Способ микробиологического анализа кала

и) 649750 Союз Советских Социалистических Республик,45) Да опубликования описания 28.02.79 2) Автор изобретения(71) Заявите аучно-исследовательскии институт эпидемиологии микробиологии и гигиены54) СГ 1 ОСОБ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КАЛАЦ Ц Изобретение относится к области медиины и предназначено для диагностических елей.Известен способ микробиологического анализа кала, включающий посев кала на питательную среду и подсчет выросших колоний 1.Однако в известном способе анализ кала осуществляется без учета его состава, а посевной материал распределяют недостаточно равномерно, что существенно влияет на точность измерений.Целью настоящего изобретения является повышение точности анализа.Указанная цель достигается тем, что из исследуемой пробы перед посевом извлекают микробную массу, а посев производят аэрозольным путем.Изобретение иллюстрируется чертежами, где на фиг, 1 изображено устройство для извлечения микробной массы; на фиг. 2 - сетка, на фиг. 3 - чашка; на фиг. 4 - проб,ка и на фиг, 5 - форсунка.Способ микробиологического анализа кала совершают следующим образом.Устройство содержит дозирующий шприц 1 с остовом 2. Шприц 1 снабжен штоком 3, ввинчиваемым в поршень 4, Остов 2 шприца состоит из цилиндрической части 5, резервуапа 6, который представляет собои расширение цплиндрпческои части, навинчивгемой на резервуар крышки 7 и навинчиваемой на остов крышки 8. В крышке 8 остова имеется отверстие (на чертеже не показано) для прохода штока 3 шприца.Резьбовой наконечник 9 шприца открывается в рсзсрвуар б, Цедилка для удаления грубых частиц посевного материала состоит из сетки 10, вкладываемой в чашку 11 с 10 отверстиями (а) на дне. Пробка 12 для закрытия наконечника 9 шприца выполнена в виде палочки с резьбовым углублением на конце. Форсунка 13 выполнена в виде трубочки с внутренними резьбами в конечной части.При подготовке к посеву в резервуар 6прибора вкладывают чашку 11, в нее - сетку 10, поршень 4 шприца при помощи штока 3 отводят до крышки 8, шток 3 вывинчивается, На сетку наносят кал и наливают физиологический раствор в соотношении приблизительно 1: 10. Крышку 7 навинчивают на резервуар б. Путем взбалтывапия, например при помощи электриче З ской трясалки, в резервуаре получаетсяравномерная взвесь кала. Потом прибор вкладывают в подходящую центрифугу, например ЦЛС-З, и проводят осаждение взвешенных в растворе кала микробов и 30 других мелких частиц, пропускаемых цедилкой. После центрифугирования из прибора удаляют цедилку вместе с оставшимися грубыми частицами, ввинчивают шток 3 и надавливанием на поршень 4 удаляют надосадочную жидкость.Количество осадка определяется путем отсчета делений шприца или взвешиванием прибора с последующим вычитанием веса порожнего прибора.Таким образом осуществляется обработка кала для количественного посева.Приготовление взвесей различной концентрации осуществляют следующим образом: в шприц прибора набирают изотонический раствор в заданном соотношении с количеством осадка, например 1: 10; на наконечник 9 шприца навинчивают пробку 12 и при помощи, например, электрической трясалки из осадка и набранного в шприц изотонического раствора приготавливают равномерную взвесь. Для более быстрого смешивания осадка с изотоническим раствором в шприц предварительно вкладывают три металлические шарика с диаметром примерно в 3 мм.Удаляя из шприца часть взвеси, оставляют нужное количество ее для приготовления второго разведения с концентрацией взвеси, например в 10 раз меньше первой. Таким же путем можно готовить дальнейшие разведения.Посев любого разведения производят аэрозольным путем, Для этого пробку 12 вывинчивают, а вместо нее навинчивают форсунку 13. При помощи поршня через форсунку заданное количество взвеси по делениям шприца наносят на питательную среду в чашке Петри, помещенной в закрытом пространстве, например в настольном боксе.Дифференциация и подсчет выросших колоний микробов проводят известными методами. Пересчет общего количества бактерий или количества отдельных видов на 1 г или 1 мл микробной массы производят, в зависимости от желаемой точности, из показателей посевов взвесей 1 - 3 разных концентраций.Предлагаемый способ можно применять для количественного микробиологического исследования также и других веществ, например пищевых продуктов.Пример.Прибор готовят к первой манипуляции следующим образом. В шприц вкладываются три металлических шарика, поршень 4 шприца при помощи штока 3 отводят до крышки 8, шток 3 вывинчивают, резервуар 6 с помещенной в нем цедилкой (чашкой и сеткой) закрывают крышкой 7.После снятия крышки 7 в резервуар прибора вкладывают кусочек кала величиной с горошину и вливают изотонический раствор, примерно до /4 объема резервуара, После навинчивания крышки 7 при 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 бор перемещают в электрическую трясалку и подвергают взбалтыванию в течение 20 мин, После этого прибор помещают в центрифугу ЦЛСи производят осаждение микробов в течение 15 мин при 4000 об/мин. По окончании центрифугирования крышку 7 отвинчивают, цедилку вместе с оставшимися грубыми частицами удаляют, ввинчивают шток 3 и надавливанием на поршень 4 удаляют надосадочную жидкость, Определяют всс центрифугата: вес прибора вместе с осадком минус вес порожнего прибора: 122,4 г - 122,0 г = 0,4 г. В шприц набирают 4 мл изотонического раствора, канюлю шприца закупоривают пробкой 12 и при помощи электрической трясалки получают взвесь 1: 1. После удаления 4,5 мл взвеси и набирания 4,5 мл изотонического раствора получают взвесь 1: 100, потом подобным образом из 0,5 мл взвеси 1: 100 и 4,5 мл изотонического раствора получают взвесь 1: 1000, которая пригодна к посеву на дифференциальноэлективные среды.Для производства посева на канюлю шприца надевают трубочку с форсункой и надавливанием на шток 3 0,5 мл взвеси 1: 1000 через форсунку разбрызгивают на поверхность питательной среды в чашке Петри, помещенной в настольном боксе.На дифференциально-элективные среды для исследования количественных соотношений различных видов кишечных бактерий высевали по 0,5 мл взвеси микробной массы 1: 1000. Использовали среду Эндо, Плоскирева, висмутасульфита и молочносолевого агара.На среде Эндо выросли бледно-розовые слизистые колонии (колонии1), в среднем по 4 в см, всего в чашке - 312, и красные с металлическим блеском колонии ( 2), в среднем по 12 в см, всего - 936; на среде Плоскирева - всего слизистых колоний 16 ( 3), красных 60 ( 4), бесцветных 8 ( 5), на среде висмута-сульфита буровато-зеленого цвета колоний (М 6), в среднем 8 в см, черных ( 7) всего - 6, черных блестящих (Мо 8) - 2, на молочно-солевом агаре всего - 6 желтых колоний ( 9) .По ферментативным, морфологическим и некоторым другим свойствам установлено, что в колониях1 и 3 растут клебсиелла, в колониях2, 4, 6 - эшерихия,5 и 8 - цитробактер,7 - протеймирабилис,9 - золотистый стафилококк.Самое большое количество бактерий составил род клебсиелл (не считая нормального обитателя кишечника - эшерихий), который был признан предположительным возбудителем гастроэнтерита у данного больного. Это предположение подтвердилось четырехкратным повышением титра антител в ходе заболевания по данным непрямой гемагглютинации к антигенам изкультур клебсиелл. Реакция с антигенами из других выделенных культур, а также с диагностикумами шигелл и салмонелл, не показала диагностических титров.В посевах необработанного кала того же 5 больного выросла в больших количествах только эшерихия, а протей, стафилококк и клебсиелла выросли в нескольких колониях (2 - 6), что не дает основания судить о преобладании какого-либо из этих родов, а 10 тем самым и о возможности этиологической роли.С целью сравнения пересчитали количество самых важных в данном случае бактерий - клебсиелл - на 1 л микробной 1 б массы по дапным посева на среде Эндо. Посеяно 0,5 мл взвеси 1:1000= (1 г:1000): :2=0,0005 г; 1:0,0005=2000. Выросло колоний 312, в 1 г=312 К 2000=624000.Таким образом, предлагаемый способ по О зволяет более точно определить количественные соотношения разных видов микробов в кале, исключить влияние на эти соотношения различного у отдельных обследуемых количества посторонних примесей и 2 б получить сравнимые данные для исследования экологии микробов кишечника, для определения нормального и патологического состава микробов, особенно условно патогенных. 30Кроме того, применение форсунки дает возможность получить более равномерный, по сравнению с известными методами, посев материала, что также способствует более точному определению количества раз- д личных микробов. Вместе с удаляемой жидкой частью кала удаляются и вещества, задерживающие рост посеянных микробов, этим достигаются более хорошие результаты посевов.Исследование кала при помощи предлагаемого способа является более чистым и удобным, представляет меньшую опасность заражения, требует меньше трудовых затрат по сравнению с известными методами,При сравнении результатов посева кала по предлагаемому способу и по известному методу (без обработки кала) выявилось значительное преимущество первого в отношении высеваемости. Так, при исследовании кала 202 больных параллельно обеими способами салмонеллы выделялись при обработке кала у 18 больных, без обработки - у 9, шигеллы соответственно у 9 и 6, протей - у 59 и 16, золотистый стафилококк - у 30 и 8, клебсиелла - у 9 и 2, энтеробактер - у 14 и 4.Фор мула изобретенияСпособ микробиологического анализа кала, включающий посев кала на питательную среду и подсчет выросших колоний, о тл ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности анализа, из исследуемой пробы перед посевом извлекают микробную массу, а посев производят аэрозольным путем.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Т. А. Авдеева. Методические указания по количественному микробиологическому исследованию при дизентерии, Л., 1964, с, 3 - 5.ипография, пр. Сапунова, 2 Заказ 198/7 Изд,248 Тираж 548 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5