Способ микроклонального размножения абрикоса

(19) 1)5 А 01 Н 4/00 ЕНИЯ ений им. анический гцас 1 оп о 1984, 19(2),ГО РАЗующим о ы побегов длиной в 70-градусном эти в 0,1-ном раста омывают стерильпитательную сред прописи М 0 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Институт физиологии расК.А,Тимирязева и Главный босад АН СССР(54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬМНОЖЕНИЯ АБРИКОСА я к биотехнолом микроклональй, и может быть ого микроразмучения большогооднородного и коса.орение р бактериэ Изобретение относитс гии, в частности к метода ного размножения растени использовано для клональн ножения и ускоренного пол количества генетически посадочного материала абр Цель изобретения - уск жения и снижение уровня заражения,Способ осуществляют с эомВесной срезают однолетние черенки иэ различных частей кроны пдлодоносящего дерева и помещают в сосуды с водой. Через месяц вегетэтивные почки распускаются и образуют побеги длиной 1-3 см. Верхушки побегов. состоящие из конуса нарастания и 2-4 пар примордиальных листьев, изолируют и предварительно стерилизуют 70-ным этанолом в течение 1 мин, после чего проводят стерилизацию в 0,10 ь-ном растворе диацида, В табл, 1 приведен состав питательных сред (рН 5.8) для способа клональногоми кроразмноженияабрикоса. По(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса. Целью изобретения является ускорение размножения и снижение уровня бактериального заражения, Способ заключается в том, что введение в культуру проводят путем стерилизации побегов, полученных из почек, взятых весной непосредственно от взрослого плодоносящего дерева. Культивирование проводят в несколько этапов на модифицированной фито- гормонами среде Мурасиге - Скуга. 4 табл. сле 3-кратной промывки в стерильной дистиллированной воде апексы побегов помещают на среду 1 (табл.1), затем полученный материал культивируют на среде 2 и проводят укоренение нэ среде 3 с последующим переносом на безгормональную среду Мурасиге-Скупа. Полученные растения адаптируют к условиям открытого грунта путем подращивания в стерильной почве, после чего получают посадочный материал, пригодный для выращивания в нестерильных условиях.4-5 П р и е р 1. Апексм стерилизют 1 мином спирте и 20 миниацида, трижды продой и помещают наодержащую, мг/л:Минеральные солТиамин НСНикотиновая кисПиридЬксин НОИноэитГлицинБАП10 15 20 25 30 35 40 45 50 ИУК 0,1 ПВП, г/л 10 Сахароза, г/л 30 Агар, г/л 7 рН среды 5,8.Для получения 100-ной стерильности испытывают разное время выдерживания апексов в 0,1-ном растворе диацида, результаты представлены в табл.2.Из табл,2 видно, что время 20 мин является оптимальным. При такой экспозиции получают 100 Я, -ную стерильность при полной жизнеспособности эксплантов,П р и м е р 2. На первом этапе культивирования в пиаттельную среду 1, приготовленную на основе прописи МЯ, кроме общепринятых концентраций витаминов (тиамин, никотиновая кислота, пиридоксин - по 1 мг/л) вводят дополнительные вещества, повышающие выживаемость эксплантов, мг/л; инозит 50; глицин 10 и ИУК 0,1.Для стимулирования пролиферации пазушных меристем в состав среды для размножения (2) вводят БАП в различных концентрациях,В табл, 3 показано влияние цитоктинина (БАП) на микроразмножение абрикоса.Из табл, 3 видно, что полное отсутствие в среде цитокинина является нежелательным, так как приводит к некрозу верхушек побегов и затем к гибели всех эксплантов. Культивирование можно производить, при концентрации БАП в среде 0,1 и 1 мг/л в зависимости от поставленной цели: для размножения материала и быстрого получения большого количества микропобегов следует использовать цитокинин в концентрации 1 мг/л, Перед укоренением целесообразнее снизить концентрацию БАП в 10 раз (0,1 мг/л) для восстановления эпикального доминирования, приводящего к росту побегов в длину.П р и м е р 3. Для индукции ризогенеза побеги культивируют на среде 3, содержащей половину нормы минеральных солей по прописи МЯ,тиамин, никотиновую кислоту и пиридоксин - по 1 мг/л, эуксин (ИМК) и сахарозу в различных концентрациях,Результаты приведены в табл.4.Из табл.4 видно, что лучшим для укоренения является вариант 9, в котором побеги выдерживают на среде с 1 мг/л ИМК в темноте 10 дней, а затем пересаживают на безгормональную среду. Оптимальная концентрация сахарозы 3 (30 г/л). Культивирование на безгормональной среде проводят в условиях освещения,Применение предлагаемого способа в биотехнологии по сравнению с известным способом дает следующие преимущества: сокращение нэ 1 год сроков получения посадочного материала за счет упрощения и уменьшения трудоемкости стадии введения в культуру, а также снижение заражения бактериальными и грибными инфекциямина первом этапе культивирования за счетиспользования апексов растущих побегов. Формула изобретения Способ микроклонального размножения абрикоса, включающий стерилизацию эксплантатов, введение их в культуру, предварительное культивирование, пролиферацию пазушных меристем до получения микропобегов, их последующее укоренение и адаптацию к условиям открытого грунта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения размножения и снижения уровня бактериального заражения, в качестве эксплантатов используют апексы побегов, полученных из распустившихся почек срезанных черенков, стерилизацию проводят последовательно в 70 оь-ном этаноле и в 0,1 о-ном растворе диацида, предварительное культивирование проводят на питательной среде Мурэсиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксйна НС 1, 50 мг/л инозита, 10 мг/л глицинэ",1 мг/л с-бензиламинопурина при содержании сахарозы 30 г/л и агара 7 г/л, профилерацию меристем проводят на среде Мурасиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг(л пиридоксина НС 1, 1 мг/л бензиламинопурина при содержании сахарозы 30 г/л и агата 7 г/л, укоренение проводят в течение 10 дней в темноте на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей интегредиенты в количестве 1/2 набора по прописи в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксина НС 1, 1 мг/л индолилмасляной кислоты при содержании сахарозы 30 г/л и агара 7 г/л, затем полученный растительный материал переносят на безгормональную среду в условия освещения, а адаптацию полученных растений осуществляют путем подращивания в стерильной почве.1664201 Таблица 1 Со е жаниеинг е иентов, мг/л, в с е е Ингредиенты 1/2 нормы Полная норма Полная норма 1 1 1 1 1 30 г/л 7 г/л30 г/л7 г/л Таблица 2 Таблица 3 Кропределяется количеством вновь образованных побегов на один первоначальныйпобег,Минеральные соли по прописи Мурасиге-Скуга Тиамин Никотиновая кислота Пиридоксин НС Индолил-уксусная кислотаИУК) 6-БензиламинопуринБАП) Инозит Индолил-масляная кислота(ИМК Глицин Сахарова Ага1664201 Таблица 4 Составитель В.ДемкинТехред М.Моргентал Редактор Н.Туп Корректор Э.Лончакова Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 10 Заказ 2334 Тираж 367 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5