Способ определения физиологической совместимости подвоя и привоя

(191 ( 51) А 01 БРЕТЕНИ ЛЬСТЯ 2) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬ ПИСАНИЕ Н АВТОРСКОМУ(56) 1, Каймакан И.В. Причины гибенекоторых сортов груши, привитых наайве. Садоводство, виноградарствовиноделие Молдавии", 1958, Ф 6,с. 14-16.2. Сафонов В,И., Вайндберг А.Е.Нетождественность белков и ферментных систем как фактор физиологической несовместимости у яблони прискрещивании и прививке. "Физиологиярастений", вып. 5, 1969, т. 16,с. 810-818.(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИЗИОЦОГИЧЕСКОЙ СОВМЕСТИМОСТИ ПОДВОЯ ИПРИВОЯ по изменению их белковогоспектра, отличающийсятем, что, с целью повышения достоверности, белковый спектр определяютв корнях подвоя дважды - до прививки и после прививки, когда глазокпривоя. тронется в рост и будет удалена надземная часть подвоя,1151230 1 О 15 25 ЗО 40 50 55 Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для определения совместимостипрививаемых компонентов - подвояи привоя,Известны различные способы определения совместимости прививаемыхкомпонентов, например, по степениактивности каталазы, согласно которым для хорошей совместимости привоя и подвоя необходимо подбиратьпрививаемые компоненты с одинаковойстепенью активности каталаэы 1 .Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ, в котором соответ"ствие прививаемых компонентов определяют по белковому спектру коры,Из коры прививаемых компонентов приготавливают белковый экстракт, который потом подвергают электрофорезу, в результате чего белки распределяются по зонам, каждая из которых характеризуется своим значениемотносительной электрофоретическойподвижности (ОЭП). При этом считается, что чем больше будет у прививаемых компонентов тождественныхбелков, тем более совместимыми будут зти растения 2,Недостатком известного способаявляется то, что о физиологическойсовместимости судят до прививки компонентов. С биологической точки зрения нельзя считать, что после прививки сохраняется та же активностьпроцессов у привоев и подвоев, таккак образуется совершенно новый организм со свойственным только емуобменом веществ, определяющийся работой корневой системы одного организма (подвоя) и листовым аппаратомдругого организма (привоя)., Растения, считающиеся физиологически совместимыми по данному способупопадая в экстремальные условия (засуха, температурные воздействия),испытывают угнетение иэ-эа нарушения синхронности Физиологическихпроцессов у подвоя и привоя (дыхания, водный обмен, белковый обмен) т.еоказываются физиологически плохо совместимыми,Кроме того, совместимость определяют по белковому составу в проводящих тканях, например в коре, а не в органах, ответственных за синтез, за преобразование метаболитов. Таким образом, такие способы опре.деления фи зи ол огичес кой совме с тимости нельзя считать надежными.Целью изобретения является повышение достоверности определения физиологической совместимости прививаемых компонентов.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения физиологической совместимости привоя и подвоя белковый спектр определяют .в корнях подвоя дважды - до прививки и после прививки, когда глазок привоя тронется в рост и будет удалена надземная часть подвоя.Выбор корней подвоя для определения белкового спектра обусловлен тем, что после прививки образуется единый организм с взаимосвязанными и зависимыми процессами, а корни являются ответственными за метаболизм целого ряда веществ, поступающих иэ листьев и в листья.Изменение белкового спектра корней свидетельствует о лабильности подвоя, т.е, в корнях происходят перестройки под влиянием метаболитов привоя, что указывает на лучшую физиологическую совместимость подвойно-привойной комбинации.Хорошо совместимыми можно считать те комбинации, у которых белковый спектр изменяется больше чем наполовину.П р и м е р . Предлагаемый спосое проверяли на яблоне и груше, Изучали эталонные сорто-подвойные комбинации, выделенные по продуктивности и хорошему состоянию деревьев в саду за много лет наблюдений. Дпя груши помимо подвоев Кавказской и Иволистной изучали грушу Березолистную и разные формы айвы. Из сортов быпи взяты районированные (Вильямс, Кюре), находящийся в испытании сорт Васса. По яблоне были взяты для исследования подвои селекции института 1-48-46 и 1-48-47 сеянцы культурных сортов и М. На них прививали сорта Кальвиль снежный, а на МСтаркримэон и сорт местной селекции Кубань. Для получения исходного материала в первом поле питомника при окулировке подвоев часть их оставляют непривитыми и в последующей работе используют для сравнения с привитыми растениями. После того, как приживется глазок и растения тронутся в рост, можно брать пробы для проверки соответствия сорто-подвойных комбинаций, В естественных условиях, т.е. в питомнике, эти анализы проводят весной. Однако эти сроки могут быть значительно сокращены, если операцию прививки провести в климатической камере в декабре - январе, Анализировать растения можно уже через 1,5 мес 10 после прививки.Для анализа берут растения подвоев и привитые, с них удаляют корни. Берут 1 г навески, заливают трисглицинатным буфером рН - 8,3 с эа щитными добавками и тритоном Хв 17-ной концентрации для суммарного извлечения белков в отношении 1:5. Пробу растирают, помещают на 1 ч в холодильник и затеи центрифу гируют. Центрифугат очищают на сефадексе Ги полученный экстракт наносят на щелочной гель 57-ной концентрации (О, 1 мл) на трубочку для разделения методом диск-электрофоре за. Разделение проводят на приборе 1 1Реанал в течение 1 ч 40 мин в трисглицинатном буфере рН,3 при токе 2 Иана трубочку при концентрировании белков в верхнем геле и 5 мА при разделении. Способ приготовления растворов общепринятый, но концентрацию разделяющего геля подбирают специально для плодовых и винограда, Наилучшее разделение получают в 53-ком геле.35 После разделения извлеченные гели фиксируют в 152-ной трихлоруксусной кислоте (ТХУ) в течение 15 мин, 40 затем отмывают в воде и на 30 мин помещают в окрашивающий раствор амидо-черного 10 В. Отмывку гелей проводят в 7/-ной уксусной кислоте, После обесцвечивания геля на столе45 с подсветом и матовым стеклом замеряют относительную электрофоретическую подвижность (ОЭП) и по количеству общих зон рассчитывают коэффициент родственных белков между50 нескулированным подвоем и после при вивки на него того или иного сорта. По этому показателю,судят о приобретении корнями подвоя в результате прививки новых свойств по сравнению55 с непривитым подвоем, т.е, под действием привоя в подвое появляются новые или исчезают старые белковые зоны, что в процессе дальнейшего роста и развития позволит привитым растениям успешно переносить стрессовые ситуации и сорту полностью реализовать имеющиеся потенциальные генетически заложенные уровни продуктивности.В таблице приведены значения относительной электрофоретической подвижности (ОЭП) белков, извлекаемых иэ корней до прививки и после прививки сорта Вильяма на разные подвои.Степень физиологической совместимости можно характеризовать коэффициентом родственности, который представляет собой отношвние числа одина" ковых зон белкового спектра до прививки и после прививки к числу зон после прививки. Так из таблицы видно, что в опытах, проведенных в июне 1980 г. с подвоем груши сорта Кавказская, число одинаковых зон, т.е. зон с одинаковым значением ОЭП, равнялось 7, число зон после прививки - 1 О. Следовательно, коэффициент родственности равен 0,7/7:10=0,7). Эти коэффициенты для других опытов приведены в таблице. Хорошо совместимыми можно считать комбинации, у которых коэффициент родственности равен 0,3-0,4, сред- несовместимыми - с коэффициентом 0,5-0,6 и плохо совместимыми - с коэффициентом 0,7-1,0. Предлагаемый способ определения физиологической совместимости привоя и подвоя отражает реакцию нового привитого растения на уровне целого организма, Использование способа позволит ускорить подбор соответствующих прививочных компонентов по времени первого определения в соответственных условиях (1 ноле питомника) или приводить подбор компонентов в контролируемых условиях (теплица, климатическая камера), а кроме того, получить саженцы более жизнеспособные, устойчивые к стрессовым ситуациям и, следовательно, более продуктивные.1 о 63 Х ф 63 Ь 4 ф о л л О Ощ Сф) о ол л О О 1 х эх о ф Сф СЧ ЮО ОО О СО (3 л О О РЪ О О л л О О с 3 1 а 3 а 11 1 1- 1 1 хИ1 Ж11 11 .1 11 11 111111 11 1 А ф х )х ь Ц ь 5 л ос фо л 3 1 со л л л лО 1 О 1 1 1 О 1 1 О О О Р 1 тР 3 Го л- (Ч Сф 1 Щл л л л л лО 1 О О О 1 1 О 1 1 О 1 00 С Со СЧ СЧл л л лО 1 1 О О 1 1 1 1 1 О 1 Р 3 о РЪ О 0 л л л л О 1 1 1 1 О О 1 1 3 О 11 1 о 1- О о х е х ощх д ф 3хе в о хй Эо хМ л 1 о ь о о хх о эх Дф 1 1 О ЕЩ Ф1 1 1 Ю дф 1 1 1 1 й о ор 51153230 1 О л Ю1 о 1 х е .Я, о М 1 1 о 1- О о х М х С В а ф1 о 1. О о х О Х о э а ф о о х О 1 х о е д ф 1 о1. Ооховхдф ее ЮлЮ х ф Е оФ о м о д х ф х Р 63