Способ определения генотической специфичности растений

/04 /00 суаарстееииый иемитет ссср по делам иэобретеиий и открытий) Заявитель 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСК СПЕЦИФИЧНОСТИ РАСТЕНИИбр овремен ков ил и растть исетениеобшейо в сел тен спос фичнос озреван ют эти скреше и,ип аботанн ьям судИзвестен также способ определения генетической специфичности растений, который включает охлаждение листьев индикаторного и исследуемого решения и регйстрацию их флюоресценции в интервале спектра 660 - 820 ммк, вызванную светомс длиной волны 480 ммк до охлаждения и после мгновенного охлаждения листа до температуры около 0 С. Способ позволяет определить холодостойкость и морозостойкость растений 21.Однако известные способы позволяют определять лишь один какой-либо признак или одно свойство растений. Способ осушес которую входят мон камера для объект стабилизированный фотоумножитель ( выпрямитель (ВС твляют на устаохрометр (УМ а, лазер (ЛГ источник питанФЗУ/79), высоко22), усилитель п нов ке, вДМР),г 1 Г 56)я лазераольтныйостояннотений и кпользоваИзвеской специсрокам срабатывамеждуфильтрамсвета обрным лист относится к селекци ботанике и может бь ьском хозяйстве.об определения генетичеети растений, в частностй, по ия, при котором листья обловым спиртом, помещают нными поляризованными о величине деполяризации ым спиртом и необработанят о скороспелости сорта Ц. Целью изобретения является однное определение .нескольких призна и свойств растений.Это достигается тем, что листья индикаторного и исследуемого растений охлаждают до температуры 8 - 12 С в течение 8 - 10 суток, и на полученных спектрах флюоресценции индикаторного растения находят точку калибровки определяемых свойств и признаков растений, по ним выравнивают амплитуду флюоресценции всех исследуемых растений данного вида, и по спектру флюоресценции индикаторного растения находят также точки отсчета, в которых величина амплитуды флюоресценции коррелирует со степенью проявления данного признака или свойства исследуемого растения.Желательно строить калибровочные кривые.Ф3716543го тока (прибор Кактус) и записывающееустройство (ЭПП,9). "Для диагностики йа описанной выше установке соответствующего признака растения, например морозоустойчивости, необхо-.димо"заранее произвести тарйровку шкалы(регистрирующего стрелочного прибора усилителя посяоянного тока) по величине амплитуды (интенсивности) флюоресценции индикаторных сортов различных по степениморозоустойчивости.Для этого на спектре флюоресценции, 1 ризменяя длину волны монохроматора, находят точку калибровки (на которой в дальнейшем перед каждым очередным измерением устанавливается величина амплитудыфлюоресценции, т. е. производят калибровИку прибора), а отсчет производится в точкеотсчета, т. е. в такой точке спектра, в которой после калибровки прибора величинаамплитуд флюоресценции будет коррелировать с исследуемыми свойствами (например,морозоустойчивостью) известных индикаторных сортов,Для диагностики другого признака также предварительно (по индикаторным сортам этого признака), находятся другие точки калибровки и другие точки отсчета, по 2которым и производится оценка неизвестных растений.Таким образом, для оценки растений посоответствующему признаку нужно произвести два отсчета в строго определенных точках Шкалы монохроматора.Пример 1, Для определения признакафиллоксероустойчивости сортов виноградаиндикаторами приняты сорт Христина, обладающий высокой устойчивостью к филлоксере, и сорт Шасла белая, обладающий наименьшей устойчивостью к филлоксере.Листья винограда этих сортов срываютот идентичнвя .побегов с седьмого по девятое междоузлия и помещают в морозильнуюкамеру при температуре - 8 С (возможноиспользование. морозильной камеры бытового холодильника, например ЗИЛА, Днепра).Через восемь суток определяют точки калибровки.Для этого помещают вынутыи из холодильной камеры лист в спектрофлюориметри освещают его лучом лазера, свет флюоресценции пускают через входную щель монохроматора, в выходной щели монохроматора при сканировании получают изображе- зоние спектра флюресценции.Эти спектры (для каждогосорта) последовательно записывают на бумажной лентесамописца ЭПП, а затем графическисравнивают.На спектрах сортов Христина и Шаслабелая находят точки, где амплитуда обоихсортов имеет одинаковую величину. Это -точка калибровки. На спектрах этих же сортов находятсяточки; где амплйтуда имеет наибольшую разницу между сортами. Это - точка отсчета.Точки, найденные по данному признаку:точка калибровки Христина Х =643 нм,,1-40 (Я - амплитуда по регистрирующемуприбору); точка калибровки Шасла белая1=643 нм, 1-40; точка отсчета ХристинаЛ"668 нм, 3-52,4, точка отсчета Шасла белая -668 нм, 1-80,0.Сорта с амплитудой отсчета, близкой к50 относятся к устойчивым, а с амплитудой 80 - близкие к неустойчивым сортам.Среднеустойчивые занимают промежуточныезначения. Тарировочная шкала имеет следующий вид:Устойчивые сорта 40 - 53 относительныхединиц.Среднеустойчивые 60 - 70 относительныхединиц.Неустойчивые 75 - 85 относительных единиц и более,Пример 2. Для определения признакаморозоустойчивости сортов Лаванды лекарственной индикаторными сортами принятысорт Лаванда настоящая, выдерживающаяморозы - до 30 С; гибрид Первенец, выдерживающий морозы - до -23 С; Лавандашироколистная, выдерживающая морозы -до 16 С,Листья Лаванды этих сортов собираютс растений, находящихся в идентичных условиях внешней среды, помещают в морозильную камеру при -8 С.В морозильной камере листья выдерживают в целлофановых пакетах девять суток,затем листья используют для определенияточек калибровки и отсчета. Для этого вынутый из холодильной камеры лист помещают в спектрофлюориметр и освещают лучом гелий-неонового лазера, свет флюоресценции пропускают через входную щель монохроматора. В выходной щели монохроматора получают изображение спектра флюоресценции.Эти спектры последовательно записывают на бумажной ленте самописца ЭПП-О 9,а затем графически сравнивают.На спектрах сортов Лаванда настоящаяи Лаванда широколистная находят точки,где амплитуды флюоресценции обоих сортов имеют одинаковую величину. Это - точки калибровки.На спектрах этих же сортов находятсяточки, где амплитуды имеют наибольную разницу между сортами. Это - точка отсчета.Точки, найденные по данному признаку,оказались: точка калибровки 2850 деленийпо монохроматору УМ, (Я -680 нм) - амплитуда 80 делений по шкале; имеющей 100делений); точка отсчета 2750 делений барабана УМ(или 3-650 нм).В точке Янм получены следующиеотсчеты:716543Лаванда настоящая - от 28 до 36 делений шкалы,Лаванда широколистная - от 44 до 49делений шкалы,Гибрид Первенец - от 35 до 45 делений шкалы.Следовательно, сорта с амплитудой в Среднеустойчивые 54 - 865точке отсчета около 45 делений будуг неустойчивыми к морозу, а сорта с амплитудой 33 деления - устойчивыми. НеустойчивыеТарировочная шкала имеет следующийвид: 38 - 53 --Устойчивые сорта 29 - 36 относительных единицСреднеустойчивые 35 - 45 относительных единиц Неустойчивые Формула изобретения Точка калибровки по данному признаку(устойчивость к мучнистой росе) Я -656 нм. Точка отсчета на Д -687 нм. 4 Я 45 50 относительныхединиц и болееПроверены гибриды, из которых указа.иным способом отобраны лучшие.Пример 3. Для определения признака устойчивости садовых роз к мучнистой росе (широко распространенному заболеванию роз) индикаторными сортами приняты:Сорта Камелия, Майор Гагарин - неустойчивые;Сорта66 м, - 4511; 38 м - 1691 - . высокоустойчивые;Сорта17 - к 1438; 102 м - 974 - среднеустойчивые.После промараживания листьев роз в течение восьми, суток при -10 С они готовы для определения точек калибровки и отсчета. Для этого вынутые из холодиЛьника листья помещают в спектрофлюориметр и получают спектры их флюоресценции. В начале крайних индикаторных сортов спектры записывают на диаграмме ЭПГ 1-09; нахо-. дятся точки на кривых спектра, где амплитуды устойчивых и неустойчивых сортов имеют одинаковые величины. Это - точка калибровки, находятся точки, где амплитуды крайних индикаторных сортов имеют наибольшую разницу между сортами. Это точка отсчета,6В точке отсчета Янм получены следующие результаты, а тарировочная шкала имеет следующий вид:Устойчивые сорта 78 - 100 относительныхединиц; Предлагаемым выше способом проведе 1 о на проверка гибридных форм и выделенысеянцы 41 м - 4332; 43 м - 4325, очень устойчивые к мучнистой росе, которые ускоренно размножаются.Использование предлагаемого способа 15 позволит сократить селекционный процессв несколько раз,так как определение целого ряда признаков и свойств растений выполняется одновременно. Способ определения генетической специфичности растений, включающий охлаждение листьев индикаторного и исследуемо го растений и регистрацию их флюоресценции в интервале спектра 660 - 820 ммк, отличающийся тем, что, с целью одновременного определения нескольких признаков или свойств растений, листья растений охлаждают при температуре - 8 - 12 С в течение 8 - 10 суток, на спектре флюоресценции находят точку калибровки, где амплитуды индикаторных и исследуемых растений имеют одинаковую величину, а затем по индикаторным растениям находят точки отсчета, ко торые лежат на точках амплитуд, имеющихнаиболншее удаление друг от друга, при этом амплитудьг всех йсследуемйх растений будут располагаться между точками отсчета. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР293576, кл. А 01 Н 1/06, 1969.2. Авторское свидетельство СССР357927, кл. А 01 6 7/00, А 01 Н 1/04,1971 (прототип).Составитель М, Дранишников Редактор В. Фельдман Техред К. Шуфрнч Корректор Г. Назарова Заказ 9687/1 Тираж 723 Подписное ЦН И И ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП аПатентэ, г. Ужгород, ул. Проектная, 4