Способ получения антирабической вакцины

ОП ИСАН И ЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1 ц 687841 Союз Советских Социалистических Ресноблик(22) Заявлено 29,06.78 (21) 2637322/28-13 51) М. Кл.С 12 К 5/О присоединением заявкиГооударстееннын комитет СССР, ио делам изобретений и открытий(45) Дата опубликования описания 07.11.80 15.371/,372088.8) 72) Авторы изобретения М, К. Каракуюмчян, Л. В, На летенева, Н. И, Бондикова, ВО, Г, Анджапаридзе и А ковский научно-исследовательпрепарато И. Л. П 71) Заявитель ИЯ АНТИРАБИЧЕС АКЦИНЬ 4) СПОСОБ ПОЛ ральном заражении мышей не ниже 10 ЛР;О/0,03 мл. Из мозга инфицированных кроликов готовят суспензию в разведении 1: 100 в физиологическом растворе и вводят в объеме 0,3 - 0,5 мл в мозг 2 - 10 овцам (для получения одной серии вакцины). Овец, заболевших лабораторным бешенством с латентным периодом 90 - 144 ч и типичной клиникой, тотально обескровливают, отделяют голову и в стерильных условиях извлекают головной мозг, предварительно взяв пробу для контроля на стерильность. Далее мозг измельчают в гомогенизаторе до получения тонкодисперсной взвеси, которую разводят стерильным буферным раствором с рН 7,1 - 7,3 при температуре 37 С до получения 20% -ной суспензии.Буферный раствор имеет следующий состав, г/л:КН 2 Р 04 0,675МаОН 0,14ХаС 1 17,4 Вода бидистиллированная Остальное Примечание: КН,РО 4бавляют в виде 0,2 М раство17,5 мл соответственно),аОН д (25 мл Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии.Известен способ получения антирабической вакцины путем гомогенизации вирус- содержащей мозговой ткани в солевом ра створе с последующей инактивацией и лиофилизацией целевого продукта 1.Однако вакцина, полученная известным способом, содержит много балластных веществ и является реактогенной. 10Целью изобретения является снижение реактогенности вакцины.Цель достигается тем, что гомогенизированную мозговую ткань разводят буферным раствором с рН = 7,1 - 7,3, содержащим 0,005 М раствор КН 2 РО 4, 0,0035 М раствор ХаОН, 0,3 М раствор ИаС 1 и бидистиллированную воду, до получения 20%-ной суспензии, затем ее встряхивают, центрифугируют и надосадочную жидкость инактивируют бетапропиолактоном,Кроме того, встряхивание и центрифугирование ведут при 32 - 37 С.П р и м е р 1. Для получения очищенной инактивированной антирабической вакцины из мозга овец используют фиксированный вирус бешенства штамм Москва, который пассируется через мозг кроликов и имеет инфекционный титр при интрацеребайчик, Э. Р. Пилле,Л, Донюш, 3. В, НикулинТ. Кравченкокий институт вирусных687841опыта Материал Показатели 2 3 7 8 1 О 6,7 6,5 6,0 7,5 6,25 7,25 7,0 6,5 7,25 7,5 Титр вируса в 1 д ЛД,;/0,03 мл 7,1 Мозговая суспензия до очистки32,0 24,8 37,3 30,8 28,5 21,2 34,9 21,2 28,4 28,0 Белок, мггмл 35,0 7,5 6,5 6,25 7,0 7,5 7,21 6,25 7,5 7,1 Титр вируса в 1 д ЛД 5 о/0,03 мл Мозговая суспензия после очи- стки 5,4 4,25 4,25 5,3 5,17 6,25 9,5 7,0 9,1 8,1 Белок, мг/мл Буферный раствор стерилизуют автоклавированпем.Полученную 20%-ную мозговую впруссолержащую суспензию встряхивают на шуттель-аппарате (120 - 150 качании%ин) при 5 37 С в течение 1 ч. После этого суслензию переносят в подогретые центрифужные стаканы и центрифугируют 30 мин при 1200 -- 1500. Надосадочную вируссодержа щуко жидкость, свободную от нерастворимых бел ков и липидов, смешивают с равным объемом стерильного раствора 15% -ной саха- розы на бидистиллированной воде, содержащего бетапропиолактон в соотношении 1: 2000, Конечное разведение бетапропио лактона в полуфабрикате составляет 1: 4000, а концентрация сахарозы 7,5% . Инактивацию вируса проводят при комнатной температуре (20 - 25 С) в течение 3 ч при непрерывном перемешивании. По том бутыли переносят в холодильную комнату с температурой 4 - бС на 48 - 72 ч, Полуфабрикат проверяют на стерильность и полноту инактивации. Затем его разливают в ампулы по 1,5 мл и лиофилязяруют. 25 В таблице представлена характеристика исходной и очищенной вируссодержащей мозговой суспензии.Количество белка в готовом препарате менее 3 мг/мл (при определении по методу 30 Лоури), т. е, в 4 - 5 раз меньше, чем в известной вакцине Ферми.Очищенная вакцина не обладает энцефалитогенной активностью в опытах на морских свинках (известная вакцина Ферми вызывает гибель около 75% животных).Вакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью в опытах на животных.Введение вакцины добровольцам (по 40 3 мл в течение 14 дней) вызвало лишь у некоторых незначительные местные явления при отсутствии каких-либо общих реакций и сопровождалось активной продукцией антител к вирусу бешенства, 45Предлагаемый способ позволяет полуГотовую вакцину контролируют на бактериологическую стерильность, безвредность, отсутствие живого вируса, содержание белка, антигенность, остаточную влажность и растворимость, При использовании вакцины содержимое одной ампулы растворяют в 3 мл бидистиллированной стерильной волы, проверенной на отсутствие пирогенностп.П р и м е р 2. Для получения инактивированной очищенной антирабической вакцины из мозга крыс-сосунков или мышей- сосу нков вирус, указанный в примере 1, разводят 1: 1000 и вводят животным интрацеребрально по 0,03 мл. Для приготовления вакцины используют животных, заболевших на 3 - 5 сутки после заражения, В одну серию объединяют мозг 400 - 1000 животных. Далее проводят все операции, описанные в примере 1.Предлагаемыи способ получения очищенной антирабической вакцины позволяет удалить из суспензии мозговой ткани около 80% балластных веществ практически без потери вируса (см. таблицу). чить вакцину, не вызывающую местных иобщих реакций нри парентеральном введении. Фор мула изобретения 1, Способ получения антирабической вакцины путем гамогенизации вируссодержащей мозговой ткани в солевом растворе с последующей инактивацией и лиофилизацией целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью снижения реактогенности вакцины, гомогенизированную мозговую ткань разводят буферным раствором с рН = 7, - 7,3, содержащим 0,005 М раствор КНРО, 0,0035 М раствор КаОН, 6,3 М раствор МаС 1 и бидистиллированную воду, до получения 20% -ной суспензии, затем ее встряхивают, центрифугируют и надосадочную жидкость инактивируют бетапропиолактоном,687841 Составитель С. Малютина Редактор Е. Месропова Техред И. Заболотнова Корректор В. Борисова Заказ 2543/2 Изд, Юф 598 Тираж 522 Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 52. Способ по и. 1, отл и ч а ющий сятем, что встряхивание и центрифугированиеведут при 32 - 37 С. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. МРТУ, М 481 - 72, 1972.