Способ определения белка в листьях растений

ИЯ БЕЛКА В ЛИСотносится к биоло-. енно к истьях аниям, в свежи Изобр ческим итрифугируют пр ечение 1-2 мин. зеленого цветаинем светофильт 0 нм). Процентн в листьях рассч ту смесь це 000 об/мин в енный раствор етрируют при а волны 430 + ержание белка о формуле Полуотое (длиределению селектиру использов соел итываю ности о ие времени опреде о ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТПРИ ГКНТ СССР САНИЕ ИЗОБ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Всесоюзный нский институт ка(54) СПОСОБ ОПРТЬЯХ РАСТЕНИЙ(57) Изобретениегическим исследоопределению белк ение относится к биологиледованиям, а именно к опбелка в свежих листьях мых растений, и может быть но в растениеводстве. бретения - повышение точПредлагаемый способ осуществляют следующим образом,Приготавливают биуретовый реактив для чего в 0,2 н, (0,8 Е) растворе ще лочи растворяют 9 г К, Иа винокислого и 3 г сернокислой меди (СцБО) В 10 мл этого раствора растирают в ступке навеску пробы О,1 г листьев до мазеобраэного состояния. Затем 114 А 01 С 7/00, С 01 М селектируемых растении, и может ть использовано в растениеводстве, Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения. Навеску листьев измельчают, взвешивают и обрабатывают биуретовым реактивом, содержащим, К, Иа винокислый при следующем соотношении коМпонентов, г/л; СцБО 2-4, ВаОН 7-9, К, Яа винокислый 8-10, вода дистиллированная дол. Полученный окрашенный центрифугат фотометрируют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле: Х = Э 20, где Х - содержание белка, Хф Э - оптическая плотность . раствора; 20 - коэффициент, перевода, Х. 2 табл. Х = 020,где Р - показатель оптической плности;20 - коэффициент перевода в пценты,П р и м е р 1. Берут навеску0,1 г листьев терескена, помещаютв фарфоровую ступку, растирают с10 мл биуретового реактива состав8 г К, Ма винокислого и 2 г -цБО3 150899 и растворяют в 0,175 н, (0,7%) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭК-. 56 М в кювете 10 мл при синем светофильтре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равный 0,9. Подставляя в формулу, получают содержание белка в листьях 19,47П р и м е р 2. Берут навеску О, 1 г пробы листьев терескена, помещают в фарфоровую ступку, растирают с 10 мл биуретового реактива состава 9 гК,Ыа винокислого и 3 г Сц 801 и растворяют в 0,2 н. (0,87.) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭКМ в кювете 10 мл при синем светофильт ре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равный 1,00, подставляя в формулу, получают процентное содержание белка в листьях терескена 20%.При максимальном количественном соотношении компонентов реактива про центное содержание белка больше 20%, что не соответствует действитель- ности Способ определения белка в листьяхрастений, включающий иэмельчение пробы, ее взвешивание и обработку биуретовым реактивом, центрифугированиеи фотометрирование центрифугата, о т 30 л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращениявремени определения, пробу обрабатывают водным раствором.биуретовогореактива с добавкой К, Иа винокислого,35 а полученный окрашенный центрифугатфотоколориметрируют на синем светофильтре и определяют содержание белкапо формулеХ = Рф 20,.40 где Х - содержание белка, 7.Э - оптическая плотность раствора,20 - коэффициент перевода, 7 Таблица 1 Вид растений Содержание белка, %, по методу 1 Кьельдаля предлагаемому 10,339,947,019,768,715,017,014,5 10,009,807,4019,698,8015,4017,4014,80 Иэень песчаныйИэень МальгуэарскийИэень песчаныйПолынь вытянутаяИэень каменистыйПолынь ферганскаяИэень пустынныйКейреук В табл. 1 приведены сравнительные дойные по содержанию белка в растенИях аридной зоны, определенные по методу Кьельдаля и предлагаемому способу. Как видно иэ табл. 1, величина ошибки определения лежит в интервале 1-3%.Процентное содержание белка стандартных растворов, определяемое по 6 4предлагаемому способу, представлено в табл. 2.По табл. 2, не проводя математических расчетов, можно определять процентное содержание белка, зная оптическую плотность раствора. Например, для терескена получают оптическую плотность, равную 1,00, после расчета получают 207 белка. Если найти в табл. 2 данную оптическую плотность, то ей соответствует 20% белка.Предлагаемый способ является объективным способом определения содержания белка в листьях растений и на проведение анализа затрачивается 45-50 мин.Сокращение времени определения достигается эа счет отсутствия операций осветления и фильтрования через фильтр с пористой пластинкой. Формула и э о б р е т е н и я1508996 11 Содержание белка, 7, по методу Кьельдаля Вид растений предлагаемому 7,94,0020,0010,4011,809,408,8 8,94,1020,0010,0012,009,038,5 Камфоросма фаришскаяКамфоросма джамбульская Количество Содержание белхлорофилла, ка, 7.г Оптическаяплотность Камфоросма стандартнаяСаксаул черныйТерескенИзень каменистыйЧогон 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0,11 0,12 0,13 0,14 0,15 0,16 О, 17 О, 18 0,19 0,2 0,21 0,22 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,3 0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 О, 0001 0,0002 0,0003 0,0004 0,0005 0,0006 0,0007 0,0008 0,0009 0,0010,0011 0,0012 0,0013 0,0014 О, 0015 О, 0016 0,0017 0100180,00190,002 0,0021 0,0022 0,0023 0,0024 0,0025 0,0026 0,0027 0,0028 0,0029 0,003 0,0031 0,0032 0,0033 0,0034 0,0035 0,0036 Продолжение табл. Таблица 2 0,20,40,60,811,21,41,61,82,02,22,42,62,83,03,23,43,63,844,24,44,64,855,25,45,65,866,26,46,66,87,07 21508996 11 родолжение табл,2 Оптическая Количество Содержание белплотность хлорофиллаьг ка, 7Ъ.1 э 08996 10Продолжение табл. 2 Количество Содержание белхлорофилла, ка, 7 ОптическаяплотностьСоставитель Л, .КвардаковаРедактор М, Бланар Техред И.Верес Корректор В. Гирняк Заказ 5744/2 Тираж 621 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина 01 0,89 0,9 0,91 0,92 0,93 0,94 0,95 0,96 0,97 0,98 0,99 1 1 ф 1,2 1,3 1,4 1 ь 5 1,6 1 э 7 1,8 1,9 2 0,0089 0,009 0,0091 0,0092 0,0093 0,0094 0,0095 0,0096 0,0097 0,0098 0,0099 0,01 0,011 0,012 0,013 0,014 0,015 0,016 0,017 0,018 0,019 0,02 17,8 18 18,2 18,4 18,6 18,8 19.19,2 19,4 19,6 19,8 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40