Способ получения трипаномицина

) 468953 Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от ельства -411108/31 виде 51) М. Кл. 2) Заявлено 03,03.70 (21) заявк исоединен осударственныи комитеСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий 3.69 (31) %Р 301 п 13837(7 горыбретени Инос ернер флек и(71) Заявите едприятарм А 154) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИПАНОМ Изобретение относится к области производства антибиотиков,Г 1 редложен способ получения трипаномицина, ранее в патентной и специальной литературе не описанный и заключающийся втом, что культуру Ягер 1 огпусез йаз 1 а 1 ос 1 пгогподепез 1 МЕТ,)А 10081 выращивают в аэробных условиях в течение 2 - 6 дней при 25 -- 37 С на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, мицелий ифильтрат культуральной жидкости экстрагируют органическим растворителем и выделяют целевой продукт известными приемами,причем выращивание осуществляют в присутствии солей железа.Антибиотик три паном ицин представляетсобой комплексное аморфное вещество, имеющее красно-коричневую окраску, хорошо растворимое в хлороформе, ацетоне, диметилформамиде, менее растворимое в спиртах,эфирах, бензоле, плохо растворимое в воде иобладающее своиствами индикатора,Как свежая ферментациопная жидкостьштамма 1 А 10081, так и выделенный из нееантибиотик трипаномицип замедляют развитие непатогенных и патогенных протозойных бактерий 1 п ч 11 го и 1 п яо, Хосагйеп,Ас 11 погпусез, граммположительных бактерий иустойчивых 1.-форм, а также замедляют образование граммотрицательных бактерий. По отношению к дрожжам, нитевиднымгрибкам и Ваз 1 йогпусез замедляющее действие антибиотика незначительно или совершенно не проявляется.Антибиотик трипапомицнн и его производные, продукты его гидролитического разложения и смесь этих веществ могут найти применение в качестве химиотерапевтических средств против протозойных заболеваний.О Используемые для получения трипаномицина микроорганизмы схожи со штаммом 207 (АТСС 12309), который описан как тип вида 8 героп сев д 1 азаос 1 пгогподепея (Кгз 1 пз 1 у) Ваксманом и Генрици в 1948 г. и 5 Ваксманом в 1961 г, и хранится в коллекцииштаммов Иенского института микробиологии и экспериментальной терапии Академии На ук в Берлине под М,)А 10081. Штамм 1 ЧЕТ,)А 10081 выделен из ооразца итальян ской земли. Образец земли взят с о. Каприиз виноградника деревни Апакапри и характеризуется такими же морфологическими, макроскопическими, микроскопическими и химическими характеристиками, которые опи саны Ваксманом (1961 г.) для Яг. д 1 аз 1 а 1 ос 1 пгогподепез.Предлагаемый способ состоит в том, чтов жидкой питательной среде, содержащей источники углерода и азота, а также минеральную соль, культивируют при аэробных3условиях штамм Ыгер 1 огпусез, причем под этим штаммом подразумевают штамм 1 МЕТ,)Л 10081, подобный но описаниго Ягер 1 ошуссз с 1 гав 1 а 1 осггсшодепсв (Ваксман, 1961 г.),его мутанты или разновидности.Культивирование штамма производят в подходящей питательной среде в течение 2 - б дней при температуре от 25 до 37 С, в токе воздуха и при перемешивании, причем в питательную среду добавляют соли тяжелых мегаллов. После отделения мицелия антибиотик выделяют с помощью экстракции растворителем, как из культуральцого фильтрата, так и из мицелл. Переводят его в водную фазу, непосредственно за этим повторно экстрагцруют из водного неочищенного концентрата органическим растворителем, а затем осаждают продукт из неочищенного концентрата низкокипящей фракцией углеводородов. Полученный антибиотик обозначается как трипаномицин,Пример 1. В две бутылки с крутыми стенками емкостью 500 мл помещают по 80 мл питательной среды для предварительного культивирования следующего состава (%):Глюкоза 1,5 Соевая мука 1,5 Карбонат кальция 0,1 Хлористый натрий 0,5 Первичный фосфат калия 0,03 Водопроводная вода До 1 (л)Производят фракционную стерилизацию 3 раза по 30 мин при температуре 100 С. После стерилизации рН ссставляет 6,3.В каждую бутыль вводят по 1/10 части суспензии спор, которую получают посредством смешения стерильного раствора поваренной соли с четырнадцатидневной культурой 1 МЕТЛА 10081, культивированной в пробирке на питательной среде состава (%):Сахароза 0,300Декстриц 1,500 Мочевина 0,010Дрожжевой экстракт 0,100Пептон 0,500Хлористый натрий 0,050 Сульфат железа 0,001 Первичный фосфат калия 0,050 Агар (промытый) 2,000 Дистиллированная вода ОстальноеПроводят стерилизацию 40 мин при 116"С, После стерилизации рН культуральной жидкости составляет 6,5 - 7,0. Инкубацию проводят 48 час при температуре 28 С и перемешивании.8 мл приготовленной указанным способом культуральной жидкости засевают в бутыли, в которых находится по 80 мл питательной среды следующего состава (%):Глюкоза 3,0 Соевая мука 2,0Карбонат кальция 0,3Хлористый натрий 0,5 Водопроводная вода Остальное 4089534Стерилизацию проводят 35 мин при 110 С,После стерилизации рН составляет 6,3,Инкубируют при температуре 28 С и перемешивании со скоростью 180 об/мин, 1-1 аи 0 оольшее содержание трипаномицина наблюдают по истечении 96 час (150 мг/мл) ферм етации,Определение активности производят с пом ощью известного микробиологического спо 1 о соба, при котором испытание основывается надиффузии агара и при котором величина замедляющего действия на размножение температурных вирусов в бактериях является мерой активности антибиотика.15 Пр им ер 2. Опыт проводят аналогичнопримеру 1, но на производящей питательнойсреде состава (%):Глюкоза 3,000Соевая мука 3,00020 Карбонат кальция 0,300Хлористый натрий 0,300Хлорное железо 0,025Водопроводная вода Оста чьноеПосле стерилизации рН равно 6,5.2: Наивысшее содержание трипаномицицанаблюдают по истечении 100 ча" - 170 мг/мл.П р и м е р 3. Опыт проводят аналогичнопримеру 2, но среда предварительного выращивания и ферментационная среда имеют30 другие составы.Среда предварительного выращивания(%):Пептон 0,60Сухие дрожжи 0,301-1 итрат кальция, гидрат 0,05Водопроводная вода ОстальноеСтерилизацию проводят 20 мин при120 С. После стерилизации р 1-1 среды равно7,2,"0 фермецтацнонная питательная среда (%):Глюкоза 3,000Сухие дрожжи 0,300Хлористый натрий 0,300Вторичный фосфат калия 0,10045 Карбопат кальция 0,150Сульфат магния 0,010Сульфат железа 0,002Сульфат цинка 0,002Сульфат меди 0,00150 Водопроводная вода Остальное1 Н ферментаццонной среды равно 7,0,Стерилизацию проводят обычным образом.Наивысшее содеркание трипаномицина55 достигается по истечении 120 час ферментации - 160 мг/мл.Предмет изобретения00 1. Способ получения триианомцццна, от,ги.ч:ггогггггйся тем, что ю льтуру 1 гер 1 огпусез с 11 аз(а 1 осггогпссгепе 1 МЕТЛА 10081 выращивают в аэробных условиях на среде, содергкащей источники углерода, азота и минеральные соли, мицелцй и фильтрат культу5ралычой жидкости экстрагируют органическимрастворителем и выделяют целевой продуктизвестными приемами. 2. Способ по п. 1, отлпчающийгя тезг, что 4689536выращивание осуществляют в течение 2 - 6дней при температуре 25 - 37 С.3. Способ по пп. 1 и 2, отлачаюпяйся тем,что выращивание осуществляют в присутст 5 вии солей железа, Составитель С, Малютина Редактор Н. Спиридонова Текред Л, Казачкова Корректор Н, Лебедева Заказ 4902 Изд, ЪЪ 147 Тираж 529 ПодписноеЦН 11 П 11 1 осударственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытийМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5МОТ, Загорский филиал