Способ определения адъювантных свойств препаратов сапонина

Союз Соеетских Социалистицесюа РеспубликОп ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ п 1 673919 К АВ 70 РСКОМУ СВЯДЕТЕЛЬСТВУ(51) М, Клб 01 М 33/00 сударстввнный квинтет СССР о делам нзооретоннй н открытнйОпубликовано 15.07.79. Бюллетень26 Дата опубликования описания Ы 07 9 3) УДК 543 89 (088.8)) Авторыизобретения контрольный институтратов есоюзный государственный науч ветеринарных пре1) Заявитель 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДЪ 1 ОВАНТНЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ САПОНИНАль достигается тем, чт створа сапонина и учи Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения качества адъювантов, например, сапонинов, которые широко используются в качестве адъювантной добавки к инактивированным вакцинам против различных заболеваний сельскохозяйственных животных и наиболее широко к вакцинам ппотив ящура.До настоящего времени контроль качества сапонинов, используемых для этой цели, осуществляют исключительно биологическим методом путем постановки опытов на лабораторных и крупных животных 1,Для этого животным вводят раствор сапонина и спустя 14 - 21 день проводят заражение определенной дозой вируса, При этом часто в результате ряда причин необходимо неоднократно повторять опыты и использовать значительные средства на приобретение и содержание животных.Целью изобретения является разработка более дешевого и более экономичного способа определения адъювантных свойств сапонина.Поставленная це о проводят диализ ра тывают интенсивность поглощения им инфракрасных (ИК) лучей в зоне полиглюкозидов 900 см- 1100 см , и активными считают препараты, имеющие интенсивность поглощения выше 40%.5 Исследования химической структуры сапонинов методами ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии показали, что они слабо поглощают ультрафиолетовые лучи и весьма интенсивно инфракрасные.ИК-спектры сапонинов, поступающих ввиде отдельных партий (серий) на предприятия биологической промышленности (см.фиг. 1) имеют невыразительный характер со слабо выраженными характеристическими зонами и мало чем отличаются друг от 15 друга. Однако после диализа 20%-ного раствора в объеме 25 мл в целлофановом мешочке против дистиллированной воды в течение 72 ч спектр сапонина изменяется (см. фиг. 2),В этих спектрах особенно четко выявляется зона поглощения 1100 см- 900 см- с максимумом в 1070 см, которая характерна для полиглюкозидов, Как показали многочисленные исследования, выраженность зоны полиглюкозидов (максимум 070 см )э1 О15 о и зо эз оказалась различной у разных серий сапонинов и связана с их биологической активностью,На фиг. 1 и 2 графически изображена зависимость между степенью поглощения ИК-лучей и биологической активностью препаратов сапонина, где а, б - сапонины фирмы Мерк (ФРГ) серий 8920423 и 1907518, в, г - сапонины фирмы ВДН (Англия) серий 44091 и 1520030;Опыты на лабораторных животных по изучению адъювантных свойств представленных серий сапонинов показали, что например, сапонины серий ВДН обладают более высокой протективной активностью. При заражении морских свинок вирусом ящура в дозе 100 ИДь сапонин серии 44091 значительно более активен. чем сапонин серии 1907518 фирмы Мерк.Сапонин фирмы ВДН обладает также более высокой адъювантной акт ивностью при добавлении к ящурной ГОА формолвакцине и менее токсичен, чем сапонин фирмы Мерк.Полученные результаты показали прямую зависимость между интенсиновтью поглощения в зоне 1070 смИК-спектра 20 О/,- ного раствора сапонина после диализа в течение 72 ч против дистиллированной воды и его биологическими свойствами.Способ определения качества препаратов сапонинов по их ИК-спектрам заключается в следующем.Проводят диализ 20 О/о-ного раствора сапонина в объеме 25 мл против дистиллированной воды в целлофановом мешочке в течение 72 ч. После диализа 0,1 - 0,2 мл раствора наносят на подложку, прозрачную для ИК-лучей, подсушивают до сухого состоянии при 40 - 60 С. Исследуют образец в ИК-лучах на ИК-спектрофотометре в диапазоне 2000 см - 600 см , измеряют интенсивность поглощения ИК-света в диапазоне 900 см- 1100 см(при максимуме в 1070 см).На приводимом графике показано, что активными считают препараты, у которых степень поглощения ИК-лучей превышает 40Способ может быть использован в качестве контроля при изготовлении сапонина, для определения качества закупаемых партий сапонинов, при контроле сроков годности и условий сохраняемости препарата, а также перед добавлением сапонинов в вакцину.Способ позволяет значительно сократить время анализа адъювантных свойств сапонинов, а также экономит значительные средства по проведению контроля сапонинов за счет резкого сокращения числа животных, необходимых для проверки адъювантных свойств препаратов. Формула изобретенияСпособ определения адъювантных свойств преператов сапонина, отличаюшицся тем, что, с целью упрощения и удешев. ления способа, проводят диализ раствора сапонина и учитывают интенсивность поглощения им инфракрасных (ИК) лучей в зоне полиглюкозидо 900 см- 1100 см , и активными считают препараты, имсюгцие интенсивность поглощения свыше 40/.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Инструкция по изготовлению и контролю инактивированной ГОАформолвакцины из лапинизированного вируса ящура с сапонином, утверждена ГУВ МСХ СССР, 1971, с. 20 - 23.1 б 00 1 На 1 г 00 1000 800 омнобое ниспо, ю Редактор Н. Коган Заказ 4064/40 каренк ЦНИИПпо113035, М илиал ППП Сост Техре Тираж Государ елам из сква, ЖПатент