Способ моделирования ревматоидного артрита

(19) (И) 3 Д):Я 09 В 23/28 ЕНИЯ ОСУДАРСТ 8 ЕННЦЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(21) (22) (46) (72) и Л.И (71) ский (53 ) (56) Особе адъюв БЭБ и 3326139/28-1323. 07. 8115. 06. 84. Бюп. Р 22Е, С. Павлова, А. С. Ручкина. ПоздняковаОдесский научно-исследователь"институт курортологии616.72(088.8)1. Давыдова Т.В., Евсеев В.Н.нности иммунного ответа приантной болезни крыс и мьзаей.М., 1978, М 10, с. 462-464.(54) (57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕВМА ТОИДНОГО АРТРИТА путем введения полного адъюванта фрейнда, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью увеличения длительности снижения реактивности лимфоидной ткани за счетисключения начальной стимулирующейфазы иммунной системы, перед введением адъюванта воздействуют на организм животного грязевыми аппликациями, накладываемыми на поверхностьспины в области проекции надпочечников, в течение 18-20 мин.Цель достигается тем что согласно способу моделирования ревматоид"КОГО артрита путсм вьедения полногоадъюванта Фрейнда перед введениемадъюэанта воздействуют на организмотоо Грязевьгми аппггикациягчгинакладьгваегжми на поверхность спиныв области гроекций надпочечников, втечение 18-20 мин кг к а.г Изобретение Относится к медицине.а имеБИО к иммунологии, патофизиологии, экспериментальной терапии.ЙЗЭЕСТНО Чтс МОДЕЛЬ ОЕВггатО.гДНОГОартрита у крыс наиболее адекватнаяревматоидному артриту у человека,воспроизводится путем введения в подушечки задних лап или в основаниехвоста крыс полного адъюванга Фрейнда фОцнако различные варианты модели- гОрования ревматоидного артрита путемвведения адъюванта Фрей нда г,АФ) характеризуется недостаточно полнымвоспроизведением нарушений со стороны иммунологической реактивностиосновного патоге.гетического звенаревматоидного артрита и кратковременным воспроизведением патологиче.ского процесса.НаибОлее близким ПО своей техЪнической сущности и достигаемомуэффекту к изобретению является способ моделирования ревматоидного арт"рита путем введения крысам полногоадъюэанта Фрейнда, состоящего изинактивированной культуры БЦ.:1(2 мг/мп) в масляной среде (1 ч. ланОлина и 30 ч. вазапинового масла) еПолный адъювант Фрейнда вводитсякрысам однократно энутрикожно по0,1 мл в подушечки зацних лап 1,. Недостатком указанного способаявляется наличие двух Фаз реакции,.Иммунной системы на введение антигена, первая из которых длится 7-14Ф%Дней пОсле эвеДения аДъювантсг Фрей".Даи характеризуется стимуляцией а вторая фазар ггачиная с 14 Дня - уГнете 3нием иьщунологичеоких реакциР В р=зультате состояние сниженной реакциисо стороны лиЬфоидной ткани эоспоо-: 40изводится всего на протяжении 7-8дней, что создает определенные ограни 1чения для испытания в этих условияхсредств, влияющих на иммунологическую реактивность. Наличие э усло- гБвиях данной экспериментальной моделифазы стимуляции отдаляет указанныйспособ воспроизведения патологии отклиникиЪДЦель изобретения - создание моцели реэматоидного артрита с длительным снижением реактивности лимфоидной ткани за счет исключения начальной стимулирующей фазы иммунной :истемы,Воспроизведение модели ревматоидного артрита осуществляется следующим способом.Крысам линии Вистар весом 135150 г удаляют волосяной покров споверхности спины и на выстриженнуюповерхностьс площадью 8 х 8 см накладывают слой лечебной грязи толщиной0,5-1,0 см, нагретой до 41-420 С.Сверху слой грязи накрывают обычнойбумагой, затем клеенкой и укутываютживотных куском фланели или мягкойткани, Процедуру проводят на протяжении 18-20 мин, затем грязь и всеиспользованные материалы удаляют.Процедуру повторяют ежедневно 4 дняподряд, Босле последней грязевойаппликации крысам вводят в подушечкизадних лап по 0,9-1,0 мл полногоадъюванта Фрейнда состоящего из равных объемов ланолина и вазелина иубитых микробактерий из расчета 0,40,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси,При комбинации с введением АФ по предлагаемому способу основные показатели, характеризующие формирование воспалительного процессав ответ на введение АФ/СОЭ: лейкоцитарная реакция, ректальная температура и температура кожи над поверхностью пораженных суставов гсостояниедеструкции соединительной ткани,окскпролин)- глюкокортикоидную активность надпочечников, гистологические изменения и иммунологическую реактивность , остаются нарушенными напротя кении зсех 48-50 дней наблюдения. В условиях же контрольных исследований (известный способ) нарушения,наблюдаемые в первые дни исследования (1-28 день), в большинстве случаев к 48 дню нормализуются (см.пример 1). При этом степень воспроизведения ггатологической реакции припредлагаемом способе существеннопревышает таковую в условиях известного способа.При предлагаемом способе уровеньСОЭ достоверно превышает уровень(Ьтого пОеазатспя при известнОМ спОгсобе на 34-й день на 33, на 21 деньна 86. на 28 день - на 70, на50 день - на 42, Аналогичные данныенаблюдаю;ся и в Отношении температурной кривой,Начиная с 13-14 дня в сыворотке крови при обоих способах моделирования адъювантного артрита появляется субстанция, агглютиниругощая зритрог.,иты барана подобная ревматоидному фактору у больных ревматоидным артритом На 20-21 день после введения АФ титры колеблются э усповиях известного способа от 1:8 до 1:28 а к 48-му дню ревматоидный фактор э сыворотке большинства животных не выявляется. В то же время в условиях предлагае1098027 Показатели поспособу Исходныеданные 13-14 СОЭ, мм ч-" известный(предлагаемый) 2,8+0,283, О+О, 34 5,4 - 0,67 4,0+0,49б, 8+0,5р 005 3,1+0,84, 40, 25р 0,05 7,2+0,28р 0,.05 мого способа титр указанного фактора обнаруживается во все сроки исследования: на 20-21 день - 1: 32-1:256, на 26-28 день - 1:64-1:256, на 48-50 день - 1:16-1:128.В условиях предлагаемого способа 5 содержание оксипролина, как показателя деструктивных изменений в соединительнотканных структурах,. превышает на 48-50 день исследования уровень такового при известном способе 1 на 210-213%.Сочетанное применение пелоидов с введением АФ предупреждает чрезмерное угнетение функционирования адреналовых желез в течение всего срока исследования.Уровень глюкокортикоидов в плазме крови при воспроизведении полиартрита в соответствии с предлагаемым способом превышает уровень последних в сравнении с известным на 13-14 день в 2,2 раза, а на 48-50 день в 4,7 раза.Наряду с формированием выраженной патологической реакции (как по глубине сдвигов, так и по продолжительности сроков) предлагаемый способ позволяет удлинить период иммунодепрессии и снять фазу стимуляции иммуного ответа, имеющую место в условиях Мзвестндго способа (см.пример 2). ЗО При комбинации пелоидов с введением АФ существенно удлиняется периодснижения антителообразующей функции лимфоидной ткани, Так, при иммунизации крыс в условиях предлагаемого спосо ба число АОК в селезенке на 7 и 10-й день, 14-й, 21,30 и 50 дни существенно ниже, чем в контрольных исследованиях (только иммунизация). В то же время при известном способе 4 О обнаруживается существенное увеличение количества АОК на 7-й и 10 дни после иммунизации с последующимм пе,реходом, начиная с 20-21 дня в фазу угнетения. Подобные же различия 45 получены и в отношении динамики гемагглютинирующих антител. В условиях. предлагаемого способа моделирования артрита на всем протяжении исследования сохраняется сниженный по сравнению с данными контроля (иммунизация животных беэ артрита) титр гемагглюКоличество лейкоцитов 109 л тинирующих антител. В то время как в условиях известного способа отмеча- Ътся существенное повышение титров нтител, которые становятся максимальными на 13-14 день и сохраняются высокими и по 20-21 дни наблюдения, т,е. в течение первых двух недель имеет местО явная стимуляция процесса антителообраэования.П р и м е р 1. 10 крысам линии Вистар массой 135-150 г проводили грязевые аппликации ежедневно в течение 4 дней. Лечебную грязь температуры 41-42 С накладывали на выстриОженную поверхность спины площадью 8 х 8 см, продолжительностью 18-20 мин. На следующий день после 4-й грязевой процедуры (через 22-24 ч 7 этим крысам вводили в подушечки задних лап 0,9-1,0 мл полного адъюванта Фрейнда, состоящего из равных объемов ланслина и вазелина и убитых микробактерий из расчета О, 4-0,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси,В динамике с 13 по 48-50 дни после введения крысам адъюванта Фрейнда изучали характер воспалительного процесса.Основные результаты исследования приведены в табл. 1.П р и м е р 2. 10-ти крысам линии Вистар массой 135-150 г проводили грязевые аппликации ежедневно в течение 4 дней. Лечебную грязь температуры 41-42 С накладывали на выстриоженную поверхность спины площадью 8 х 8 см, продолжительностью 18-20 мин. На следующий день после 4-й аппликации (после 22-24 ч) этим крысам вводили в подушечки задних лап по 0,9 - 1,0 мл полного адъюванта Фрейнда, состоящего из равных объемов ланолина и вазелина и убитых микробактерий иэ расчета 0,4-0,5 мг на 0,9-1,0 мл смеси. На 7-й день после введения адъюванта Фрейнда этих крыс иммунизировали эритроцитами барана (иэ расчета 0,4-0,.5 мл 45-50." взвеси зритроцитов барана).С 7-го по 48-50 дни после иммунизации изучали характер иммунного отв та на введение антигена.Основные результаты исследования приведены в табл. 2.Табл ица 1 Сроки после воздействйя, дни Г 26-28 48-501 О 980 27 Продолже ние та бл . 1Фосле воздействия, дни7и48-50, Показатели по спОсобу сходи анныв 26"289,50,24,б+0,1 7,09+0, 136,8+0,18 2,5+0,54 р 0,01 р 4 ин, мг мл Оксипр О, 88+0, 009(предл аемый) Аутоантитела чтит к синовиальному а 38, О+6,8,9+8,4 8,9+5,20,001 Дни посл едения эритроцитов барана ивеуниэация) Показателиспособу 9-10 13-14 20-21 29-30 48-50Количество АОК на 106 ядерных клеток в се- лезенке контроль,ммуниэация 1128+107,6 1 емагглютинирующие анти 1 тела 654+1 942+9 Р (Ог 8,70,18 9,5+0,19 2, 58+0, 2р 0,001 10,6+1,249,3+2,8Р 0,01 43, 6+10, О 75, 4+7, 7,Дни после введения эритроцитов.барана иммунизация)49-10 13-14 гг Показатели поопоообу 20-21 29-30 48-50 известный)(предлагаемый)Составитель И.Мелемука Редактор М.Дылын ТехредМ.Гергель КорректоР Р.Макаренко. Заказ 4211/41 Тираж 447 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР,по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раумская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патентф, г,ужгород, ул.Проектная, 4 1 (контроль,иммунизация) 2,02+0,16 3,00+0,05 р 0,01 2,17+0,13 2,20+0,14 1,32+0,07 0,08+0,001 3,2+0,07. 1,90+0,05 1,23+0,Сб 0,07+0,0009 р с 0,05 р с 0,05 р 0,05 р,/0,01 1, 24+0, 17 1, 200, 17 О, 99+0, 103 О, 0041+0, 0004рО,О 5 р 0,05 Рс 0,05 р 0,01