Способ получения молоди русского осетра

(511 А 01 К 61/00 ( РПИЙСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ О 7 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (53) 639.3.032(088.8)(56) 1. Авторское свидетельство СССР В 105596, кл, А 01 К 61/00, 1956.2 Мильштейн В.Б, Осетроводство . И фПищевая промышленность 1972, с. 3-54.(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОДИ РУССКО 1 О ОСЕТРА, предусматривающий стимулирование полового созреванияпроизвол(нтелей гипофизарными инъекциями, искусственное оплодотворениеикры, ее инкубирование и выращиваниеличинок, о т л и ч а ю щ и й с ятем; что, с целью повышения.устойчивости молоди к дефициту кислородаи обеспечения ее большей жизнестойкости, при оплодотворении осуществляютподбор родительских пар для скрещива"ния по фенотипу гемоглобина крови,при этом подбор проводят так, чтобыполучить 50-100 молоди с гетерозиготным гемоглобином.Изобретение относится к рыбномухозяйству, в частности к способамполучения молоди русского осетра, иможет быть использовано на рыбоводных заводах, заннмаюшихся искусственным воспроизводством русского осетра.Известен способ пблучения молодиосетровых. рыб, предусматривающийстимулирование полового созреванияпроизводителей гипофиэарными инъекциями, выдерживание их в бассейне спроточной водой до полного созревания откладывания половых продуктов,отвод Оплодотворенной икры, ее инкубирование и выращивание личинок,:При осуществлении этого способа 15производители, содержащиеся в бассейне, достигают половой зрелостипосле гипофизарных инъекций, в результате чего самки откладываютикру, оцлодотворяемую самцами, Не- рорест, таким образом, происходит вусловиях, приближенных к естественным, без подбора производителей (11,Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности является спо;5соб получения молоди русского осетра,.предусматривающий .стимулирование полового созревания производителей гипофизарными инъекциями, получение половых продуктов, искусственное Оплодотворение икры, ее инкубирование и выращивание личинок Я,Однако в процессе осуществленияизвестного способа производителейдля скрещивания выбирают произволь"но по мере их созревания, в результате чего молодь, выпускаемая изрыбоводных заводов, имеет недостаточную жизнестойкость и, попадая внеблагоприятные условия, в большинстве своем погйбает от дефицита кис-, 40лорода на местах нагула, что снижает промысловый возврат.Целью изобретения является повышение устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечение ее большей жизнестойкости.,Поставленная цель достигается темчто согласно споеобу получения молоди русского осетра, предусматривающему стимулирование полового созревания производителей гипофизарнымиинъекциями, получение половых продуктов, искусственное оплодотворениеикры, ее инкубирование и выращивание личинок, при оплодотворении осу" 55ществляют подбор родительских пардля скрещивания по Фенотипу гемоглобина крови, при этом подбор проводят так, чтобы получить 50-100молоди с гетерозиготным гемоглобином.60ЪСпособ основан на том, что функ.цию переноса кислорода в организмеосуществляет дыхательный пигменткрови гемоглобин, биохимический поли 65 морфиэм которого (множественностьгемоглобиновых компонентов) имеетадаптивное значение.Способ осуществляется следующимобразом,Всех производителей, используемыхдля воспроизводства, метят и послемечения у них прижизненно берут про.бы крови и готовят образцы гемогло"бина,Приготовленные образцы гемоглобина (Нв) анализируют методом электрофореэа в блоках 5,5-ного полиакриламидного геля и определяют их фракционный состав (фенотип), Обычнодля фракционированиясывороточныхбелков крови применяют 7,5-ный гель,Увеличение размера пор геля при снижении концентрации акриламидадо 5,5 и соответствующее снижениеконцентрации сшивающего агента(метиленбисакриламида) позволяетудлинить трек разгонки белка. Приэтом разрешающая способность геляувеличивается и позволяет выявитьдополнительные фракции.Гемоглобин русского осетра пофракционному составу разделяется натри типа Нв-АА, Нв-ВВ и Нв-АВ(фиг, 1) .Гомозиготный Фенотип Нв-ВВ отличается от гомозиготного ФенотипаНв-АА наличием Фракции 1 с высокойанодной подвижностью, а в фенотипеНв-АА самым быстрым является компо"нент 3.Гетерозиготный компонент Нв-АВобразуется в результате кодоминаитного наследования при подборе дляскрещивания родителей с Нв-АА иНв-ВВ, поэтому гетерогенность егонаиболее велика - из 7 Фракций, при."чем гетерозиготы с Нв-АВ обладаютповышенной резистентностью к дефи"циту кислорода.Для получения гетерозигот Нв"АВродительские пары для скрещиванияподбирают по следующей схеме:Нв"АА х Нв-ВВ 100 Нв-АВ;Нв-АА х Нв-АВ 50 Нв-ААи 50 Нв АВ,Нв-АВ х Нв-ВВ 50 Нв- ВВи 50 Нв-АВ. В данном случае используется явление одногенного гетерозиса по локу су с известной функцией. Гетерозис создается за счет сочетания разных аллельных вариантов гемоглобина, существующих в природной популяции.Лосле смешивания икры со спермой, полученных от подобранных родительских пар, и оплодотворения таким образом икры последнюю закладывают на инкубацию, полученные личин. ки выращивают, а по окончании цикла вйращивания выпускают в естественный водоем для дальнейшего нагула.ИЪ табл. 1 слс гемоглобином Нпроцент выживаемкислорода. что молодьела большийи дефиците дуе -АВ сти При осуществлении способа был про.вещен анализ частот вариантов Нвв 17 генерациях русского осетрав выборке более чем 2000 рыб, в результате чего обнаружена тесная корреляция между частотой Нв-АВ, кис"5лородным режимом в естественном водоеме (Таганрогском заливе, в котором осуществлено наблюдение нагуламолоди) и выживаемостью рыб этойгенерации.0На фиг. 2 приведены данные, полученные при этих наблюдениях, гдекривая 1 иллюстрирует частоту гетероэиготного гемоглобина Нв-АВ в генерациях русского осетра за 1964- 151978 гг 1 кривая 2 - процентноесодержание кислорода в воде Таганрогского залива в период нагула молоди,При неблагоприятном кислородном 20режиме в период нагула молоди иапервому году жизни увеличиваетсясмертность молоди, а среди выжившихрыб повышается доля особей с фенотипом Нв-АВ, что свидетельствует 25о селективном преимуществе рыб стаким гемоглобином.КоэфФициент корреляции между со-.держанием кислорода в воде и выжи.ваемостью молоди составляет 0,83, З 0а между содержанием кислорода и частотой Нв-АВ в генерациях - 0,81.П р и м е р 1,Родительские парырусского осетра подбирали по фено- .типам гемоглобина, для этого произ-водителей метили порционовыми красителями и прижизненно отбирали пробыкрови из хвостовой вены. В пробахкрови опредвляли эритроциты, проводили их гемолиэ и немедленно анализировали фракционный состав гемо- . 40глобина методом диск-электрофореза:в вертикальных блоках 5,5-ного цо-,лиакриламидного геля с рН,9, Раз"деляющий и концентрирующий гели готовили на трис-глициновом электродном буфере с рН,3 и 6,9,.соответственно. Окраску белков проводили бензидином или амидомерным 10 В."После определения фенотипа гемо глобина осуществляли подбор родительских пар с фенотипами Нв-АА и Нв-ВВ и их скрещивание, в результате чего после инкубации икры было получено 100 молоди с гетерозиготным Нв-АВ.П р и м е р.2. Способ осуществля" ли также, как в примере 1. После. определения фенотипа гемоглобина для скрещивания были отобраны родительские пары .с фенотипами гемоглобина Нв-АА и Нв-ВВ, в результате чего было получено 50 молоди с гемоглобином Нв-АА и 50 молоди с гемоглобином Нв-АВ.П р и м е р 3, Способ осуществляли также, как в примере 1. После определения фенотипа гемоглобина для скрещивания были отобраны родительские пары с фенотипами гемоглобина Нв-ВВ и Нв-АВ.После инкубации икры .было получено 50 молоди с гемоглобином Нв-ВВ и 50 молоди с гемоглобином Нв-АВ.Молодь, полученная в результате скрещивания, затем выращивали в иден-. тичных условиях (при равной проточности, плотности посадки и одинакоВьм рационе кормления) в течение .55 сутМолодь, полученную при скрещивании, с гемоглобином Нв-АА и Нв-АВ подвергли раздельно действию остро о дефицита кислорода (снижали концентрацию кислорода с,помощью вакуумного насоса), выдерживая ее 1 ч при содержании кислорода 2,9 мл/л (контрольные рыбы находились в воде, содержащей 6 мл/л кислорода.Полученные данные приведены в табл. 1.Таблица 1 Смешанную группу глобином Нв-АА и Нввоздействию дефицитаданные приведены.66 8 До гипоксииПосле гипоксни 46 ю 4 6 видно нзыживших посленаблюдался сдпов геМоглобильэу гетерози Прн исслед ратура темпа 5 фенотипами г достоверное терозиготным Данные анали2, с таблстрес иг ча а на от с Кадп т.от13,6 фенот в п Нв-АВ СО 0 61+1 68+1550-95 3150+1 5 2 Предл ный на и ,фенотипу нуть это падания Молодь с гетероэиготным гемогло- бином Нв-АВ имела навеску на ;11,5-23,5 больше по сравнению с молодью, имеющей гемоглобин Нв-АА.В природе при скрещивании двух гетерозигот АВ в соответствии с законами Менделя происходит расщепление, при котором образуется 25 особей с Нв АА, 50 особей с Нв-АВ и 25 особей с Нв-ВВ. В следующей генерации скрещивание разных говоэигот АА и ВВ даст 100 гетерозигот АВ и их суммарная доля повысится до 75, в третьем поколении - находит;ся. в состоянии динамического равновесия. гаемый способ, направлендбор родительских пар погемоглобина, позволит сдвиравновесие в сторону преобфв-АВ, характеризующихся овании анализа темпе- роста молоди с раэнымнемоглобина Нв выявилосьпреимущество рыб с гегемоглобином Нв-АВ.эа приведены в табл. 3,.,большей выживаемостью и пластичностью,Это позволяет даже при получении35 только 50 молоди с Нв"АВ в годыс неблагоприятным кислородным режимом .повысить ее выживаемость на 20что при промысловом возврате тольков бассейне Азовского моря даст допол"40 нительно до 2000 т товарной рыбы илидо 1 млн. руб. прибыли в годКроме того предлагаемый способ позфволяет получить молодь с повышеннымтемпом роста, которая, следовательно,45 быстрее достнгнет промысловых размеров, и улучшить адаптационную пластичность полуляции в целом, так как принересте рыб, гетерозиготным по гемоглобину, будут чаще выцепляться ред5 О кие гомозиготы Нв-ВВ, которые прискрещивании с распространенными гомоэиготами Нв-АА вновь дадут рыб с фенотипом Нв-АВ.1061779 Составитель С.филипповаедактор О.Черниченко Техред С,Легеза Коррек Шар ааи каз ми на ттаеюютшватютмюмта тттютттттмюющ филиал ППП фПатент, г,ужгород ул.Проектная, 4 0088/4 Тираж 721ВНИИПИ Государственногопо делам изобретений 13035, Москва, Ж, Раушск Подписиа СССРцтнйд. 4/5