Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ,06.75 (21) 2146087/25 лен иенцем заявкис п и Государственный комитет Совета Министров СССР во делам изобретений н открытий(23) Приори (43) Опубли 3) УДК 543,544(088.8) ано 15.07.77. Бюллетень М 5) Дата опубликования описания 24.10.7 Авторыизобретения, Покровский, Б. В. Оттесен и К, А. Коровнико Институт питания АМН СССР 71) Заявитель(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАДИЕНТНО ПОЛИАКРИЛАМИДНОГО ГЕЛЯИзобретение относится к устройствам, используемым в практике биохимических и клинических лабораторий для получения столбиков градиентного полиакриламидного геля,применяемого в электрофоретических исследованиях веществ белковой природы.Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее две емкости, разделенные герметичнойпрокладкой, связанные тройниковой трубкойс регулятором.и выводным каналом.Недостатками этого устройства являетсясложность регулировки, зависимость от вязкости жидкости и температуры.Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее два цилиндра с поршнями, связаннымичерез редукторы с электродвигателями, управляемыми электронным программатором.Конструкция этого устройства сложна, оногромоздко, отсутствует распределительноеустройство для заполнения электрофоретических трубочек,Прототипом предлагаемого изобретенияявляется устройство для получения градиентного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров,с поршнями, камерой смещения, мешалкой и,приводом и имеющее выводной канал,Гель в этом устройстве получается в виде блока, которыи затем необходимо разрезать.Целью изобретения является обеспечениевозможности заполнения множества электрофоретичеоких трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте.Поставленная задача достигается тем,чгоизвестное устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, мешалкой и приводом, снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной частью смесителя, Дозатор выполнен в виде конической д тефлоновой пробки, связанной с вращающимприводом. Верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой. От его центра под углом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распредели тельной трубкой. Конец этой трубки имеетвозможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных наклонно к вертикальной оси, и опускающихся в электрофоретические трубочки, расположен ные по окружности на штативе.Изобретение иллюстрируется чертежом, Устройство состоит из блока двух цилиндров 1 и 2, изготовленных из нержавеющей стали, двух тефлоновых поршней 3 и 4 с упЗ 0 лотнениями из сплоконовой резины, перемз 5652423щаемых приводом через механические устройства 5, 6 кулачкового типа. Рабочие объемы цилиндров 1, 2 через выведенные наружу резиновые трубочки-петли 7 и 8 соединены с камерой смеш".ния 9. Дозатор-распределитель выполнен в виде тефлоновой пробки 10 с каналом, выход которого соединен со стеклянной трубочкой 11, сужающейся на конце.На диске 12 под углом 40 закреплены полоски резины 13 с фитилями 14 из ленточек фильтровальной бумаги. Вращение механических устройств 5 и 6, а также тефлоновой пробки 10 (дозатора-распределителя осуществляется от редуктора и гистерезионого трехфазного двигателя, Электрическая схема устройства обеспечивает кнопочное управление основными операциями и сигнальными лампочками, информирующими оператора о характере работы прибора.Работает устройство следующим образом, Поршни 3 и 4 находятся в верхнем положении (рабочие объемы цилиндров максимальны). Исходные растворы акриламида во избежание преждевременной полимеризации приготовляют непосредственно перед заполнением цилиндров, Заполняют цилиндры с помощью 20-миллилигрового шприца, начиная с цилиндра 1, низкоконцентрированным раствором акриламида через имеющуюся в поршне 3 трубочку (на чертеже не показана), предназначенную для жидкости. Через другую трубочку в поршне 3 (на чертеже не показана) из цилиндра 1 выводится воздух. Далее вытеоняется воздух из,петли 7 и камеры смешения 9. Цилиндр 2 заполняют раствором высокой концентрации таким жс образом, как и цилиндр 1.После вытеснения воздуха из петли 8 цилиндра 2 и низкоконцентрированного раствора из камеры смешения 9 осуществляется смачивание всех десяти фитилей высококонцентрированным раствором акриламида через трубочку 11.На неподвижный стол устанавливают круговой штатив 15 с электрофоретичеокими трубочками 16, фитили 14 вставляют внутрь трубочек, включается электродвитатель, Растворы акриламида из цилиндров 1 и 2 вы-. жимаются поршнями через петли 7 и 8 в камеру смешения 9, где они перемешиваются за счет вращения пробки 10. Смешанная жидкость проходит через трубочку 11. В процессе вращения на ее конце образуется каплч диаметром около 1,5 мм. При контакте с очередным фитилем капля снимается. Жидкость тонкой пленкой стекает по фитилям 14, затем по внутренним стенкам трубочек 16 и наслаивается на поверхность слитой ранее жидкости. Наслаивание начинается с раствора максимальной концентрации и завершается раствором минимальной концентрации Распределение акриламида по длине трубочек линейно (постоянный градиент).Для повышения точности распределенияФор мула изобретения Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеси- тель в виде блока двух цилиндров с поршнями, камерой смешения, мешалкой и приводом и имеющее выводной канал, о т л и ч а ю щ ее ся тем, что, с целью заполнсния множества электрофоретических трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте, устройство снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной ча. 55 60 65 4раствора акриламида между электрофорети ческими трубочками 16 сужающийся конец трубочки 11 обрабатывают гидрофобным веществом, например парафином. Той же цели 5 способствует смазка внутренних поверхностейцилиндров 1 и 2 и трущейся поверхности пробки 10 силиконовым маслом.Во избежание перемешивания раствораакриламида в трубочках общий цикл запол пения их проводят в течение 20 мин, при этомскорость вращения пробки 10 составляет 1 об/4 сек.Для предотвращения полимеризации растворов акриламида в устройстве после окончания разлива внутренние объемы смесителя и трубочки 11 промывают водой.Эффективность изобретения состоит в получении столбиков геля с постоянным градиентом одновременно в десяти стандартных электрофоретичсских трубочках, приготовление которого, например, вручную, невозможно. Программированное перемещение поршней, обеспечивающее принудительный и стро го постоянныи от опыта к опыту характерсмешения исходных расгворов в предлагаемом устройстве гарантирует, как показали проведенные испытания, стандартность закона распределения концентрации акриламида по высоте геля, независимо от вязкости, кочцентрации и температуры растворов, что, в конечном итоге обеспечивает высокую воспроизводлмость определения молекулярного веса и геометрических размеров молекул белковых фракций от их относительного пробега в градиентном геле. Кроме того, использование градиентного геля расширяет сферу применения электрофоретического метода: позволяет проводить изучение законов электрофоретической подвижности белковых молекул в геле с меняющейся структурой молекулярных сит. Это особенно существенно при изучении физико-химических свойств новых белковых веществ методом электрофореза.45 Автоматическая работа устройства и иоключение благодаря этому ошибок оператора делают прибор удобным в работе при достаточно высокой производительности (60 - 80 заполненных трубочек за рабочий день). При бор может найти практическое применение вработе биохимических лабораторий.565242 Составитель Л. ЖарковаТехред 3, Тараненко Коррсктор Л Денискина Редактор Р. Киселева Изд. Ме 585 Тираж 1109 Подписное 1-1 ПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская паб., д, 4/5Заказ 6249 МОТ, Загорский филиал стью смесителя, вылолненным в виде конической тефлоновой пробки, связанной с вращающим приводом, причем верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой, от центра верхнего торца пробки под угловом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распределительной труб 6кой, конец которой имеет возможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных по окружности на клонно к вертикальной оси и опускающихся 5 в электрофоретические трубочки, расположенные по окружности на штативе,