Способ качественного определения феомеланина в шерсти животных

.К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сонез СоветскихСоциапистичеснихРеспубпин щ 896572(51)М. Кл,(22)Заявлено 04.04.80 (с) 2905183/30-15 С 01 М 33/00 А О 1 К 67/02 с присоединением заявки М Гоеударстетзицй комитет СОСУ в делен изобретений и открытий(23) П рнорнтет Опубликовано ОУ. 01. 82. Бюллетень М 1 Дата опубликования описания 07.01.82(54) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕОМЕЛАНИНА В ШЕРСТИ ЖИВОТНЫХ тР Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности касается способа определения пигмента. феомеланина в шерсти животных, и может быть использовано в селекционно-племенной работе в каракулеводстве для установления типа пигмента, определяющего окраску каракульских смушков, особенно цветных, уточнения признаков отбора и выяснения особенностей пигменто" образования. Различия расцветок волосяного покрова ягнят каркульской породы обусловлены присутствием в волосах красящих веществ черного или темно- коричневого эумеланина и желто-красного феомеланина.Известен способ определения феомеланина в шерсти животныхт с помо"20 щью составления кривых поглощения света видимого диапазона, выделенного с помощью кислотного разрушения шерсти пигмента, который растворяется затем в слабом растворе КОН 11 1.Недостатком метода спектрометриищелочных растворов является низкаяпроизводительность, большой расходэнергии, обусловленные необходимостью кипятить пробы шерсти в соляной кислоте по 2,5 часа для выделе-.ния меланина, а также большой расходшерсти (порядка 0,5-1 г) на пробу,что означает повреждение дорогогосмушка на большой доле его площади.Цель изобретения - сокращениесроков выявления феомеланина шерсти.Поставленная цель достигаетсятем, что физико-химический анализпроводят с помощью ЭПР-спектроскопии, причем о наличии феомеланинав шерсти животных судят по дополнительному пику на спектрограмме сс 1-фактором 2,013-2,015,П р и м е р. Для реализации способа используют ЭНР-спектрометрЭ 11 АМ и другие более совершенные3 896радиоспектрометры. С незагрязненнойкожи новорожденного или с необработанной шкурки забитого ягненкасостригают около 40-80 мг шерсти,моют ее в двух сменах ксплола и высушивают при комнатных условиях доисчезновения запаха ксилола, Навеску шерсти 20-40 мг помещают в капилляр, подвергают ЭПР-спектрометриис записью сигнала в виде первойпроизводной ЭПР-сигнала. Э 11 Р-спектрометр настраивают так, чтобы До сигнала была максимальной, минимум и максимум первой производной помещалисьна бумажной ленте. Скорость движениябумажной ленты должна быть такой,чтобы ширина основного сигнала ЬНсоставляла 8-5 мм. Если волосы содержат феомеланин, наряду с основныммаксимумом сигнала наблюдается дополнительный пик, вершина которогоимеет с-фактор на 0,007-0,008 больший,чем с"фактор основного сигнала(2,004-2,006),Расстояние от вершины дополнительного пика до нулевой линии в образ.цах шерсти богатых феомеланином достигает 18-237 от основного сигнала.В образцах, где наряду с феомеланином присутствует эумеланин относительная величина Щ 100%) второгопика снижается и он становится малозаметным. Поэтому, если важно обнаружить сравнительно небольшую примесь феомеланина к эумеланину прибор ЭПР-спектрометр настраивает набольшую чувствительность, что исключает запись минимума и максимума первой производной ЭПР-основного сигнала на бумажной ленте, нопозволяет более четко выявить дополнительный пик, если он имеется.На фиг. 1-4 изображены примерызаписанных на 3-сантиметровом радиоспектрометре (ЭПАМ) 311 Р-сигналовобразцов шерсти ягнят каркульскойпороды различных оттенков и расцветок: черной, обусловленной эумеланином ( 1), темно-коричневой (2),красной, обусловленной феомеланином(3) и светло-коричневой (4), которая как и темно-коричневая обусловлена присутствием в шерсти какэу-, так и феомеланина. На фиг. 1,2 и 4, слева, а также на фиг. 3изображены записи ЭПР-сигналов приусичеииях, позволяющих поместитьмаксимум и минимум первой производной сигнала в пределах ширины бумажной ленты пишущего потенциометра. Справа на фиг. 1, 2 и 4 помещены сигналы при большем усилении, четко выявляющие слабый дополнительный пик ч с с -фактором (у вершин), равным 2,013-2,015.Из чертежа видно, что относительно крупный дополнительный пик характерен для красно-коричневого оттенка, Он относительно слабый у темноГ коричневого и светло-коричневого образцов, ЭПР-сигнал которых обусловлен преимущественно эумеланином. В черном образце дополнительный пиквообще отсутствует. Вершине дополнительного пика соответствует о"фактор 2,013-2,015, т.е, больший, чем и-фактор основного сигнала (2,004- 2,006). Стрелкой обозначено направление возрастания магнитного поля. На стрелке отложен масштаб, позволяющий оценить ширину ЭПР-сигнала в единицах напряженности магнитного поля Э (фиг. 3).Проверка полученных данных на основе сопоставления данных ЭПР-спектрометрии со спектрофотометрией щелочных растворов меланина тех же образцов в разных участках видимого спектра показала, что во всех случаях, когда методом спектрофотометрии идентифицировался феомеланин, ЭПР-спектрометрически обнаруживалось присутствие дополнительного пика на ЭПР-спектрограмме.ВПреимущество предлагаемого способа состоит в том, что на анализ одного образца шерсти затрачивается всего 1-2 мин времени, не тратится время и энергия на химическое разрушение шерсти, требующее нескольких часов.Исследованный образец сохраняется в целостности и пригоден для других видов исследований. Количество шерсти, необходимой для исследования, а следовательно, и площадь шкурки, с которой она состригается, внесколько раз меньше, что сокращает ущерб ценному сырью (каракульским смушкам), причиняемого исследованиями. Указанные преимущества метода позволяют гораздо шире использовать в селекционной работе с цветным каракулем определение феомеланина в шерсти и тем способствовать повышению эффективности этой работы.5 896572 4Формула изобретения причем о .наличии феомеланина в шерсти животных судят по дополнительСпособ качественного определения ному пику с о-фактором 2,013-2,015феомеланина в шерсти животных, путем на спектрограмме.физико-химического анализа ее проб, 3о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью сокращения сроков определения физико-химический анализ проводят с помощью Э 11 Р-спектроскопии,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Фищенко 0.11, Автореферат кандь дисс. Фрунзе 1968, 06 фиг. Я Составитель Л. Рубиноведактор М.Янович Техред З.фанта Корректор Г.Назаро 1 одписное Заказ 11691/35ВНИИ 1 882енного комитетений и открь-35, Раушская Тиражосударстам изобр СССРйаб., д. 4 3035, Москв лиал 11 Ш "11 атент", г. Ужгород, ул. 11 роектная, 4