Способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран

Оп ИСАМИЕ Союз СоветскнхСоцмалкстическихРеспублик ид 9571 К АВТОРСКО ВИДЕТЕЛЬСТВ 6 ) Дополнительное к авт. свнд-ву22) Заявлеко 08.04,81 (2 ) 3275610/28-13с присоединением заявки М 51)М. Кл. 01 1 Ч 1/ Гееудерстееиимб кемитет оритетбликовано 15.02,83. Бюллетень М 6та опубликования описання 15,02,83 СССР ее девам иэебретеиий и еткрмтий) Заявител арского 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОБОЛОЧКИ ДЛЯ ЗАКРЫТИЯ ОЖГОВЫХ РАНная антисептичностьобеспечивает стернна всех этапах консЦелью изобретеиммуноспецифичнослочки и придание ейактивности. этого способа не льности трансплантата,ервирования:.ния является снижение ти амниотической обо- антибактериальной е позволяет эв ч ния ее имму- ч Однако в амниотическ снижения ее приводит к в сроки 14 на ожоговую процесс й оболо консервированияки не происходит 20енных свойств, чтореакции отторженияосле наложения ееть, а недостаточиммуногразвитию30 сут.поверхнос О 1,5 ода бидистиллиронная альн Изобретение относится к медицине,а именно к трансплантологии и можетприменяться при стерилизации и консервировании амниотической оболочки длязакрытия ею ожоговых ран.Известен способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ранпутем помещения ее в слабый растворформалина 1Однако данный способ ндостичь достаточного сниженоспецифичнос ти.Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ получения биологическойоболочки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах катионного детергента и антисептиков 2.,Поставленная цель достигается тем,то согласно способу получения биологиеской оболочки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах катионного детергента и антисептиков, производят отмывку от крови плодных оболочек, подученных от рожениц в нестернльных условиях, с одновременной стерилизацией, путем встряхивания в гер метичном сосуде с раствором Ж 1, содержащем, вес. ч.;Э танолмеркурхлорид 1.,0-1,5Цетилпирэщиний хло995718 1,0 0,4 3при соотношении веса ткани к объему раствора ( Х; 15-20) при 18-.25 о С 6-3.2 ч до прекращения окрашиваиия све; жей порции раствора в зеленоватый цвет, затем стерилизуют и консервируют в герметичном сосуде с раствором, содержашнм, вес. ч.:Этанолмеркурхлорид 0,4 0,6Цетилпиридиний хлорид 0,4-0,6 1 аНатрий хлористый 7,2-7,8Вода бидистиллированная Остальное цри этом же соотношении веса ткани к объему раствора и той же температуре 5,0 8,5 ч с продолжением хранения ее в этом же растворе при 2-4 о С 200- 240 ч, затем производят отделение амниона от хориона 1 в кювете с раствором1 при 20-25 о С с последующей стерн-рй лизацией амниона в этом же растворе при 18-25 о С 6-12 ч, после чего стерилизованную амниотическую ободочку помещают в раствор, содержащий, вес. ч:фурацилин О, 15-0,20Магний сернокислый 99,0-101,0Вода бидисгиллированная Остальное при том же соотношении веса ткани к Зй объему раствора при 2-4 С, где хранят до использования 480 4800 чП р и м е р 1. Плодную оболочку, заготовленную ог роженицы в несгерильных условиях, помещают в герметичный сосуд с раствором % 1, содержащим, вес. ч,;35Эганолмеркурхлорид 1,0ЦетилниридинийхлоридВоде бидистиллированная 997,0. при соотношении веса ткани к объему раствора 1;15 вес. ч.Обработку трансплентата производят при 18 о С путем встряхивания с режимом45 восемь встряхиваний в минуту, Через 8 мин производят смену раствора. После прекращения окрашивания шестой порции раствора в зеленоватый цвет еллотрансплантаг продолжает храниться в этой порции раствора Ь 1 6 ч. Затем во флако 50 не с аллотрансплантатом плодной оболочки производят замену раствора Ж 1 на раствор2, содержащий (соотношение веса ткани к объему раствора 1:15), вес. ч.:55Э танолмеркурхлоридЦетилпиридиний хлорид 0,4 4Натрий хлористый 7,2Вода бидисгиллированная 991,0 в котором он.сохраняется при 18 С 5 ч и последующим хранением в этом же растворе при 2 о С 200 ч.После этого аллотрансцлантат плодной ободочки извлекают иэ флакона с раствором М 2 и помещают в кювету, наполненную раствором Ъ 1, где производят отделение амниона от хориона цри 20 С, затем стерилизуют отделенную амниотическую оболочку во флаконе с раствором1 при 18 С 6 ч, После этого производят замену раствора % 1 на раствор3, содержащий (соотношение веса ткани к объему раствора 1:15) вес. ч: Фур ацнлин 0,15Магний сернокислый 99,0Вода: бидис гиллированная 898,80 в котором еллотрансплантаг амниогической оболочки хранится при 2 оС 480 ч,При исследовании экстракта иэ этого аллогрансплангага методом дискэлекгрофореэа выявляют одну белковую фракцию (до обработки предлагаемым способом в этой амниогической оболочке выявлено восемь фракций). Конденсация обшего белка в экстракте иэ этого аллогрансплантата составляет 18% по сравнению с его содержанием в необработанной амниогической оболочке. Методом иммуноэлекгрофореза в экстракте иэ еллотрансплангега амниотической оболочки выявляют одну дугу преципигации (вэкстракте нз этой амниогической оболочки до обработки денным способом выявлено шесть дуг преципитации) .Антимикробную активность изучают путем помещения диска диаметром 1 см, вырезанного иэ этого трансплангага, на поверхность агара, засеянного золотистым стафилококком. Зона задержки роста микробов вокруг аллогрансплангага 8 мм, Вокруг диска, вырезанного иэ емниогической оболочки до обраббгки предлагаемым способом, эона задержки роста золотистого стафилококке не выявлена.П р и м е р 2Плодную оболочку, заготовленную ог роженицы в нестерильных условиях, помешают в герметичный сосуд с раствором . 1, содержащим, вес.ч:Э генолмеркурхлорид 1,5Цетилпиридиний хлорид 1,5998718 5Вода . бидистиллиро-,ванная .998 0 при соотношении веса к обьему раствора 1:20, Обработку трансплантата про- - изводят при 25 С,путем встряхивания з с режимом десять встряхиваний в минуту. . Через 8 мин производят смену раствора. - После прекращения окрашивания восьмой порции раствора в зеленоватый цвет, аллотраисплантат йродолжает храниться в 10 этой порции раствора М 1 12 ч. Затем во флаконе с аллотрайсплангатом плодной оболочки производят замену раствора В 1 на раствор Ж 2, содержащий (соотношение веса ткани-к объему -раствора М1;20), вес, ч:Этанолмеркурхлорид 0,6Бетилпиридиний хло- .рид 0,6Натрий хлористый 7,8 20Вода бидистилиированная 992,0 в котором он хранится при 25 С 8,5-ч с последующим хранением в этом же растворе при 4 о С 240 ч. После этого аллотрансцлантат плодной оболочки изввлекают иэ флакона с раствором % 2 и помещают в кювету, наполненную раствором М 1, где производят отделение амниона отхориона при.25 оС, затем стерн- фй лиэуют отделенную амниотическую оболочку во флаконе с. раствором Ж 1 при 25 Со 6 ч. После этого производят замену рас твора % 1 на раствор М. 3, содержащий (соотношение веса ткани к объему рас гвора 1:20), вес. ч:фурацилин . - 0,20 Магний сернокислый 101,0Вода бидистнлиирован ная 899,0 40 в котором аллотрансплангаг амниогической оболочки хранится при 4 о С 4800 ч,При исследовании экстракта из этого; аллогрансплантата методом дискэлектро-.4 фореэа выявлены две белковые фракции .(до обработки.предлагаемым способом в этой амниотической оболочке выявлено девять фракций), Концентрация общего белка в экстракте иэ этого аллотрансплантата составляет 16% по сравнению с его.Я содержанием в необработанной амниогической оболочке. Методом иммуноэлекгрофореза в экстрате иэ аллотрансплантата амниотической оболочки выявлена одна дуга преципитации (в экстракте из этой ф амниотической оболочки:до обработки .предлагаемым способом выявлено семь. дуг преципигапии). бАнтимикробная активность изученапутем помещения: диска диаметром 1 см,вырезанного из этого аллотрансплан тата,на поверхность агара, засеянного золотистым стафилококком, Зона задержки ростамикробов вокруг аллотранспланта та составляет 9 мм. Вокруг диска, вырезанного из амниогической оболочки до обработки предлагаемым способом, зона задержки роста золотистого стафилококка невыявлена,Полученная биологическая ооолочка,стерилизованная, консервированная и насыщенная ангисептиками, была применена у больного Д, 10 лет, диагноз: ожог- Й А степени шеи, груди, спины,площадью 10%. Ожоговая рана была одно-моментно закрыта на площади около,500 см 2, Лечение больного завершилось.выздоровлением с полной эпигелизациейожоговой поверхности через одиннадцатьсуток после наложения на нее биологической оболочки, обработанной предлагаемымспособом.Предложенный способ позволяет цолучить биологическую оболочку со сниженной иммуноспепифичносгью, о чем сщщегельствует уменьшение содержания в экс. трактах из нее общего белка, обеднениеее антигенной структуры, с антибактериальной активностью, насьпценную антисептиками. формула изобретенияСпособ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах катионного дегергента и антисептиКов, о г и и ч а ю щ и й с. я тем, что, с пелью снижения иммуноспецифичнос ги амниогической оболочки и придание ей антибвктериальной активности производят отмывку ог крови пиодяых оболочек, по лученных от рожениц в нестерильных условиях, с одновременной стерилизацией путем встряхивания в гермещчном сосу:де с раствором Ж 1, содержащим, вес. ч:Э танолмеркурхлорид 1,0-1,8 Цетилйиридийий хиорнд 1,0-1,8 Вода бидистяллнрованная Остальное при соотношении веса ткани к объему раствора (1:15 20) при 18-25 С 6 12 ч до прекращения окрашивания свежей порции раствора в зеленоватый цвет, затем стерилизуют и консервируюг в гер0,4-0,6 7,2-7,8 7 995718 8 метичном сосуде с раствором, содержа- фурвцилин 0,15-0,20 щим, вес. ч: Магний сернокислый 99,0 101,0.Этаиолмеркурхлорид 0,4 0,6 Вода бидистиащрованБетилпиридиний хлоная Ос тальноерид при том же соотношении веса ткани к обьйатрий хлористый ему раствора при 2-4 С 480-4800 ч.Вода бидистиллированная Ос тальное Источники информапии при том же соотношении веса ткани к объ- пРинятые во внимание при экспертизе ему раствора и той же температуре 5,0- ф 1. Козлова-Лавриненко Т. ЕКруг,5 ч с продолжением хранения ее в этом лов К. М. Использование слабьа расже растворе при 2-4 о С 200-240 ч, за- творов формалина для хранения кожных тем производят отделение вмниона от хо- трансплантатов, - В кн.: Ожоговая бориона в кювете с раствором % 1 при . лезнь, патогенез, клиника, лечение. Киев, 20-25 о С последующей стерилизацией . 13 1975 с. 10-30. амниона в том же растворе при 18 25 Со2. В. Кеп. 1.п Вел еа гс Ь 1 п Ьц го в 6-12 ч,после чего стерилизованную амни- (Едь) Р. Иоййег. Т.1 Вагс 1 ау 1,.Коотическух оболочку помещают в раствор, п 1 вага Вегп Зсойдагй. Ч 1 еппа. содержащий, вес. ч: Напв НцЬег, 1971 р. 289-292.Составитель С. МалюгинаРедактор В, Ковтун Техред Л,Пекарь Корректор В, ПрохненкоЗаказ 750/1 Тираж 719 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушсквя наб., д, 4/5 Филиал ППЛ "Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4