412247

412247 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельств Заявлено 21.11,1972 (М 1752613 Кл д 13/06 енмем заявкис присо всударственныи комитетСовета Министров СССРво делам изобретенийи открытий риоритет ДК 663,18(088 Опубликовано 25,1.1974. Бюлл ень 3 Дата опубликования описания 19,1 Х,1974 Авторы зобретенлите СОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИТАКОНОВ СЛОТЫ ации угл нце ГАзрегр 11 аз е обработки прирегр 11 цз 1 еггецз т этиленимином. амма и характер ных средах, приания Азрегр 111 цз среде Мойеракса, сусло-агаре е и специальных лучеция итаконоМойер а- Когкой колонии прованцой среде строение,гцгацт щую хара леду Цель изобретенияитакоцовой кислоты.Достигается это тем,используют штамм Г,севцого материала осущтельной среде, содержащ3% углевода при рН среОсновную фермецтацирН, при этом в проментации после разраставодят двухкратцую подк своиства.среда М увеличение выхо ера-Когх что из вида 1 еггецв а выращивание поествляют на питаей преимущественно ды 2,3 - 2,5.ю осуществляют при цессе основной ферния мицелия произормку среды (через,06 1Изобретение относится к способу получения итаконовой кислоты с помощью микроорганизмов, применяемой для получения полиакрилонитрилового волокна нитрон.Известен способ получения итаконовой кислоты, предусматривающий глубинное выращивание посевного материала - культуры Азрегр 11 цз 1 еггецз - продуцецта кислоты на питательной среде, содержащей углеводы, например пищевой сахар, сахар-сырец, мелассу, кукурузный экстракт, необходимые минеральные соли, основную ферментацию на этой же питательной среде с последующим получением кристаллов итаконовой кислоты из ферментационного раствора (культуральной жидкости), осветлением растворов активированным углем, фильтрацией, выпариванием и кристаллизацией. двое и четверо суток) до ковода в среде 90 - 100 г/л.Предлагаемый штамм(еггецз получают в результат5 родного штамма 7 8/9 Азультрафиолетовыми лучами 1Культурные свойства штроста изучались ца пцтательменяемых для культивиров1 О 1 еггецз модифцццрованцоКогхила, среде Чапека-До(солодовой среде), картофелсредах, используемых для повой кисчотыНа модифнцхила изучалосьца пятые сутки.Данный штамм имеет стеристику,1. МорфологическиеМодифицированнаяла, Состав среды, г:ЛактозаСахар (песок)Фосфорнокислый калшодцозамещецныц(КМОа) 3,0Кукурузный экстракт 1,5 Агар 20 Вода до 1 л.У трехсуточной культуры конидиальные головки слегка вытянутой формы, диаметром 27-54 мк. Пузырьки (визикулы) грушевидной формы, диаметром 12-15 мк. 2/3 визикулы покрыты стеригмамн. Стеригмы двуслойные. Длина стеригм перого порядка 5 мк, второ- рого - 4 мк. Конидии гладкие, круглые, их средний диаметр 2,2 мк. Длина конидиеносцев 60-105 мк, диаметр 3-4 мк.2. Культуральные свойства.Пятисуточная гигантская колония штамма Г, выращенная на модифицированной среде Мойера-Когхила при 32 С, имеет круглую форму диаметром 4,9 см. Край колонии ровный, субстратный мицелий тонкий, гладкий, в начале развития бесцветный, затем светло- коричневого цвета. Конидиеносцы низкие. Поверхность покрыта конидиальными головками песочного цвета. В центре колонии находится густое конидиеношение диаметром 0,5 см. Наружная сторона колонии шириной 0,3 см аспорогенна. Продолжительность созревания конидий 12 - 14 суток при 29-30 С,Модифицированная среда чапека-Докса. Состав среды, г: Сахароза 30 Азотнокислый натрий(ХаХО ) 20 Фосфорнокислый калий двузамещенный (К,НРО 4) 1,0 Сернокислый магний(1 ест 04 7 Н.О)АгарВода 0,0120 лдо 1 л. Субстратный мицелий средней толщины,плотный, складчатый. В начале развития бесцветный, затем бурый со слабожелтоватымоттенком, в субстрате образует черно-коричневый пигмент. Имеется воздушный мицелий.Конидии песочного цвета.Сусло-агар (солодовая среда), Субстратный мицелий тонкий, бесцветный. Воздушныймицелий высокий. Конидиальные головкиобразуются на значительном расстоянии однаот другой.Картофельный ломтик. Субстратный мицслий средней толщины, плотный, бледно-желтый, немного складчатый, конидии песочногоцвета. Имеется воздушный мицелий.3. Антагонистические свойства,Азрегр 11 цз 1 еггецз Г- слабый антагонист в отношении Вас 1 епцтп со 11, Вас 111 цзгпезеп 1 епсцз, Вас 111 цз гпедайепсцз,4. Биохимические признаки.Селекционированный штамм Азрегр 11 цз1 еггецз Гхорошо сбраживает сахарозу при глубинном способе культивирования.Активность биосинтеза итаконовой кисло ты штамма ГАзрегр 11 цз еггецз на разных питательных средах приведена в таблице. 13 ы ход итаконовои кислоты от сахара, %(тростниковый)Мел асса 62 16 12 55 30,0 3,0 2,7 Способ заключается в следующем.20Выращивание посевного материала осуществляют в посевных ферменторах на питательных средах с 3%-ным содержанием углевода,рН среды 5,0-5,5.Засев питательной среды производят сус 25пензией сухих конидии из расчета 0,7 г кониИ Одий на 1 м среды.Продолжительность цикла выращиванияпри 34 - 36 С составляет 30 - 36 час. ЗатемЗОпосевной материал в количестве 5 - 10% пообъему переносят в основную среду (концентрация углевода 6 - 7%, рН 2,3 - 2,5) для биосинтеза.Продолжительность цикла основной фер 35ментации 60 - 72 час,При выращивании посевного материала носновной ферментации режим аэрации заклюается в следующих соотношениях: 0,5 объемавоздуха на 1 объем питательной среды в лаг 40 фазе и 0,8 объема воздуха на,1 объем питательной среды в экспоненциальной и стационарной фазах роста. Цикл ферментации заканчивают при содержании неассимилированного в среде углевода 0,1 - 0,2% .После окончания цикла ферментации мицелий отделяют фильтрацией от культуральной жидкости. Полученный раствор и промывные воды от мицелия осветляют активированным углем, фильтруют и упаривают до,концентрации итаконовой кислоты 35 - 38%Упаренный раствор кристаллизуют и получают технические кристаллы с содержанием итаконовой кислоты до 96% .Для получения кислоты реактивной чистоты требуется двуразовая кристаллизация.Выход кристаллической итаконовой кислоты составляет 80 - 85% от итаконовой кислоты в ферментативных растворах.В дальнейшем способ поясняется приме 60 рамиП р и м е р 1. Выращивание посевного материала ведут па среде следующего состава,г/л:Пищевой сахар или сахар-сырецСернокислый магнийАзотнокислый аммоний412247 П,редмет изобретения Составитель М. Ларина Техред Т. Миронова Корректор С. Хейфиц редактор Г. Мсзжечкова 1210/215 Изд Мо 393 Тираж 468 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5.,аказ Тип, Харьк. фил. пред. Патент Кукурузный экстракт;для сахарной среды 6,0 для сахара-сырца 3,0рН среды 5,0 - 5,5.1 Процесс выращивания осуществляют при температуре 34 - 36 С в течение 30 - 36 час.Посевной материал в количестве 5 - 10% от объема, взятый в конце экспоненциальной фазы роста и содержащий 22 - 24 г/л сухого мицелия, переводят в основную среду для биосинтеза.Среда для биосинтеза содержит, г/л:Пищевой сахар или сахар-сырец 70 - 80,0 Сернокислый магний 3,0 Азотнокислый аммоний 2,0 Кукурузный экстракт:для сахарной средыдля сахара-сырцарН среды 2,3 - 2,5.После засева среда содержит 2 - ,3 г/л сухого мицелия. Биосинтез итаконовой кислоты ведут при температуре 34 - 35 С в течение 60 - 72 час. По истечении этого срока культуральный раствор содержит 30 - 40 г/л итаконовой кислоты, 0,1 - 0,2% неассимилированного грибом сахара, 9 - 11 г/л сухого мицелия.После отфильтровывания мицелия растворы направляют на химическую переработку. Пр и м е р 2. Мелассная среда для выращивания посевного материала характеризуется следующими показателями, г/л:Сахар мелассы 30,0 Азотнокислый ам маний 1 - 2 рН 5,0 - 5,5.Условия выращивания посевного материала аналогичны условиям в примере 1.Среда для основной ферментации содержит, г/л:Сахар мелассы 30 - 35 Азотнокислый аммоний 1 - 1,5рН среды 2,3 - 2,5.Характерной чертой биосинтеза итаконовой кислоты на мелассной среде является подкормка погруженной культуры в течениецикла,Обычно осуществляют две подкормки.Первую - на вторые сутки после разрастания мицелия, вторую - на четвертые сутки,В обоих случаях с целью повышения выхода итаконовой кислоты концентрацию сахара доводят в среде до 9 - 10%. Биосинтезведут при температуре 34 - 35 С. Продолжи 10 тельность всего цикла ферментации составляет 6 - 7 суток.В конце цикла ферментации культуральный раствор содержит 40 - 50 г/л итаконойкислоты.15 1. Способ получения итаконовой кислоты, предусматривающий 1 глубинное выращивание посевного материала - культуры Азрегр 11 пз 1 еггепз - продуцента кислоты на питательной среде, содержащей углеводы, например пищевой сахар, сахар-сырец, мелассу, кукурузный экстракт, необходимые минеральные соли, основную ферментацию на этой же питательной среде с последующим получением кристаллов итаконовой кислоты из ферментационного раствора (культуральной жидкости), осветлением растворов активированным углем, фильтрацией, выпариванием и кристаллизацией, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода кислоты, из вида 1 еггецз используют штамм Г, а выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, содержащей преимущественно 3% углевода при рН среды 2,3 - 2,5.2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что основную ферментацию осуществляют при рН 5 - 5,5.3. Способ по п,п. 1 - 2, отличающийся тем, что в процессе основной ферментации после разрастания мицелия производят двухкратую подкормку среды - через двое и четверо суток, до концентрации углевода в среде 90 - 100 г/л.