Способ определения аллергических реакций на лекарственный препарат

СОЮЗ СО 8 ЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) 8 53 ЗОБРЕТЕ САН ЬСТ ВТОРСНОМУ СВИ тафьева аллергии. ГКНТ СССР лиси, 198 меди я диагеских и а нестеточносре ак ций литель -кие аналкие реакц Изо бретв частност ческих медицин и можеренциал и псев ние относит енарко- фференельные препараты и алгетики за счетовоспал ические ргологи бьггь исп ной диаг ано для дифи атопичес ь ния атопич их реакций. я тем что ск оп циального псевдоалл т ргиче нестероеских реа доаллергич идные про ол ные препаралгетики (в ивовоспалите котические а НСПП), обретения яв ости определе плазм ных в бо ределяют нозинмон действия ты и ненардаль нейшем Целью из посл ляется повния аллерг ние точ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯИПРИ ГКНТ СССР(71) Саратовский государственный медицинский институт и 2-й Московскийгосударственный медицинский институим, Н.И.Пирогова(56) Кьелман М, ИГЕ при клиническойАллерготест: Семинари фирмы Фармация . - Тби) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛПЕРГИЧЕСКИХАКЦИЙ НА ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ(57) Изобретение относится к не и может бьггь применено дл ностики побочных иммунологич неиммунологических реакций н роидные противовоспалительны раты и ненаркотические аналг Цель изобретения - повышение ти определения аллергических на нестероидные противовоспа ные препараты и ненаркотичес гетики за счет дифференциального определения атонических и псевдоаллергических реакций, Цель достигается тем, что у больных в плазме, обогащенной тромбоцитами, определяют содержание АМФ без действия индуктора агрегации, через 60-80 с после воздействия АДФ и через 60-80 с после воздействия АДФ на предварительно инкубированную в течение 15-20 мин плазму обогащенную тромбоцитами, с отдельными нестероидными противовоспалительными препаратами ипи ненаркотическими аналгетиками, и при уменьшении содержания ЦАМФ более чем на 107. после действия индуктора на пре- О6 инкубированную с препаратами плазму, богатую тромбоцитами по сравнению с контрольным образцом, диагностируют 1 РЕ-зависимые реакции на нестероидные противовоспалительные препараты (СП), а при увеличении содержания ЦАМФ более чем на 10% в плазме, богатой тромбоцитами, в образцах без инкубации с НСПП и инкубированных с СПП диагностируют псевдоаллергическций на нестероидные прот остигаетс Уатой тромбоцитамисодержание циклическогфосфата (ЦАМФ) до ииндуктора агрегации (АДФпри этом одну порцию плазмы инкубируют с физиологическим раствором (контрольный образец), а другие порции с равным количеством исследуемых ле 5 карственных препаратов в конечной концентрации 10 М (опытные образцы), и при уменьшении содержания ЦАМФ после действия индуктора по сравнению с исходным содержанием в контрольных и опытных образцах диагностируют 1 яЕ- зависимые реакции на НСПП, а при увеличении содержания ЦАМФ в контрольных и опытных образцах после действия индуктора диагностируют псевдоаллергические реакции.Способ осуществляют следующим образом.У больного из локтевой вены берут кровь в 3,87-ный раствор цитрата нат рия (10;1), ив которой путем центрифугирования в течение 10 мин при 150 я получают богатую тромбоцитами плазму, а путем дальнейшего центрифугирования при 12008 - бестромбоцитарную плазму 25 После подсчета клеток равные объемы богатой тромбоцитами плазмы (БТП) инкубируют в течение 15-20 мин с 20- 40 мкл физиологического раствора ипи с 20-40 мкл отдельных НСПП (в конеч --Фной концентрации 10 М) . В указанном инте рвале в ремени достиг ае тся инактивация фермента РСН-синтетазы при действии НСПП. После инкубации к тромбоцитам добавляют индуктор агрегации АДФ в концентрации 0,1-0,2 1 О" М, через 60-80 с (время максимально достигаемой агрегации) осуществляют экстракцию циклических нуклеотидов (этанольная экстракция подкисленным эта иолом - 1 мл 1 н, НС 1 на 100 мл этанола) и определяют концентраци ЦАМФ.В основу предлагаемого способа диагностики 18 Е-зависимых реакций на НСПП легло обнаруженное явление уси ления агрегационной способности тромбоцитов у больных атопией. Нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотичесыие аналгетики являются классическими фармакологическими агентами, которые угнетают ак,тивность тромбоцитов, При неиммунологических реакциях НСПП проявляют себя как ингибиторы функции тромбоци-тов, при 18 Е-зависимых феноменах на 55 блюдается парадоксальный эффект,при инкубации с НСПП - активация функции тромбоцитов, Такой необычный ответ вызван тем, что при наличии атопии НСПП, как и другие истинные аллерге -ны, активируют 18 Е-зависимое высвобождение фактора, активирующего тромбоциты,Повышение уровня ЦАМФ происходиттолько у больных с псевдоаллергией,а у здоровых и больных атопией (прилюбом виде сенсибилизации) определяется уменьшение концентрации циклического нуклеотида после действияиндуктора агрегации.Разграничение нормального ответаот атопии и наличие атопии к конкретному НСПП устанавливают приуменьшении ПАМФ в БТП после действияиндуктора агрегации на преинкубированную с НСПП плазму, богатую троибоцитами. У здоровых или больных сатопией, обусловленной сенсибипизацией к другим видам аллергенов (ноне к НСПП), отсутствует однонаправленный характер изменений в контрольном и опытном образцах.Сравнительные исследования поизвестному и предлагаемому способампроведены у 29 больных с различнымиклиническими проявлениями непереносимости НСПП. Из 20 больных низкийуровень 1 дЕ (ниже 20 кЕ/л) определену 8 пациентов (27,5/), высокий уровень (выше 1 00 кЕ/л) - у 13 (44,8 Х),промежуточный, диагностически незначимый (от 20 до 100 кЕ/л) - у 8(27,5 Е) . Число больных с трудно дифференцируемым значением 1 дЕ приближается к тем цифрам, которые указаныв литературе, - от 30 до 377С помощью предлагаемого способаустановлено, что псевдоаллергическиереакции имеют место у 17 больных(58,6 Ж), атопические - у 11 (37,9 Х),не удалось диагностировать тип реакции только у 1 больного (3,43) . Такимобразом, точность предлагаемого способа составипа 963, что значительнопревышает точность известного спосо-,ба. Прпвеока диагноза проводилась путем постановки провокационных тестови клиническим наблюдением за больными. П р и м е р 1. Больной М., 25 лет, обратился в аллергологический центр с жалобами на повышение температуры, головную боль и боль в суставах, появление сыпи на коже кистей, стоп, голеней, предплечий, туловища, В те-чение двух предшествующих дней прини5 152 мал амидопирин, цитрамон.и други ле - карственные препараты, Диагностирована многоформная экссудативная эритема. Определено содержание 1 еЕ 1200 кЕ/л.Полученные данные говорят об атопии, но не представляется возможнымсудить, чем обусловлено повышениеуровня 18 Е - лекарственными препаратами ипи другими причинами. Известно,что к временному увеличению уровня1 еЕ приводят вирусные инфекции, а убольного были клинические симптомы,напоминающие респираторную инфекцию.С целью дифференциальной диагностики проведено исследование уровняЦАМФ в БТП, Результаты исследованияследующие. Исходное содержание ЦАМФв БТП 17,1 ршо 1/10 тромбоцитов, посЧле действия индуктора на БТП, проинкубированную с физиологическим раствором, содержание ЦАМФ 6,0 ршо 1/1 О9тромбоцитов (контрольный образец), вБТП, проинкубированной с амидопирином, содержание ЦАМФ после действияиндуктора 9,4 ршо 1/1 О клеток (опытЧный образец), т.е. произошло уменыпе -ние содержания ЦАМФ после действияиндуктора в контрольном и опытном образцах. Установлен 1 еЕ-зависимый вариант непереносимости НСПП. Черезгод после случайного приема таблеткиот головной боли, содержащей пиразолоновые производные, развился рецидив многоформной экссудативной эритемы с повышением уровня 1 дЕ до10000 кЕ/л, что подтверждается диагнозом 1 еЕ-зависимого механизма непереносимости НСПП,П р и м е р 2. Больной У., 23 года, направлен на консультацию из госпиталя, где находился в связи с развившимся у него после приема ряда лекарств, в том числе аспирина (АЦСК),синдрома Стивенса - Джонсона. Содержание 1 еЕ всыворотке 33 кЕ/л. Длявыявления непереносимого лекарственного препарата проведено исследование ЦАМФ в БТП. Исходный уровень ЦАМФ22,0 ршо 1/10 тромбоцитов. После ин 9дукции агрегации АДФ содержание НА 11 Фв контрольном образце 38,0 ршо 1/109тромбоцитов, в опытном (БТП, проинкубированная с АЦСК) содержание НАМФ24 ршо 1/10 клеток, Таким образом,9по увеличению содержания ЦАМФ в контрольном и опытном образцах по сравнению с исходным уровнем диагности 7588 15 40 45 50 55 1 О 20 25 30 35 рована псевдо аллергическая реакцияна АЦСК (аспирина) . В дальнейшем пос-ле приема парацетамола, который неявляется ингибитором РСН-синтетазы и,следовательно, не может вызывать,псевдоаллергических реакций, у больного симптомы непереносимости не развивались. Следовательно, правильностьвывода о неиммунологическом характере непереносимости АЦСК подтверждена, чем и доказана достоверностьпредлагаемого способа,П р и м е р 3. Больная 3.,56 лет,находилась в клинике по поводу болезни оперированного желудка, получала одновременно анальгин и пенициллин в инъекциях. На фоне проводимойтерапии развился анафипактическийшок. После выведения больной из шока через 2 недели проведено исследование общего 18 Е, Содержание 1 еЕсоставило 240 кЕ/л. Количество ЦАМФв исходном образце БТП 10,6 ршо 1/109тромбо цитов, после индук ции агрег ации АДФ в БТП, проинкубированной сфизиологическим раствором, - 8,2ршо 1, в опытном образце (БТП, проинкубированная с анальгином) после действия индуктора - 7,1 ршо 1/109 кле-ток. Диагностирована 1 дЕ-зависимаяреакция на анальгин. Наличие аллергии к пенициллину проведено радиоаллергосорбентным тестом (ВАЯТ) с пенициллоилами С и Ч. Результаты ДРАЯТотрицательны. Таким образом, диагностика предлагаемым способом позволила дифференцировать непереносимость НСПП от лекарственной аллергии к пенициллину у больной с высоким уров-, нем неспецифического 18 Е при одновременном приеме нескольких лекарств. П р и м е р 4, Больная А.,ЗЗ лет, находилась по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 1 степени поливалентной леКарственной непереносимости. В анамнезе развитие приступов удушья после приема анальгина, цитрамона, пиркофена. В июне 1984 года были получены положительные кожные пробы с аллергеном березы, Определено содержание 18 Е 68 кЕ/лУровень 1 еЕ находится в так называемой промежуточной зоне, которая является недиагностической,и не позволяет четко дифференцировать атопии от неатопических феноменов. Больной для уточнения данных анамнеза прове1527588 противовоспалительные препараты иненаркотические аналгетики за счетдифференциального определения атопических и псевдоаллергических реакций,из крови выделяют обогащенную тромбоцитами плазму, вносят в нее лекарственный препарат и инкубируют, затем вносят индуктор агрегации тромбоцитов и определяют содержание циклического адепозинмонофосфата и приуменьшении содержания его по сравнению с контролем, не содержащим индуктор, определяют атопическую реакцию,а при увеличении содержания - псевдоаллергическую реакцию на лекарственный препарат,с арцев Корректор А.Обручар Заказ 7507/51 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 дено исследование предлагаемым способом, Исходный уровень ЦАМФ в БТП 3,75 ршо 1/10 ф тромбоцитов. После действия индуктора содержание ЦАМФ в контрольном образце (БТП, инкубиро 5 ванная с физиологическим раствором) повысилось до 28,5 рпо 1, в опытных образцах (БТП, инкубированная с индометацином и анальгином) после действия индуктора содержание ЦАМФ составило 15,1 и 15,8 рво 1/1 О клеток,9т.е, было повышение по сравнению с исходным в несколько раэ. Диагностирована аспириновая астма с неиммунологическими механизмами непереносимости НСПП. Достоверность диагноза подтверждена провокационным тестом с НСЦП.П р и м е р 5. Больная Р.,59 лет, 20 наблюдается в аллергическом центре по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 2 степени. В анамнезе отмечался приступ удушья после приема метиндола. Содержание 1 яЕ 25 120 кЕ/л, что позволяет предполагать наличие атопии, Для уточнения данныханамнеза проведено обследование предлагаемым способом. Исходное содержание ЦАМФ в БТП 4,45 ршо 1/101 тромбоцитов. После действия индуктора в контрольном и опытном образцах (БТП, инкубированная с физиологическим раствором и индометацином содержание ЦАМФ увеличилось до 9,4 н 11,7 ршо 1/109 клеток соответственно, Диагностирована непереносимость НСПП,обусловленная неиммунологическими феноменами. Кожные пробы со всеми группами неинфвкционных аллергенов отрицательны. Последний пример свидетельствует о том, что само по себе увеличение уровня 1 дЕ до 120 кЕ/л не может быть критерием атопии. При высоком уровне 1 яЕ, обусУ ловленном индивидуальными особенностями, у больной наблюдаются псевдоаллергические ненммунологические реакции на НСПП, которые диагностируются предлагаемым способом.Как видно из приведенных примеров, использование предлагаемого способа50 обеспечивает более полное выявлениеСоставитель А.БонРедактор И.Горная Техред М.Дидык псевдоаллергических реакций, как засчет уточнения типов непереносимостив диапазоне недиагностических, промежуточных значений 1 яЕ, так и за счетвыявления неиммунологических реакцийна НСПП у больных с высоким индивидуальным уровнем 1 яЕ,Точность предлагаемого способадостигает 90-967., точность известЬго 63-707 Важным достоинством способа является почная безопасностьбольных, возможность одновременногоисследования препаратов, относящихсяк разным химическим группам.Предлагаемый способ позволяет распознавать етопическую или неиммунологическую (псевдоаллергическую) реакцию на ЙСПП, а известные способы позволяют распознавать или только непереносимость к группе лекарств безуточнения характера, или только разграничивать атопии от псевдоаллергиибез определения конкретного лекарственного препарата. Следовательно,для дифференциации атопических ипсевдоаллергических реакций на 1 СППони должны применяться в совокупнос -ти.Ф о р м у л а изобретения Способ определения аллергических реакций на лекарственный препарат путем исследования крови, о т л и - ч ающийс я тем, что, с целью повьппения точности определения аллергических реакций на нестероидные