Спосов получения антибиотика группы аксеномицинов

ависимый от патентаявлено 29 ЛЧ.1971 ( 1646887/31-16 611 с 21 ОО/70, Италияень18 иоритет 04 Х.192414 Комитет по делам вобретений и открытий при Совете Министров СССР1 Б 779 931 СО 38,8:) публиковано 17.Ч.1973, Бюлле Дата опубликован писания 2.Х.197 Авторыизобретения Иностранцьрнесто:Котта, Пьера Джулита и(Италия) ора Санфили Заявите Иностранная Сочиета фармирмаютикал СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ГРАКСЕНОМИЦИ НОВ ПЫ 2 пензи Известен способ получения антибиотиковаксеномицина А и аксеномицина В, заключающийся в том, что культуру Ыгер 1 оптусез11 запдп Г. 1. 2604 выращивают в аэробныхусловиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в течение60 - 160 час при температуре 23 - 37 С и прирН среды 6,0 - 9,0. Комплекс аксеномициновЛ и В выделяют экстракцией с последуюцимего разделением на аксеномицин Л и аксеномицин В.Целью предложенного, изобретения является получение аксеномицина Д, который отличается от аксеномицина Л и аксеномицина Впо физико-химическим свойствам. 15По предлагаемому способу культивирование продуцента осуществляют при интенсивности аэрации 0,7 - 2,0 л воздуха на 1 л среды в минуту и при интенсивности перемешивапия, соответствующей расходу энергии 202 - 4 вт на 1 л среды, а источник углерода всреде составляет не менее 10% .Пример 1, Колбу емкостью 2000 лл, содержащую посевную среду, стерилизуют при120 С в течение 20 мин. Среда имеет следующий состав (%): декстрин - 4, карбонат кальция - 0,5, кукурузное сырье - 1,0 казеин - 1,0,сульфат аммония - 0,2, дикалийфосфат - 0,01,вода - до 100,Колбу инокулируют сус ей спор, смы- зо тых с 4 косяков 15-дневной культуры, выращенной на картофельно-глюкозо-агаровой среде.Культуру икубируют при 28 С в течение 48 час на круговой качалке при 120 об/мпн.50 лл суспензии этой культуры используют для пнокулирования стеклянного ферментера емкостью 5 л, содержащего 3 л среды, имеющей описанный выше состав. Содержимое ферментера перемешивают со скоростью 500 об/мин двумя турбипно-дисковыми пропеллерными мешалками с режущими крыльями и продувают воздух со скоростью 0,7 л/л среды в минуту, Процесс ведут в течение 24 - 28 час при температуре 27 - 28 С,Затем получен 1 ной суспензией инокулируют стеклянный ферментер емкостью 5 л, содержащий 3 л питательной среды, которая имеет следующий состав (% ): глюкоза - 10 - 12, соевая мука - 3, кукурузное сырье - 2,0, карбонат кальция - 1,0, хлористый натрий - 0,25, соевое масло - 0,5, вода - до 100, Количество вносимой суспензии составляет 5% от объема питательной средыФерментацию проводят в течение 136 час при постоянном перемешивании со скоростью 500 об/лтин двумя ту рбинно-дисковыми пропеллерными мешалками с шестью режущими плоскостями, продувку воздухом ведут со скоростью 1 л/л среды в минуту. После окон 377991Доза, л 4 г/кг 2,5 5,0 55 60 65 чания ферментации получают следующие результаты: П р и м е р 2. Ферментацию проводят в условиях, описанных в примере 1, в ферментере емкостью 5 л, используя среду, содержащую 12% глюкозы, с добавлением различного количества КНзРО 4.При этом получают следующие результаты: П р и м е р 3, Ферментацию проводят в ферментере емкостью 5 л, используя среду, содержащую 12% глюкозы, в условиях, описанных в примере 1, при перемешивании со скоростью 500 - 650 об/мин, скорости подачи воздуха от 1 до 1,7 л/л среды в минуту и получают следующие результаты: П р и м е р 4. В стальной ферментер емкостью 80 л, содержащий 50 л среды, имеющей состав, описанный в примере 1, вносят 500 мл суспензии культуры, выращенной в колбе емкостью 2000 мл в условиях примера 1,Инкубацию проводят в течение 24 час при перемешивании и аэрации, Затем полученной суспензией засевают ферментер из нержавеющей стали емкостью 500 л, в котором находится 300 л питательной среды, имеющей следующий состав, %: глюкоза - 13,0, соевая мука - 3,0, кукурузное сырье - 2,5, карбонат кальция - 1,2, хлористый натрий - 0,25, соевое масло - 0,6, вода до 100.После 136 час инкубации при 28 С при перемешивании двумя турбинно-дисковыми пропеллерными мешалками, имеющими восемь режущих плоскостей (поглощаемая мощность 2,5 вт/л) при интенсивности аэрации 0,7 л/л в минуту и противодавлении 1 атм активность 5 10 15 20 25 30 35 40 45 4культуральной жидкости составляет 3050 у/мл.Мицелий, собранный при фильтровании 14 л культуральной жидкости, экстрагируют двумя порциями бутанола по 4 л, Экстракты объединяют и концентрируют до объема 300 мл. Осадок, полученный после центрифугирования, промывают этиловым эфиром и сушат в вакууме, Полученный таким образом продукт растворяют в метаноле, фильтруют, пропускают через колонку с кремниевой кислотой и элюируют сорбированный целевой продукт смесью этилацетат: метанол: вода (125:25:17). В процессе элюирования наличие целевого продукта контролируют методом тонкослойной хроматографии.Первые фракции (около 2 л элюата) отбрасывают. Последующие фракции содержат аксеномицин Д, который выделяют после отгонки растворителя в вакууме. После кристаллизации из смеси метанол - изопропанол получают 7 г целевого продукта.Аксеномицин Д растворим в спиртах, нерастворим в воде и бензоле, плавится при 174 - 175 С с разложением, сс 1" .0=+11 (с=0,5 метанол); Я=0,35 над силикагелем (этилацетат: изопропанол: вода 100: 35: 5).УФ-спектр аксеномицина Д имеет максимумы при 250, 255 и 330 гпту и плечо при 265 - 268 гп 1 г. Ег 1 см 138 (255 гпгг).Инфракрасный спектр имеет следующие частоты: 3400, 2980, 2950, 2890, 1735, 1705, 1675, 1630, 1610, 1465, 1385, 1355, 1290, 1265, 1195, 1170, 1115, 1080, 1050, 1005, 995, 975, 945, 925, 896, 865, 810, 700 см-.Состав по данным анализа, %: 60,25 С, 7,92 Н, 30,35 О.Аксеномицин Д обладает высокой антигельминтной и противогрибковой активностью и активностью, против простейших.Антигельминтную активность проверяют на группах мышей (численность каждой группы 10 штук), экспериментально зараженных Нугпепо 1 ер 1 з папа. Аксеномицин Д вводят перорально между 12 и 20 днем после заражения (результаты эксперимента приведены ниже) . Острая токсичность аксеномицина Д, выраженная через.1 лзо, для мышей составляет 200 мг/кг при пероральном введении.Предмет изобретения1. Способ получения антибиотика группы аксеномицинов путем аэробного выращивания культуры Ягер 1 огпусез 11 запдг 1 1. М. К, У 3935 (Ягер 1 огпусез 11 запс 1 п 1". 1, 2604) на жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли, в тече377991 Составитель С. ЩеневаТехред 3. Тараненко Корректоры; Н, Прокуратован Т. Гревцова Редактор К. Шанаурова Заказ 2641/5 Изд,1677 Тираж 467 ПодписноеЦИИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д, 4 о Типография, пр. Сапунова, 2 оние 60 - 160 час при температуре 23 - 37 С и при рН среды 6,0 - 9,0 с последующим выделением целевого продукта обычными приемами, отлггчающийся тем, что, с целью получения аксеномицина Д, культивирование осуществляют прп интенсивности аэрации 0,7 -2,0 л воздуха на 1 л среды в минуту и при интенсивности пер емешивания, соответствующей расходу энергии 2 - 4 вт на 1 л среды,2. Способ по п, 1, отличагошийвя тем, что 5 источник углерода в среде составляет не менее 10%.