределах) подвижность сперматозоидов составила 7,5+0,7 балла (75 о ); вопытной группе 1 варианта (оптимальное30 содержание компонентов среды) подвижность сперматозоидов составила 8,00,91балла (80 ); в опытной группе 111 варианта(содержание компонентов среды в верхнихпределах) подвижность сперматозоидов со 35 ставила 7,7 + 0,4 балла (77),Использование предлагаемой средыдля разбавления спермы хряков в условияхсвиноводческих комплексов.П р и м е р 4. Готовят среду для разбав 40 ления спермы хряка как опи.ао в примере1. В приготовленной среде на 1 л бидистиллированной воды содержится, г; глюкоза40,0 ЭДТА (хелатон) 2,6; лимоннокислыйтрехзамещенный пятиводный натрий 3,8;45 сернокислый аммоний 1,8; двууглекислыйнатрий 0,5; спермосан250 тыс.едмолочнокислый литий 0,12, рН среды 7,0, Взятуюпри помощи искусственной вагины от хрякасперму фильтруют, определяют известным50 способом активность и концентрацию сперматозоидов и разбавляют приготовленнойсредой, приливая среду к сперме. при температуре среды 37 С, Разбавление приготовленной средой спермы производят в55 отношении 1:1. Приготовленную для осеменения сперму фасуют в тонкостенные флаконы вместительностью 150 - 250 мл, в которыхона может храниться до 6 сут. Флаконы сразбавленной спермой перед осеменениемподогрева 1 от в теплой воде до 35 С, Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 60 голоа в каждой, клинически здоровых с нормальной функцией половых органов, Содержание и 5 кормление животных опытной и контрольной групп было одинаковым и соответствовало санитарно-гигиеническим сл технологическим нормам, Опь:тну.о группу животных осеменюот приотовленной спер мой, разбавленной предлааемой средой, а контрольную - спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип), ОплодотВорЯющу 10 спОсОбнОсть Оценивают пО результатам Опросов, ОплОДОтворЯемость 15 свиноматок опытнойруппы при использовании спермы, разбавленной предлагаемой средой, составляет 75%, а контрольной -г,сс,сОП р и м е р 5. Готовят среду для разбавения спермы хряка как описано в примереВ приготовленной среде на 1 л бидистил рованной Воды сОдержится, Г, Глюкоза 5,0, ЭДТА (хелатон) 3,0; лс 4 моннок.4 слый Оехзамещенный пятиводный натрий 4,2; 25;рнокислый аммонии 2,1, ДВДсглекислыйнатрий 0,8; спермосан350 тыс,едмолоч.окислый литий 0,24 Г, рН среды 7,15. Разавление приготовленной средой спермы производят в отношении 1;1, Приготовлен ную для осеменения сг",ерму фасуют во фЛаКОНЫ. ДЛЯ ОСЕМЕНЕсНИЯ ГОтОВЯт ДВЕ Группь 1 жиВотных (Опытная и контрольная) по 60 голов в каждой. Опытную Группу жиВотных осеменя:от предварительно подогретой до 35 С спермой, разбавленнойпредлагаемой средой, а онтрольную - спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип), Оплодотворя 1 ощую способность оценивают по результатам опо 40 росов. Оплодотворяемость свиноматок ОПЬстНОй ГруППЫ ПрИ ИСПОЛЬЗОВВНИИ СПЕР- мы, разбавленной предлагаемой средой, составляет 80;(с, что на 17; выше, чем ь контроле (63 ф,). 45П р и м е р 6, Готовят греду Для разбавления спермы хряка как описано В поимере 1. В приготовленной среде на 1 л бидистиллированной воды содержится, Г: глюкоза 50,0; ЭДТА (хелатон) 3,3; лимоннокисльсй 50 трехзамещенный пятиводный натрий 4,5; сернокислый аммоний 2,4; двууглекислый натрий 1,0; спермосана500 тыс.ед.; молочнокислый литий 0,32, рН среды 7,3. Разбавление приготовленной средой спермы 55 производят в отношении 1:1. Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 60 голов и каждой, Опытную группу животных Осеменяют предварительно подогретой до 35 С спермой,разбавленной предлагаемой средой, а контрольную - спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип). Оплодотворя 10 щуО сособос оценивают по результатам опоросов, Оплодотворяемость свиноматок Опытной Группы при использовании спермы. разбавленной предлагаемой средой, составляе 7., что на 13;Ь выше, чем в контроле (64%).Кроме указанньх В прсимерах 4-6 испытаний предлагаемой среды для разбавления спермы хряков проводили сравнительные испытания контрольной среды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды, содержащей 001 имальные количества компонентов, Г на 1 л: глюкоза 45,0; ЭДТА (хелатон) 3,0; ЛИМОННОКИСЛЫй тРЕХЗаМЕсЦЕННЫй ПятИВОД- ный натрий 4,2, сернокислый ас 4 моний 2,1; Двууглекислый натрий 0,8; спермосан301 ыс.еД, молочнокисс 11 ЯЙ литий 0,24, пРИ рН 7,15, Всего В сравнительчых испытаниях участвовагО 1200 свиноматок, по 600 ГОЛОВ В контрольной и Опытной ГруГ 1 пах, ОплОДОт" воряющую способногть и многоплодие оце- НииалсЛ ПО РЕЗУЛЬтатам ОПОРОСОВ,Результаты сравнительного си 1 спытанися новой и известной сред предс 1 с зелены в табГсицв,Как видно из данных таблицы., предлагаемая среда превосходит известную (про- тОТИП) ПО ПРсОЦЕНГУ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСтИ СВИНОМВТОК, Так ПРИ ИСПОЛЬЗОВаниси СПЕП- мы, разбавленной предлагаемой средой оплодОтВОряемость свиноматок состаВляет ЬООЬ, ч:о на 17 выше, чем в конгроле, а также по мнагоплодию (11,6 в опыте, 8,2 в контроле) с сохранением живой массы поросят при рождениси,Таким образом, предлагаемая среда для разбавления спермы хряков Обеспечивает повышение подвижности сперматозоидов по сравнению с прототипом и по проценту подвижности сперматозоидов через 3-е су 1 ок хранения в ней превосходит известную В 2,5 раза, а тахжв сОВЫШЕНИЕ ОПЛОдстВОряющей способности сперматозоидов, оцениваемой г с результатам опоросов,Формула изобретения Среда для разбавления спермы хряков, Включающая гло ввозу, хелатон-З, лимонно- кислый трехзамесценный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спсрмосани бидистиллированную воду, от л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения подвижности и оплодот- ВОРс 1 ющеЙ спОсОбнОсти спеРматозоиДОВ, Она дополнительно сод"Ожит молочнокислый литий при следуюсцем соотношении компонентов, гл;Составитель Е, Кузнецовако Техред М,Моргентал Корректор М, Демчик едактор Т, Л Заказ 377 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 оизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород а,1 1 ГлюкозаХелатон Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5Сернокислый аммоний 1,8-2,4 Двууглекислый натрий 0,5 - 1,0 Спермосан250-500 Литий молочнокислый 0,12 - 0,32 Бидистиллированная вода Остальное 5 при значении рН среды 7,0-7,3.

Смотреть

Заявка

4812102, 08.02.1990

ИНСТИТУТ БИОХИМИИ АН БССР, ГРОДНЕНСКИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ, КОЛХОЗ "ДУБНО" МОСТОВСКОГО Р-НА ГРОДНЕНСКОЙ ОБЛАСТИ, КОЛХОЗ "ПУТЬ ККОММУНИЗМУ" ГРОДНЕНСКОГО Р-НА ГРОДНЕНСКОЙ ОБЛАСТИ

БОРИСОВ ВЛАДИМИР МИХАЙЛОВИЧ, ОСТРОВСКИЙ ЮРИЙ МИХАЙЛОВИЧ, НАУМОВ АЛЕКСАНДР СЕМЕНОВИЧ, ВЕЛИЧКО МАГДАЛЕНА ГРИГОРЬЕВНА, КРАВНИС АЛЕКСАНДР АВГУСТИНОВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61D 19/02

Метки: разбавления, спермы, среда, хряков

Опубликовано: 30.01.1992

Код ссылки

<a href="https://patents.su/5-1708327-sreda-dlya-razbavleniya-spermy-khryakov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Среда для разбавления спермы хряков</a>

Похожие патенты