Способ прогнозирования течения язвенной болезни

( 9) 2762 1 й 33/68 ГОСУДАР СТВЕ ННЫ ИПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТОТКРЫТИЯМ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ЕЛЬСТ АВТОРСКО им.(56) Э,А, Емельянова. Особенности клиского течения язвенной болезни желэнэимологической активности перифской крови в условиях Севера. Автканд, дис., М., 1987.(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯНИЯ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ Изобретение относится к области медицины, в частности, к гастроэнтерологии, и может быть использован для определения дальнейшего характера течения язвенной болезни (Я Б),ЯБ, относясь к наиболее часто распрост раненным заболеваниям желудочно-кишечного тракта. чаще всего поражает лиц молодого, наиболее трудоспособного возраста. Заболевание носит хронический рецидивирующий характер. Результатом этого является инвалидизация больных и большие социально-экономические потери. В последнее время наблюдается отчетливая тенденция к росту заболеваемости ЯБ, особенно среди лиц молодого возраста, В связи с этим разработка способа прогнозирования дальнейшего течения ЯБ представляет большую практическую значимость, по(57) Изобретение относится к области медицины, в частности гастротерапии, Целью изобретения является повышение точности прогнозирования характера течения язвенной болезни. Это достигается дополнительным определением у больных язвенной болезнью с наличием СовруоЬастег Руог цитохимически в лимфоцитах активности дегидрогеназ и постоянной реакции торможения миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами. При снижении уровня активности сукцинатдегидрогеназц относительно нормы в 1,5 раз, повышении уровня активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют тяжелое течение язвенной болезни. скольку позволяет подбирать адекватную терапию и выделять группы "риска".Известен способ прогнозирования те чения ЯБ, основанный на выделении из слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки,Укаэанный способ не может быть использован для прогнозирования тяжести течения ЯБ, поскольку в группу больных, у которых выявляюгся СР, попадают лица лишь с симптомами желудочной диспепсии, но без язвенного дефекта, что существенно снижает точность про-ноза,Известен также способ прогнозирования тяжести течения ЯБ, принятый нами за прототип, основанный на оценке метаболической активности лимфоцитов крови путем цитохимического определения активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-гли 177276210 20 25 ЗО 35 40 45 50 церофосфатдегидрогеназы (альфа-ГФД Г) митохондрий лимфоцитов,Недостатком данного способа является его невысокая точность.Кроме того, дегидрогеназная активность лимфоцитов крови соответствует тяжести течения заболевания на момент обострения. но не указывает надальнейщий прогноз ЯБ,Целью предполагаемого изобретения является повышение точности прогнозирования течения ЯБ.Способ осуществляется следующим образом,1 этап - выделение СР из биоптатов СО желудка и 12-перстной кишки.До начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта больным ЯБ утром натощак проводят ЭГДС с прицельной биопсией антрального отдела желудка и 12-перстной кишки (не менее 3 фрагментов из каждого участка). Полученные при биопсии фрагменты СО помещают в стерильные одноразовые пробирки с крышкой обьемом 1 мл, заполненные стерильным изотоническим раствором МаС 1, и доставляют в лабораторию не позднее 1 ч с момента проведения биопсии. После этого с одним из фрагментов из каждоо участка проводят тест на уреазопозитивность: фрагмент помещают в пробирку с 10.0 мл индикаторной смеси, содержащей мочевину и вещество-индикатор, При наличии в биоптате СО СР рН среды меняется за счет разложения кампилобактериями мочевины на аммиак и С 02, и смесь окрашивается в красный цвет. Результаты теста оцениваются через 30 мин, 4, 8, 12, 16 и 24 ч. Тест считается положительным при прохождении реакции не позже 4 ч.Следующим этапом является микроскопия мазка биоптата (один фрагмент из каждого участка) с окрашиванием препарата по Граму для выявления спиралевидных микроорганизмов.Далее проводят высевание микроорганизмов в микроаэробных условиях при содержании кислорода 5 - 100 ь. температуре 35-37 С и оптимальном значении рН от 5,5 до 8.5, Средой является шоколадно-кровяной агар. После этого проводится повторная микроскопия выращенной культуры микрооганизмов (окраски препаратов по Граму) для их окончательной идентификации,11 этап - определение дегидрогеназной активности лимфоцитов,Для исследования берется свежеприготовленный мазок крови (утром натощак до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта), который высущивается на воздухе и затем в течение 30 с, фиксируется в фиксаторе (раствор 600 ацетона с трилоном Б), После этого мазок дважды промывается в дистиллированной воде и высушивается на воздухе).Приготавливается инкубационная среда, состоящая из 10 мл 9,2 М р-ра фосфатного буфера с рН 7,2 - 7,4, 10 млдистиллированной воды с растворенными вней 13 мг пара-нитратетразолия фиолетового, 20 мл дистиллированной воды с добавлением к ней 15 мг трилона-Б, общий объем инкубационной среды равен 40 мл со средней рН 7,2-7,4Для выявления активности ферментов к 40 мл инкубационной среды прибавляют 540 мг сукцината а (выявление активности альфа-ГФДГ), мазок опускается в один из растворов и выдерживается в нем в течение 2 ч при 37 С, после чего промывается водойои высушивается на воздухе,Для прокрашивания ядер мазок опускается на 10 - 15 мин в 2 Д-ный раствор метилового зеленого, промывается проточной водой и фиксируется в парах формалина в течение 30 мин.После этого производят световую микроскопию мазка(х 40) с подсчетом числа гранул формазина в 50 клетках и делят их на подгруппы с числом гранул от 0 до 4, 5-9, 10 - 14 и т.д.Для построения гистограмм распределения лимфоцитов с различной активностью СДГ и альфа-ГФДГ проводят определение средней активности фермента в укаэанных подгруппах и среднего количества лимфоцитов с определенной активностью фермента (М+) с вычислением достоверности различия (Р).Для определения активности СДГ и альфа-ГФДГ готовится не менее 2 мазков от каждого больного,111 этап - постановка реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ),Предварительно заранее производили выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки, для чего после тщательного отмывания из кищечника недоношенного эмбриона тщательно выделяли СО и гомогенизировали с физиологическим раствором в соотношении 1;1, смесь подвергали дробному центрифугированию в течение 1 ч при 105 000 об/мин.Перевод антигена в растворимое состоянйе осуществляли путем добавления папаина из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта. Смесь выдерживали в термостате при температуре 37 С в течение 1 ч, центрифугировали при 88 700 об/мин и разгоняли на колонке с10 15 20 25 30 35 40 г г Д 1 - д 1 Дг - дг 50 55 сефэдексом С 200, после чего отбирались фракции с максимальным содержанием белка (определяли по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракции использовались в концентрации 250 гам/мл, поскольку несцпецифическое торможение миграции при постановке РТМЛ у здоровых лиц наблюдалось при концентрации антигена 300 гам/мл.Постановка РТМЛ осуществлялась двухкратно - до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта, Пластиковые одноразовые чашки Петри диаметром 100 мм заливали 3 Д агаром "Дифко". приготовлен:-ом нэ физиологическом растворе (рН 7.3) с добавлением 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мгк/мл стрептомицина. Толщина слоя агара составляла 2 мм, После застывания в слое агара пробойником выбивали лунки диаметром 2,5 мм, в которые вносили по 5 мкл лейковзвеси (1,5 млн клеток) и 5 мкл раствора антигена (опыт) или среды 199 (контроль), После инкубэции чашек при 37 С в течение 24 часов агэровые блоки фиксировали 10 О-р-ром формалина (4 часа), осторожно снимали, чашки промывали дистиллированной водой и высушивали. Результат учитывали путем отбрасывания изображения полей миграции клеток на бумагу. Индекс миграции (ИМ) определяли отношением средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле; где Д 1 - средний диаметр 4 эон миграции в опыте;Дг - средний диаметр 4 зон миграции в контроле;д 1 - средний диаметр 4 центральных лунок в опыте;дг - средний диаметр 4 центральных лунок в контроле,Контрольные и опытные исследования проводили в четырех параллельных лунках.Нормы определившихся показателей были отработаны на 20 здоровых добровольцах и составили: ИМ =0,81 - 1,21; СДГ = 20,00 + 10; альфа - ГФДГ = 6,90 + 0,06,П р и м е р 1, Больной Г., 46 лет, инженер, и/б йг 28690, находился в гастроэнтерологическом отделении с 24,11.87 по 23,12.87 с диагнозом; язвенная болезнь желудка в стадии обострения,Из анамнеза известно, что язвенной болезнью желудка страдает в течение 15 лет с ежегодными (2 - 3) обострениями. Настоящее обострение длится 2 недели. Лекарственное лечение не производилось, Объективно: состояние при поступлении удовлетворительное, кожные покровы и слизистые оболочки обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены. Аускультативно дыхание везикулярное, ЧД - 16 в мин. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. АД - 135/75 мм рт.ст, ЧСС - 72 в мин, Живот пальпатарно мягкий, болезненный в эпигастрии, Печень и селезенка не пальпируются, перкуторно не увеличены. Стул ежедневный, оформленный, обычной окраски, ЗГДС, язва угла желудка 0,7 см, умеренная гиперемия в указанной зоне. Луковица 12-перстной кишки без изменений. Результаты РТМЛ с кишечным антигеном: ИМ =0,41, СР выявлены всеми тремя методами,в биоптатах из антрального отдела желудка. Дегидрогеназная активность лимфоцитов: СДГ - 12,8, альфа - ГФДГ - 16,9. После рубцевания язвенного дефекта СР в биоптатах антрального отдела сохранялись, ИМ в РТМЛ с кишечным анти- геном составил 0,59. Активность СДГ - 13,4, альфа - 15,8, Таким образом, у больного ЯБ с наличием в слизистой оболочке антрального отдела СР до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта наблюдалось снижение уровня активности СДГ с 1,56 и 1,49 раз соответственно и повышение уровня активности альфа-ГФДГ в 2,40 и 2,30 раза соответственно, Сохранялась сенсибилизация лимфоцитов к кишечному антигену, Прогноз в данном случае неблагоприятный.П р и м е р 2, Больной К., 45 лет, водитель и/б М 23774, находился в гастроэнтерологическом отделении с 2,10.87 по 23,10.87 с диагнозом: язвенная болезнь 12-перстной кишки в стадии обострения,Из анамнеза известно, что язва выявлена впервые в амбулаторных условиях при ЭГДС 2 недели назад (язва задней стенки луковицы 12-перстной кишки 0,5 см с периульцеровным отеком). Объективно: состояние при поступлении удовлетворительное. Телосложение нормостеническое, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены, Над гелкими аускультативно дыхание везикулярное. ЧД - 16 в мин. Тоны сердца звучные, ритм правильный, АД - 130/70 мм рт.ст, ЧСС - 74 в мин. Живот правильной формы, пальпаторно-болезненный в эпигастрии. Печень у нижнего края реберной дуги, селезенка не увеличена, Наличие СР установлено в антральном отделе желудка (до начала лечения). Активность СДГ составила 18,7,альфэ-ГФДГ - 6.5. ИМ в РТУЛ с кишечнымантигеном 0,89. После рубцевания язвенного дефекта (лечение холинолитиками, витаминами, антацидами) СР в биоптатах обнаружено не было. РТМЛ с кишечным антигеном была по-прежнему отрицательной. Активность СДГ,1 альфа-ГФДГ - 7,0, Таким образом, у больного впервые выявленной язвой луковицы 12-перстной кишки и отсутствием в слизистой оболочке желудка и 12-перстной кишки СР активность СДГ при обострении снизилась в 1,06 раз, а альфа-ГДФ Г повысилась в 1,06 раз. После рубцевания язвы дЕгидрогеназная активность также оставалась практически нормальной. Прогноз в данном случае благоприятный.П р и м е р 3. Больной Ф.,37 лет, служащий; и/б М 29574, находился в гастроэнтеролическом стационаре, с 3,12,87 по 13.1 .88 с диагнозом; язвенная болезнь 12- перстной кишки в стадии обострения. Из анамнеза известно, что язвенной болезнью 12-перстной кишки страдает в течение 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями. Настоящее обострение длится 1 месяц. Рецидив заболевания верифицирован в амбулаторных условиях при ЭГДС(язва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки 0,5 см и на верхне-задней 0,4 мм, отек: и гиперемия слизистой оболочки), При поступлении состояние удовлетворительное, питание понижено, кожные покровы и видимые слизистые бледные, язык обложен густым белым налетом, Живот при пальпации мягкий, выраженная болезненность при пальпации в эпигастрии справа. Печень и селезенка не пальпируются, СР до начала лечения и после его окончания не были выявлены ни в одном из отделов желудка и 12-перстной кишки, РТМЛ с кишечным антигеном составил до начала лечения ИМ= 0,56, после ИМОО, 81, Активность СДГ до начала лечения - 18,2, после окончания - 18,4, альфа - ГФДГ - 7,8 и 7,5, соответственно,Таким образом, у больного с тяжелым течением ЯБ СР в слизистой оболочке обнаружены не были. Активность СДГ снизилась до начала лечения относительно нормы в 1,09 раэ, после лечения - в 1,8 раз, активность альфа - ГФДГ повысилась в 1,13 и 1,08 раз соответственно. Несмотря на длительный язвенный анамнез и частые обострения, функциональная активность лимфоцитов и их энергообмен у данного больного достаточно сохранны, СР не выявлено. Это делает прогноз в данном случае благоприятным, Формула изобретения 40 Способ прогнозирования течения язвенной болезни включающий определение сукцинат- и а -глицерофосфатдегидрогеназной активности лимфоцитов крови, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа дополнительно исследуют и реакцию торможения миграции лейкоцитов и определяют наличие СааруоЬас(ег Руоге в биоптате слизистой оболочки желудка и при снижении уровня активности сукцинатдегидрогенаэы в 1,5 раза, повышения уровня активности а -глицерофосфатдегидрогенаэы в 2,3 раза относительно нормы и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют тяжелое течение заболевания. 45 50 55 Точность предложенного способа 77 ф.Это означает, что из 40 обследованныхбольных ЯБ с тяжелым течением, проявлявшимся длительным язвенным анамнезом,5 частыми рецидивами и короткими периодами ремиссии с наличием в слизистой оболочке желудка или 12-перстной кишки СРактивность СДГ была снижена относительно нормы в 1,5 раэ и более, а активность10 альфа-ГФДГ повышена относительно нормы в 2,3 раза и более у 31 больного (77,5 ф),что сопровождалось снижением ИМ в РТМЛс кишечным антигеном ниже 9,65, послерубцевания язвенного дефекта СР сохрани 15 лись у 30 больных (75), однако дегидрогеназная активность и функциональнаяактивность лимфоцитов оставались измененными, Данным больным необходимопроведение индивидуально подобранной20 терапии, направленной в первую очередь наэлиминацию микроорганизмов и стимуляцию местных защитных механизмов, Терапия должна быть более длительной, чем уостальных больных, проводится сочетанием25 препаратов различных патогенетическихгрупп, сочетаться с длительной поддерживающей терапией после рубцевания язвенного дефекта, а в ряде случаев - схирургическим лечением.30 Таким образом, использование предлагаемого способа прогнозирования тяжеститечения язвенной болезни позволяет до начала проведения терапии прогнозироватьдальнейший характер течения заболевания,35 целенаправленно индивидуально подбирать терапию и корректировать ее в дальнейшем после рубцевания язвенногодефекта,