Способ исследования транспортной функции эпителиальной ткани

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ВУ где К - констант С - известна анспорта; центрация ств корот- э твета т еличи ого з я еличина А; альной скоросвета к велимакс- максималсс - отношенити развичине А;Р - отношени ая в е натия альной скоросответа к велин ти отмывчине А.олнительно выч т толщину не идкости окол еремешиваемогопителия по форм о 3,14;- известФузии ый коэффициент дифещества; неперемешиваемого ин сло ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ТОРСКОМУ СВИДЕТЕ(71) Научно-исследовательский инсти тут по биологическим испытаниям химических соединений(54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРАНСПОРТНОЙ ФУНКЦИИ ЭПИТЕЛИАПЬНОЙ ТКАНИ(57) Изобретение относится к области медицины, Физиологии и биофизики, а именно к фармакологии активного транспорта натрия и питательныхвеществ, и может быть использованопри оценке действия веществ на транспорт ионов через эпителиальнуюткань. Цель изобретения - упрощениеспособа исследования транспортнойфункции эпителиальной ткани за счетоднократного добавления исследуемого вещества, измерения одиночногоответа тока короткого замыкания (ТКЗ)и повышение информативности за счетхарактеристики транспорта веществ вслоях жидкости, прилегающих к эпителию, Препарат эпителия помещают вкамеру и измеряют через него ТКЗ,Затем в один из отсеков камеры, добавляют исследуемое вещество при скорости перфузии не менее 3,2 мл/мин и регистрируют возрастание ТКЗ с начальной скоростью Ч на величину А. В ответ на исключенйе вещества из раствора ТКЗ с начальной скоростью Ч уменьшается до исходного значения. По указанным величинам находят кинетические параметры данного ве- . щества по следующим формулам: К=С С+КИзобретение относится к медицине, физиологии и биофизики, а именно к фармакологии активного транспорта натрия и питательных веществ,и может быть использовано при оценке действия веществ на транспортионов через эпителиальную ткань,Цель изобретения - упрощение способа за счет однократного добавления исследуемого вещества и измерения одиночного ответа тока короткого замыкания (ТКЗ)и повышение информативности за счет характеристики транспорта веществ в слоях жидкости прилегающих к эпителию.Способ осуществляется следующимобразом,Препарат эпителия помещают в камеру и измеряют через него ТКЗ. Затем в один из отсеков камеры добавляют исследуемое вещество и регистрируют возрастание ТКЗ с начальнойскоростью Ч на величину А, В ответна исключение вещества из раствораТКЗ с начальной скоростью Ч уменьшается до исходного значения. Поуказанным величинам находят кинетические параметры данного веществапо следующим формулам: Дополнительно вычисляют толщину неперемешиваемого слоя жидкости около эпителия по следующей формуле: где К - константа транспорта; А и А ; величина ответа ТКЗ и еемаксимальное значение;С - концентрация вещества;Э - известный коэффициент диффузии вещества;Х - толщина неперемешиваемогослоя;/А; Р =Ч /А,П р и м е р. Крысу забивают, и извлеченную тонкую кишку промывают холодным физиологическим раствором до полного удаления кишечного содержимого, Из средины кишки исоекают отрезок длиной 1,5 см и разрезают его вдоль контрамезентариальной линии. Распластанный препарат в ви 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 де перегородки помещают в камерутипа Уссинга. Подсоединяют к камере систему перфузии и провода фиксатора потенциала и измерителя температуры, Включают перистальтический насос, подающий раствор в камеру соскоростью не менее 3,2 мл/мин, благодаря чему раствор в камере заменяется за 0,65 с, время меньшее чем интервал 4 с, за которое проводитсяизмерение начальных скоростей раэвития и отмывания ответа ТКЗ, Включают фиксатор потенциала, поддерживающий разность потенциалов на препарате, равную 0 мВ, и ток, протекающий через препарат регистрируют на самописце с цифропечатающим устройством (интервал времени между печатанием соседних точек 4 с). Послевыхода ТКЗ на стационарный уровеньнасос останавливают и переносят заборную трубочку, обеспечивающую перфузию мукозного раствора, иэ сосуда с физиологическим раствором во второй сосуд, содержащий тот же раствор и исследуемое вещество в требуемой концентрации, и включают перфузию. ТКЗ начинает увеличиваться и выходит на новый более высокий уровень (фиг. 1). Замеряют изменение величины ТКЗ за первые 4 с (расстояние между первыми двумя точками ответа) и, деля его на величину ответа А, находят относительную начальнуюскорость развития ответа М . Послевыхода ТКЗ на новый уровень насосопять останавливают, переносят заборную трубку в первый сосуд и включают перфузию. ТКЗ начинает быстроуменьшаться, постепенно выходя наисходный уровень (фиг. 1). Находят уменьшение ТКЗ за первые 4 с и, деля эту величину на величину ответаА, находят относительную начальнуюскорость отмывания ответа Р . Скорость перфузии должна быть не менее3,2 мл/мин ввиду того, что именнопри этих значениях величина ответаТКЗ начинает слабо зависеть от интенсивности смены раствора в камере(фиг, 2). Кроме того, при скорости перфуэии 3,2 мл/мин раствор в камерезаменяется за время (0,65 с) многоменьшее, чем интервал времени, эакоторый измеряется начальная скорость(4 с), В данном случае в омывающийраствор при скорости перфуэии3,2 мл/мин добавляют глюкозу до концентрации 10 мМ. Величина ответагде=3, 1) величине ответа тока короткого замыкания. Вещество А, 1" К,мМ АмаксУ 2, мкм мкА/см к 10 с "10 с мкА/см 7,0 65 5,0 8427,0 14457 129 0,02 45 250 301 271 297 250 5,1 2,2 1,8 1,9 3,5 0,83 0,81 0,96 0,66 1,6 40 42 39 53 30 Глюко ч аМальтозаГалактозаГлицинФлорииин 3 12870ТКЗ равна 40 мкА/см, а относительные начальные скорости развития иотмывания ответа ТКЗ равны соответс твенно сС =О, 051 и=О, 0083 сПодставляя эти значения в соответствующие формулы 1-3, получаем следующие величины К=7,0 мМ, А ==65 мкА/см и 1=250 мкм (см. таблицу).Аналогичные опыты и расчеты проведены для галактозы, глицина и флорицина ( см. таблицу).В предлагаемом способе на одноизмерение затрачивается 20 мин,а в прототипе (базовом объекте) 153-4 ч,В предлагаемом способе в 10 разменьше расход. солей (компонентовфизиологического раствора). Предлагаемым способом на одном препарате можно испытать 10 веществ, а при помощи базового объекта всего 1.По предлагаемому способу можно определить толщину неперемешиваемого слоя жидкости, а по базовому объекту этого сделать нельзя.Таким образом, предлагаемый способ является более информативным, более быстрым и более простымформула изобретения 1, Способ исследования транспортной функции эпителиальной ткани 35 путем измерения величины ответа тока короткого замыкания через препарат эпителия на добавление вешества в омывающий препарат раствор в условиях перфузии с последующим расчетом 4 О константы транспорта и максимальной величины ответа тока короткого замыкания, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, исследуемое вещество добавляют 45 однократно, дополнительно измеряют начальные скорости развития и исчезновения ответа тока короткого замыкания в процессе отмывания при скорости перфузии не менее 3,2 мл/мин,а константу транспорта и максимальную величину ответа тока короткогозамыкания вычисляют по следующимформулам: константа транспорта;- известная концентрация вещества;А - величина ответа тока короткого замыкания;А- максимальная величина А;максо - отношение начальной скорости развития ответа к величине А;- отношение начальной скорости отмывания ответа к величине А.2, Способ по п, 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения информативности способа за счет характеристики транспорта веществ в слоях жидкости прилегающих ж зпителию, дополнительно определяют толщину неперемешиваемого слоя по следующей формуле: толщина неперемешиваемого слоя;14;известный коэффициент диффузии вещества;отношение начальной скорости развития ответа к величине ответа тока короткого замыкания;отношение начальной скорости исчезновения ответа к