Устройство для проведения микроопераций на клетках и способ проведения микроопераций на клетках

(51 А 61 Н 1 04 НИЕ ИЗОБРЕТЕНСИМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ОПИ гии льрщи иАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 07 НРЫТИИ(71) Институт биохимии и фиэиоломикроорганизмов АН СССР .и Специаное конструкторское бюро биологического приборостроения АН СССР(56) 1.Корас М.д. Упв 1 гцвепйаЫ 1 оЮок Юе 1 гапвр 1 ап 1 а 11 оп ой Нцс 11В. ой Же Ргапк 11 п 1 пвй 1 це 26407- 411, 1956.2.фонбрюн П. Методы микроманиляции, ИЛ, М., с.147-149, 1951,З-.Патент Франции 9 1085965кл. А 61 И, 1965.(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ МИКРО- ОПЕРАЦИЙ НА КЛЕТКАХ И СПОСОБ ПРОВЕДЕ- НИЯ МИКРООПЕРАЦИЙ НА КЛЕТКАХ. (57) 1. Устройство для проденения микрооперацнй на клетках, включающее основание, микроинструмент для прокалывания, механизм перемещения микроинструмента в трех взаимно пе пендикулярных плоскостях и микропр соску с имеющим штуцер держателем, о т л и ч а ю щ е е с .я тем, что, с целью повышения точности и эффективности проведения микроопераций, микроинструмент размещен соосно в полости микроприсоски, держатель микроприсоски выполнен в виде трой-. ника с герметизированными отверстия ми на его противоположных торцах, в которых расположен микроинструмент, причем устройство снабжено дополнительнью механизмом продольного перемещения микроинструмента.1088171 У51 О15 50 манипуляторе 22. 2. Способ проведения микроопераций на клетках включающий закрепление пипетки микроприсоской, прокаливание мембраны микроинструментом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точносИзобретение относится к области биологии, в частности к способам проведения микроопераций на клетках для пересадки клеточных органелл и может быть использовано в области микробиологии и цитологии.Известно устройство для микроопераций с помощью микроприсоски и микроинструмента Я , Ц .Известно устройство для проведения микроопераций на клетках, включающее основание, микроинструмент для прокалывания, механизм перемещения микроинструмента в трех взаим" ноперпендикулярных плоскостях и микроприсоску с имеющим штуцердер" жателем 31 .Укаэанный микроманипулятор не позволяет осуществлять внутриклеточные операции по указанному способу, что снижает производительность труда при операциях и делает более сложной микрооперацию изамедляет процесс микроманипулирования.Известен способ проведениямикроопераций на клетках, заключающийся в закреплении клетки с помощью микроприсоски и раздельного введения внутрь клетки микроинструментаС 13-С 33Укаэанный способ обладает существенными недостатками, а именно при такого рода .микрооперациях невозможно избежать значительных деформаций клетки и ее повреждения, связанного с большими разрывами мембраны и потерями цитоплазмы, требует установки дополнительных микроманипуляторов.Целью изобретения является повыше ние точности и эффективности проведения микроопераций.Для достижения цели в устройстве для проведения микроопераций на клет ках, включающем основание, микроинструмент для прокалывания, механизм перемМщрния микооинструмента в трех взаимно перпендикулярных плоскостях й мйкрдйрисоску с имеющим штуцер держателем, микроинструмент размещен соосно в плоскости микроприсоски, держатель михроприсоски выполнен в виде тройника с герметизированными ти и эффективности проведения микро- операций, полость микроприсоски предварительно заполняют иэотоническим раствором, а прокалывание мембраны микроинструментом осуществляют в зоне ограниченной кромками микроприсоски. отверстиями на его противоположных торцах, в которых расположен микро- инструмент, причем устройство снабжено дополнительным механизмом продольного перемещения микроинструмента.Для достижения цели в способе проведения микроопераций на клет" ках, включающем закрепление пипетки микроприсоской, прокалывание мембраны микроинструментом, полость микроприсоски предварительно заполняют иэотоническим раствором, а прокалывание мембраны микроинструментом осуществляют в зоне, ограниченной кромками микроприсоски,На фиг,1 изображен механизм перемещения; на фиг.2 - общий видустройства; на фиг.3 изображены А - 20 момент втягивания ядра, Б - началь-.ное и конечное положенйе микроинструментов при пересадке.Устройство состоит иэ двух микропипеток, одна из которых, наружная, 25 является микроприсоской 1, вторая,внутренняя, микроинструментом 2 дляинъекцни. Микроприсоска 1 закрепленас помощью гайки 3 и уплотнителя 4в полом корпусе держателя 5 со шту- ЗО цером 6, а микроинструмент 2 с по"мощью уплотнителя 7 и гайки 8 герме- тизируется с противоположной стороныкорпуса держателя 5. Корпус держателя 5 ввернут в кронштейн 9, внутЗ 5 ри которого расположен держательдля закрепления микроинструмента 2,состоящий из гайки 10, уплотнителя11, штуцера 12 и корпуса 13 держателя со штуцером 14. Кронштейн 9 о установлен неподвижно на втулке 15переднего фланца 16, Внутри втулки15 помещается толкатель 17, соединенный с гибкой гофрированной мембраной 18, а корпус 13 держателя закреплен неподвижно с толкателем 17.Задний фланец 19 со штуцером 20 ивтулкой 21 соединен с передним фланцем 16, а мембрана 18 и фланец 19соединены между собой герметично и образуют мембранную коробку, которая закреплена втулкой 21 на микро10 Устройство работает следующим образом.С помощью микроинструмента 22, обеспечивающего перемещение микро- инструмента 2 и микроприсоски 1, устанавливают в поле зрения микро скопа около к,петки.Далее, подавая разрежение от отдельного микроинъектора через штуцер б в полость корпуса держателя, 5 с помощью микроприсоски 1 прикрепляют клетку. Затем подают давление через штуцер 20 в полость мембраниой корОбки. При этом мембрана 18 деформируется и перемещает тол" катель 17 во втулке 15, корпус 13 держателя и с ним микроинструмент 2 для инъекций, который проходит через наружную мембрану клетки в участке, ограниченном диаметром, кончика микроприсоски 1, Микроинъекция и микровсасывание через микро- инструмент осуществляется при пбдаче, давления или разрежения внутри держателя 13 по двум .каналам. с помощью штуцеров 12 и 14 (Фиг,2). Подача раствора, снижающего повреждающий эффект нарушения целостности наружной мембраны клетки, осуществляют при помощи микроинъектора через штуцер бДанное устройство позволяет уско- ЗО рить процесс микроманипуляционных работ, обеспечивает высокую сохранность биологического объекта и исключает применение 2 или 3 дополнитель" ных микроманипуляторов. Все это и 35 определяет положительный эффект от применения данного изобретения.Пример.Клетка с ядром удерживается мик" роприсоской 1, в которой расположен 40. микроинструмент 2 с двумя каналами и пересаживаемым ядром другой клетки;Микроприсоска 1 удерживается в держателе 5 с уплотнением 4 для микроприсоски и уплотнителем 7 для микроинструмента 2. Держатель имеет штуцер б для под-. ключения микроинъектора, которым создается разрежение в полости микро- присоски 1 для удержания клетки.Микроинструмент 2 удерживается дер" жателем 13 со штуцерами 12, 14 для подключения мнкроинъекторов, которыми осуществляется пересадка ядер и подача в зону повреждения необходимых растворов.держатели 5 и 13 установлены вкронштейне 9 механизма продольногоперемещения микроманипулятора 22.Пересадка осуществляется следующимобразом.Микроприсоска 1 с введенным в нее микроинструментом 2 и ядром подводится под микроскоп к клетке с ядром с помощью микроманипулятора 22, Микроинъектором через штуцер 6 создаются и поддерживаются для удержания клетки разрежения внутри полости микропрнсоски 1Затем.вво" дится микроинструмент 2 с помощью механизма продольного перемещения микроманипулятора 22 (Фиг.ЗА). Ядро клетки всасывается в полость микро- инструмента 2 разрежением, создаваемым микроинъектором через,шту" цер 12 корпуса 13 держателя, а пересажнваемое ядро выталкивается из второго канала давлением, соз" даваемым микроинъектором через штуцер 14. После укаэанной операции микроннструмент 2 с помощью мембраны 18 выводят из клетки (фиг.3 В). Далее клетка может быть перенесена для дальнейшего культивирования.Таким образом, указанный способ проведения микроопераций значительно снижает повреждение клетки.за счет уменьшения ее деформации и позволяет из одного прокола проводить сложные микрооперации на клетке.1088171 едактор П,Г Техред А.Бабинец рьк орректор Г. Решетки Зак Подлисно ППП фПатентф, г.уагорсщ, ул.Проектная л 140/4ВНИИПИпо113035,Тирак 722сударственного койитета ССлам изобретений н открытийосква, Ж, Раущская наб.