Способ определения физиологического состояния сеголетков и годовиков карповых рыб

(21) 4 (22) 0 (46) 1 (71) А кий ин ательсн еток крови промышпенЗИОЛОГИЧЕСГОДОВИКОВ рыбной пособам состоя именно ическог довиков каррыб извлемассой 1 г анализ. Для ют в стерильпереносят и, в которые ичество изористого нать ют, Посл ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ПЛАНТ СССР РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 240616/28-135.05.875,02.89, Бюл. У бзовский научно-исследститут рыбного хозяй(54) СПОСОБ ОПРЕДЕПЕНИЯ ФИКОГО СОСТОЯНИЯ СЕГОЛЕТКОВ ИКАРПОВЫХ РЫБ(57) Изобретение относитсяпромьппленности, а копределения физиологическо Изобретение относится к рыбнойпромышленности, а именно к способам,позволяющим определить физиологическое состояние карповых рыб,Целью изобретения является болееранняя диагностика заболеваний и токсикозовСпособ осуществляют следующим образом.Для установления физисостояния сеголетков и гоповых рыб у исследуемыхкают почку и часть почкиберут на микологическийэтого часть почки помещаные бюксы, взвешивают ипробу в фарфоровые ступкприливают 10-кратное колтонического раствора хпория, и тщательно растира ния сеголеткови годовиков карповых рыб. Целью изобретения является наиболее раннее диагностирование заболе ваний и токсикозов. Способ определения физиологического состояния включает определение в 1 г почки у рыб, содержания дрожжеподобных грибов рода СапдЫа, Содержание 1,0-15,0 тыс. клеток грибов у сеголетков 3,0- 30,0 тыс. клеток грибов у годовиков в 1 г ткани почки свидетельствует о начале ухудшения их состояния. Сйособ расширяет круг показателей аномального состояния рыб, может диагностировать начало любого заболевания или токсикоза, вызванного, напри мер, недоброкачественным кормом. 10-20-минутного отстаивания О, 1 мп надосадочной жидкости высевают на агар Сабура и тщательно растирают шпателем. После этого пробу помещают в термостат и на 2,3,5-е сутки инкубации при +27 С подсчитывают количество проросших грибов (тыс.клеток в 1 г почки). Наличие дрожжеподобных грибов в 1 г почки у сеголетков рыб в количестве от 1,0 до 15,0 тыс. клеток, а у годовиков от 3,0 до 30,0 тыс. клеток свидетельствует о наличии ухудшения физиологическогоф состояния рыб данной возрастной группы,Способ дает возможность определят аномальное состояние рыб на самой ранней стадии заболевания любого вида, когда визуальные или клинические признаки его еще не проявились, апроцесс ухудшения физиологического состояния уже начался.Способ может быть использован как самостоятельно, так и в дополнение к другим способам диагностики болез 5 ней рыб или оценки их физиологического состояния.Кроме того, способ расширяет круг показателей возможности определения аномального состояния рыб.Дрожжеподобные грибы, в том числе и рода СапйЫа, относятся к сапрофитной микрофлоре, которая в незначительном количестве присутствует в 15 любом клинически здоровом организме, включая рыб, и при этом не наносит организму вреда, так как иммунитет не дает возможности сапрофитной микрофлоре развиться до такого коли 0 чества, которое приводит к заболеванию.При воздействии на организм неблагоприятных биологических факторов, например интоксикации, инфекции или 25 инваэии, происходит общее ослабление организма и, в первую очередь, его иммунных сил, в результате чего создаются благоприятные условия для развития сапрофитной микрофлоры в таких количествах, которые превышают безвредную для организма норму. Увеличение в организме количества дрожжеподобных грибов выше предельно допустимой нормы является достовер ным показателем общего ослабления организма под воздействием биологических факторов и может служить объективным показателем физиологического состояния организма, в частности,4 О рыб,Установлено, что рост и размножение дрожжеподобных грибов происходит преимущественно в почке карповых рыб.45П р и м е р 1. Исследовали почки сеголетков карпа массой 40 г, которых содержали в двух прудах по 30 га каж-" дый, с плотностью посадки 4 тыс.шт. на 1 га, при идентичных гидрохимичес О ких условиях. Кормление рыб в прудах осуществляли заводскими кормами двух разных партий, При этом в пруде В 1 процесс выращивания рыб протекал без отклонений от нормы, а в пруде Р 2 были отмечены единичные случаи гибели рыб, хотя по поведенческим реакциям состояние живых рыб в обоих прудах не отличалось. Микологический анализ почек провели у живых рыб из прудов В 1 и 2и у погибших рыб иэ пруда В 2.Содержание дрожжеподобных грибовв 1 г почки составило соответственноО, 1+0,03; 1,0+О, 1, 90,6+3,4 тыс.кл.В связи с условно-патогенной природой дрожжеподобных грибов были проведены исследования причин гибелирыб в пруде В 2.Патолого-анатомические исследования погибших рыб показали наличиемногочисленных кровоизлияний по всейдлине кишечника, характерных для интоксикации, а также рыхлость консистенции почки и печени рыб, кровоизлияния в их ткани,Аналогичные исследования были проведены в отношении живых и визуальноздоровых рыб из пруда Р 2. Отмеченаанемия почек. Видимых изменений других внутренних органов не обнаружено.В связи с полученными данными дляокончательного выяснения причин ухудшения физиологического состояния игибели рыб в пруде Ф 2, а также интенсивного развития вследствие этогодрожжеподобных грибов (90,6+3,4 тыс.кл, на 1 г почки) быпи взяты насравнительной токсикологический анализ в соответствии с известной методикой. корма обеих партий,В результате анализа было установлено, что корм, использованный длярыб в пруде Ф 2, остротоксичен, таккак содержит токсины грибов родаАзрегц 11 цэ, что и явилось причинойтоксикоза и гибели рыб в результатепоражения токсинами кишечного тракта.Полученные данные позволили сделать следующие обоснованные выводы и предположения; причиной гибели рыб в пруде У 2 явилась их интоксикация токсинами плесневых грибов рода Аэрегрд 11 цэ; ослабление иммунных сил организма рыбы под воздействием токсинов обусловило интенсификацию развития в нем дрожжеподобных грибов до количества, при котором проявилось их патогенное действие на почку и печень рыбы (погибшие рыбы из пруда 9 2); незначительно увеличено количество дрожжеподобных грибов в почке живых и визуально здоровых рыб пруда Р 2 по сравнению с рыбами из пруда У 1 при отсутствии видимых изменений внутренних органов, поведенческих реакций. Анемия почек сви57871 6 5 14детельствует о том, что интоксикацияэтих рыб и ухудшение их физиологического состояния, находятся на начальной стадии.П р и м е р 2. Определяли содержание дрожжеподобных грибов в почкахрыб из пруда У 2 (согласно примеру 1партию которых в количестве 140 шт.отделили от основной массы рыб иразделили на две равные группы.Одну из групп перевели на кормление тем же кормом, что и рыб в пруде В 1, а другую группу продолжаликормить тем же токсичным кормом дляподтверждения коррекции дальнейшегоухудшения физиологического состояниярыб и интенсификации развития дрожжеподобных грибов, а также для,определения предельно допустимого количества дрожжеподобных грибов, соответствующего начальному периодуухудшения физиологического состоянияПо истечении 10 суток кормлениеу сеголетков, употреблявших полноценный корм, количество дрожжеподобныхгрибов в 1 г почки составилоО, 1 тыс. клеток. Патологических от-клонений внутренних органов от нормы также не наблюдалось, Поведен-.ческие реакции в норме,Аналогичная ситуация наблюдаласьи у рыб в пруде У 2, где корм такжебып заменен на полноценный.У рыб, продолжавших употреблятькорм с токсинами плесневых грибовв течение 10 суток, содержание дрожжеподобных грибов составило 15,0(15,0+0,6) тыс, клеток,При патолого-анатомическом исследовании обнаружена только анемияпочки, Видимых изменений другихвнутренних органов не обнаружено,что указывает на начальный этапухудшения физиологического состояниярыб.П р и м е р 3, Аналогично предшествующим примерам проводили микологические исследования почек рыбпо истечении 30 суток кормления. 5 )10 15 20 25 30 35 ао 45 50 У рыб из бассейна, в котором использован токсичный корм, содержание дрожжеподобных грибов в,1 г почки составило 36,3 (36,3+9,7) тыс. клеток. Рыбы были вялыми, почти не реагировали на раздражение. Патолого-анатомические исследования показали наличие воспалительных процессов в ткани стенок кишечника, появление на них бугристых образований характерной окраски. На жабрах появился белый налет в виде слизи, в почках и печени - кровоизлияния.Данные приведенных примеров свидетельствуют о том, что началу ухудшения физиологического состояния рыб, выразившемуся в анемии почек при отсутствии видимых измененийдругих внутренних органов и поведенческих реакцийсоответствует содержание дрожжеподобных грибов рода СапйЫаот 1,0 до 15,0 тыс. клеток на 1 г почки,Дальнейшему ухудшению физиологи ческого состояния рыб под длительным воздействием токсинов (30 суток), которое выразилось в патологических нарушениях внутренних органов и отклонениях от нормы поведенческих реакций рыб, соответствует увеличение количества дрожжеподобных грибов в 1 г почки до 36,3 тыс, клеток.П р и м е р 4, Аналогично предшествующим примерам бьли исследованы годовики карпа весом 100 г, не имевшие клинических признаков заболевания, и визуально не отличавшиеся от них годовики, которых содержали в пруде, где были зафиксированы единичные случаи аэромоноза. Кроме того, у рыб определяли биохимические показатели их физиологического состояния.В результате исследований установлено, что у контрольных здоровых рыб на протяжении всего периода биохимические показатели не отклонялись от принятой нормы. Так, содержание гемоглобина Н в крови рыб составляло 18,0 г Ж, общего белка сыворотки крови - 3,02 г Е, активность холинэстеразы (ХЭ) на уровне 1,18 мкм АХХ/1 мин/1 л. Содержание дрожжеподобных грибов в 1 г почки составило 0,6 (0,6+0,04) тыс, клеток, патолого-анатомические показатели были в норме.У визуально здоровых рыб из пруда, где были отмечены случаи аэромоноза, уровни Нз и общего белка находились в пределах нормы, а активность ХЭ быпа несколько снижена и составила 0,10 мкм АХХ/1 мин/л.Исследование микрофлоры внутреннихорганов этих рыб показало присутствие патогенных аэромонад/ДНК-тест/,При этом содержание дрожжеподобных57871 8возросло до 90,6 (90,63,4) тыс. клеток. При этом жабры рыб были покрытыслизью, почка и печень рыб были дряблыми с кровоизлияниями имелисьизъязвления кожного покрова, т,е.проявились патогенные свойства дрожжеподобных грибов,Данные приведенных примеров 3,10 5, 6 подтверждают правомерность вывода о том, что ослабление организмарыб и ухудшение состояния, вызванноекаким-либо заболеванием, в частностиаэромонозом, способствует увеличению15 количества дрожжеподобных грибов рода СапйЫа во внутренних органах ипроявлению их патогенных свойств,П р и м е р 6. При дальнейшем содержании рыб в прудах в течение 30 суток у контрольных рыб исследуемые показатели остались без изменений, У опытных рыб уровень Н крови снизился незначительно и составил 15 г 7., Отмечено резкое падение содержания общего белка сыворотки крови до 0,75 г Е и активности ХЭ, которая соответствовала 0,5 мкм , АХХ/1 мин/1 л, Из внутренних органов аэромонады не выделялись, а количество дрожжеподобных грибов в 1 г почки 40 Составитель Т,КрасюковаРедактор А,Маковская Техред М,Ходанич Корректор А.Обручар Тираж 469 Заказ 281/3 Подпис ное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 грибов в 1 г почки составило 3,0 (3,0+0,6) тыс. клеток.П р и м е р 5. По истечении 10 суток дапьнейшего содержания рыб в прудах без проведения лечебно- профилактических мероприятий в опьггномпруде анализ бып повторен. У рыб контрольного пруда все показатели остались без изменений. У визуально здоровых рыб опытного пруда отмечалось снижение общего белка относительно нормы в 2 раза, наблюдалось кратковременное повышение активности ХЭ до 0,22 мкм АХХ/1 мин/1 л, что свидетельствует о сопротивлении организма заболеванию, т.е. о его начальной стадии.Патолого-анатомические показатели остались на уровне предшествующего примера. Из внутренних органов рыб выделялись единичные колонии аэромонад, в то время как количество дрожжеподобных грибов в 1 г почки возросло до 30,0 (30,0+3,0) тыс. клеток. Формула изобретения20 . Способ определения физиологического состояния сеголетков и годовиковкарповых рыб путем исследования тканей рыбы и оценки начала ухудшения 25 физиологического состояния по результатам последнего, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью болееранней диагностики заболеваний итоксикозов, для исследования используют ткань почки, в процессе исследования определяют наличие в нейдрожжеподобных грибов рода СапйЫа,оценку проводят по количеству последних в 1 г ткани почки, а о началеухудшения физиологического состояниярыб судят по содержанию от 1,0 до15 тыс. клеток грибов у сеголеткови от 3,0 до 30,0 тыс. клеток у годовиков.