Способ регенерации растений земляники

(21) 446 (22) 16, (46) 23, (71) Це им И, (72) Н, (53) "81 (56) Оз и ягогн стем ат указан ультур Мето,г еские И РАСТ 1:Н 11 г 1 Изо техноло селекци ценных гоифи процесс Цел ние вых также п(57) Изобретение от )осится к биотехнологии и может быть использовано в се. екц: - онных работах для размножения ценньх генотипов, а также для генетического и ф лзиолого-биохимического излучения и роцессов морфогенеза земляники. Целью изобретения является повышение выхода побегов и их укореняемости, а также повышение жизнеспособности расте)Ий-реге ерантов, Поставленная цель достигается тем что на этапе культивирования экслантатов для получения каллусной ткани в питательную среду Мурасиге - Скуга вводят дополнительно 0,5 - 2,0 мг/л кинетина 2 0 - 4,0 мг/л бретение относится к облдсти биогии и может быть использова-)оонных работах для размножениягенотипов, а также для генетическозиолого-биохимического излученияов морфогенеза земляники,ью изобретения является повышеода побегов и их укореняемости, аовышение жизнеспособности растсИЛ.,:Ссн К"С О. ),.с-,3 Г. сЛ,.-сфИ- ггуксусной кислок 1 ри культ 1 в)роваи ,дл-усной ткани, 0 ;Олуче)ия побегод в пи . ГЕ) Ь Ср с" ",с,ОдеК Е .с Гд ВВОДЯТ О 3- 1 0г/л к нет нд, 0,5 2 О 1 г/л гиббе глс)вой кистд Гь г).0 1 ) Г 1 м с л 6-Ое)з)д- миопури):., О 1 О )иг/л и,;,.;,илукс,сгнойМуКОрЕ)Ед И-д;ЕЛЬ",К. ГГ,; )1;ЛСИ,Е Скуга с дсб)двс ., ". 0,3 1,0 к; л гиббси)чдг)- л. л чася)сй , слет-. 3 1.0 с:с)дфТ. ,КсусО ;: . Л. Ь,О Е З 100 ОСС т е л т0 в т;,0, с г"ее., ".И)ел . н О;С ГЕЛЕ суеаС С .д С ) БЕ ЧЕ)М В НсЕ 1 0 3.0 . /л , б с; - .ллс:кисс)0) ы, 3,3- 1 О мигиндслил;дс;ячои кс:0 ь. Способ ПОЗВО,яЕТ -ОЬЬ С;.,с, В, Хгд гООЕ)0) Ос)ЛЕЕ)ЕМ г)д 1 с, укорЛГССВ Л с),;Зд И )ОВЫ- сить жзс .пособос ь рас Они.-Г)егенера; 5 ) 6 "., д 3 о б е с Г е чс д е т ВОЗМОХНО. ь УСКСОЕЯ ";ЕК,060 О Р Д Г, .,; ЕД,) а г .Е -На пергом э-д-е ГОлучдот ка) )усус) Ткань ИЗ ЭКСПЛ.)НДТЕВ ВЕГЕ)ДиЫХ ОРГаноз зе 1 ля)си,и. Б качестве эксп: днтдт;) бе)Оут или верх",ше)чье ме)ис)емь ",л лисгья или поч);и усов. Эксг)ла)таты пимеддют в куль.гураль)ые сосуды содержагцие питатель )у)О сседу, в ко орую дополнител. - О ".ВОДЯТ ЗКЗОГЕНЫЕ РЕгУЛЯтОРЫ Ро; -; ИУГ, ЬИВИГУОт Бс , и ИС ,) , ,( Г Ггг М ОсСД(уе 25"С и освещэнпости 1,5 тыс лкЬ Опыте три повтор):"(1 (0 10(О ку(ьТУРатЬНЫХ СОСУДОС В КЗ)К.г)(,В ка (естве питатег,ьс(:) срець используя)т питательнуо срел с гурв)(Ге т,:к) .асл с ду о ш е.о с оста:) а,1 с 1 акросоли; г/л " 1-,"(С)з . Г 5 1 МИз1 90 Саг 1, 2 НГ) 0 4.( т(сс;гт 7/(,(-)КН)РОЛ 0,17,М;росоли, мг,л; 32;,ДА, г,с 1; ГеЯ(.)1ТН.,О 27 Б 1,ат 1(г,)(Г) О :; г.(;С5 Н 2 г) 0,025 ,.1 зВз Г,2; 1 й.гт.). 4-)Д 22,3;2 г(,(:4 4 Н:.)О 86; КО (1,.;,".:ВС 2 6)1-;О) 0,02".1:1 итак(ивы, мг,л, 1=. (1 Т(амин 0,4 мззглл(Оз(/ т00,0; саха Ооэгсэ 3(О(3 г ф;1 а 30 а Гас)10,0 Г/л,1:( В ОД 5 Т 3 К Э 0 Г ЕсЫ Э 1) С Гя Я т;, р Е 1) 0( га1)5 минимальнсЙ кс 1 ЦВГ Ции, мГл, кинети, 0,5; 2,4 Д 2,0, Г 1,Г; 6 г.,"-,( О 5; И),г 1 "О;(4 У К 3,0; НУК 2,0,Б срецней ко(цогци 1, 1(г,(1: к(с(ьетии1,0; ,4,.;,г(; ГК 2.г; 6 5".11,0 1 г 2,0: И)К4,0; НУК З,г(,5 максимальной кон.,ции, (ИГ/,1, (инетин 2 О 2,4,:( 4,0; 1 К З,О;,": л А 11 Л,О; И с 1 К;),(3,ЦУК 5,0; 1 УКс 1 О,Г) рвэупвтатв 1(3 ГЕрЕС К( 3 с:Е О"ЦЕСТс(ле(:г(я способ) ис эксп г(:.(;ТВ гс . . татВ Ь(Х ОРГстОВ 3(:Ь(ГЯ:ИК Гт( Г; Ча(от Всреднем; при мини(тт)т( сх,цо 63 ках ре)г Ълпоров ро "та - 62,60 . ):) Кугьт ральныхСОСУДОВ С КасЛУСИНД(41 ТК,:1,;К;и Н), Сг);: (1-И61,76 и 84; при м; кс(, Ьгх 1:),.:;,Гс)с)Л, 1),На втором зта )ег:0 ) с а Огт(;, кв)лусн(1:(тк;щей побегл с .г(Ст (1:.(И,Глг зтс о Ол -учен(уо на первом этап:. алтус.(ук) "кагьпс".реносягт В новые куль (ура,5, е со:д(ь, (:оСвзжсй ПтатЕЛЬНОй СрадСЙ Уут).:(Сг(ГЕ Г: .уга, в которро для Образования з 3) ои халЛ У С 1; 0 Й Т К с Н И ДГ ф (1) Е ОС(1( Ц с( Гг) 0 В с Ь( Н Ь Х 3 О Н ИПООЕгав С т(ИСТЬЯ( И,ГЯ)31)ЛЯОт ЭКЗСГЕННЫЕрс. -уля;орь( роста,ОВТОРНОСТЬ ТОЕХКРаТ(С)Я, В Каст)(ОН ПОО кул ьтурал ьт(ь(х кол О.Контролем сл г)ксзт .у( ьтураль(Ь,с Сс)с(г,ЦЬ С Мва(СТЕМат( ЧЕСКИМ( БЕРХУВКасИИ СОГЛ 3 С Н 0 И 3 Б Е СТ Н О М, С П О С Су,ЕГ) ( р П Т у р с)освещснность такие же, как ., (13 пзовоь;эт. пе осутцествления с (осс(ба,Добав(си зкзо, е(ных регул 5 торов (:сс а,Минимальная кон(,е "трэцип. мг "л: (нетин 0,3; ГКО,5; БАГ,(,О (1 УК О,О (- УК 1:,Л,"т)ЕДЯЯ КОНЦЕНТ 133(;(5(, Мг,сл: КИНЕТНОг); ГК 1,0:, 6 БДП 3,0 ИУК 0,5: : (У 1: 0,5,1(Лаксима)Ьна( кснце(РсЦ)(Я, м, и кинегин 1,0; ГК 2,0: 6 ЕИ (:2,0 1 УК 1.0 НгК Б резу,Ьгатеер.:; 2ес, из ксгуснойТка(: Сгт; Э 0(СЯ По, Ег г, ЛИСТЬЯМ. Г;РИминимальт ь; Добавка;( ре угЯтсров,:сстав среднем 2, 2 и 2:. пооегов каждой по 5 .(торт(ос.1, ри (реД(лх - 23, 26 и 2;. Г)римсэт.симал(ЬН.х - 5,2 ч и 2 (,тс,о-. .),регийтат ссуо ествлеия способа(иЦХация р )ста (Ор ВОЙ системы ) ОбеГ О В С Л." СЬ Я М И,, Л 5 Э г О ГО Г) 0 Л У Ч Е Н 1- ы Е Л И С О Т О В Ы Е П О Г) Е (с .Е г) Е С с. Х( И В 3 НЭ т В Н 0 В Ы ЕКУЛЬтУРВЛЬ .Ь:Е СОСЯДЬ СО СВЕжвй ПИтатЕЛЬной средой .урасл е Гкута и с добавкамизкэОГенных регулято.:ОВ рос) а, Выэыва(0 Щ 5 Х РОСТ КО,ЕВ(эй СИ(,тЕХЫ,г рок к,/ль) и Г(и)ОВ 31(ия, 2 мРС. Тег.гВоатура и освещен Ост так(ле же, то и(; )ерВЬ Х З.зг.Х С, (Ц(;СТВ,.( СпосооаГОВ-(ОГЧ(;. Ст, трЭкг.т)ат 35(, В Каждой ПОКУЛЬту рсГ,( .: (ОЛГ,20 Контрог:;:,и служг(- листовые побеГИ,ПОЛУДНЕ(НЫ; сЭ; (ОРИ(.ТЕМВТИЧЕСКХ ВЕРХУВ(ек со ласи.; изеестн иу способу,Дооавги экзс ген( х регуляторов рсс) 3Уи;(ии э.ьт(ая ко (Рн раЦи 5( мГл ГК25 0,.): т 4 У 1 К 1 О 1-(УК 0 д14 К г О,гО",":;Учао",ь(з рг(стен ив-регенеран гы перелО саживак)г и (озь а куг туоальные сосуды сПИтатвг(ьнт и Срвдой (У срас;ИГЕ СКУГ;) С Добавлени:м э:(зсГенных Г)(агу)Яторов )Оста,сОсобс гвуОших пол;чению жизнеспособНЫХ РаТз(-и -"гР НЕОЭЧОВ;)Ок к)Ь) ивирссани пересаженньх рас РсЙ-РСго;(с 03;", ГОБ,) НЕДС(ЛИ,Тат(с,рс) Ог(ие после днего четвертого эта- Г": Полу(,1 ит( растенЙ-регенРрантов земг ЭПИКИ С Г.ЗЕЦЕЛЯЮт - О СсЕЦУ(ОСЦИМ Г)т;ХаэгэгаЛЯ 1. (Е(тРЗЛЬН 35 ОСЬ СтЕОЛЯ ИМЕЕТ максимальчю длину, завершается формирование лис)ОБОЙ пластини, корневая система мочковатая хорошо разветвленная, Макси.аль-Миималь-СредниеМаксималь ,МинимальСредние ные ныеные ные 1,02,0 Кин Повтооность 81 Повторность8 овтор ность ИУК НУК 3 4,0 3,0 66,э,О 4,0 овторности по 100 культуральных сосудов с каллусными тканями каж Минимальная концентрация. мг/л: ГК 1,0, ИМ К 0,3.Средняя концентрация, мг/л ГК 2,0, ИМК 0 5,Максимальная концентрация, мг/л; ГК 3,0; ИМ К 1,0,В результате ере 3 не,зли рагтения регенерангы завершаю- свой цикл развигия; при минимальн.х добавках регуляторов роста в среднем получают 1 Э, 20 и 17 растений жизнеспособных регенерантов; при средних - 21, 22 и 19, при максимальных - 18, 19 и 17 соответственнг (табл. 4).Предлагаемый способ позволяет создавать новые формы растений для селекции земляники, полу гать ценные генотипы при повышенной жизнесгособности и укореняемости растений-регенерантов. Формула изобретения Способ регенерации растений земляни. ки, вк;ючающий в.членене эксплантагов высадку их на питательную среду Мур,сите-Скуга для получения каллусной ткани, последуощее культивирование при освещении (1 - 1,5) лк и температуре 25-27 С до получения пабе;ов. г:ересадку побегов на среду для укоренения и получения растений-регенерэнтов, о т л и ч а ю щ и й с я тем,то, с целью позыв ения выхода побеи; и их укореняемости, а также повышения жизнеспособности растений-регенерантов, высадку эксплантатов осуществляют на 5 питательную среду Мурасиге Скуга, в которую вводят дополнительно 0.5 - 2,0 мг/л киетина. 2,0 -4,0 мг/л Г,-.Д, 1,0 - 3,0 ",г/л гибберслловпй к,аслоты 5,5.-2 0 мг/л 6- бензиламинопурина, 1,0 - 3,0 мг/л индо лилмасляной кислоты, 3,0 - 5,0 мг/линдолилуксусной кислоты и 2,0-4,0 мг/л и -нафтилуксуснои кислотьк культивирование каллусной ткани до образования побегов осуществляют на питательной среде 15 Мурасиге - Скуга с введением в нее 0,3-1,0мг/л кинети,а, 0,5-2,0 мг/л гибберелловой кислоты, 6,0-12 0 мг,л 6-бензиламинопурина, 0,3 - 1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,3 - 1,0 мг/л а -нафтилуксусной кислоты, 20 пересадку побегов осущес.вляют на питательную среду Мурасигс - Скуга с добавлеием 0,3 - 1,0;,г/л гибберелповой кислоты, 1,0-3,0 мгу л индолилмасляной кислоты, 0,3-1,0 мг/л а -нафти,уксусной кислоты, 25 полученные растения-регенеранты культивируот дополнительно в течение 3-4 недель на питатель ой среде Мурасиге - Скуга с введением в нее 1,0-3,0 мг/л гибберелловой кслоты и 0,3-1,0 мг/л индолилмасля,о ной Ислоь., Число культуральных сосудов, образовавших каллус из эксплантатов вегетативных органов зеиляники взависимости от интервалов концеи-раций регулято ов оста6240 С 7 Табл ица 2Збразование листовых побеговиз исходнойаллусной ткани21 ИУК 1 УК Т а б л,. и а 3 Ко,оп,"коренение л хс гоеых побегов, , полуценных из каллус,.ых тканей по предлагаемому способуУкоренение вестовых побегов по лученнь;х из мерл стема 1 ически. верхуп.екпо известномуспособу1Зкзогенныз регул порыатосэ Максимальныее Мини а л(н,7 р, л ь; ы ,. 1,0д О,З И , К201 В.З 221 УК , 03 г: оп ил рел у", сра 1 а ксиС,пе,знаям 1" ь з1.".ини 1 р"1;,ние Повторность иПовторность Повтор нос.гь21 Образованне злгтовых1692409 Та бл и цсэ ч Минииальнь Средн ких верху шек помаль ьные тному особу овторность21,0 овторность 22втор 5 ость Редактор А,Гратилл аказ 4020 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 оизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 10 тПалученне ххненеснасабных аас.тений-регенерантов при введении дополнительного этапа в