Способ получения д-рибозы

Приорите С 131( С 121( Коо 1 Итет йа деиа 9 йвобретений и открыти ори Совете Министров СССРстрайць 1зо Мизухара и Такео Сузукипония) о и явитель ная фирмаогаио, Ко, Лимитедония) К ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Д-РИБОЗЫ 2 ноно смес 15т Известен способ получения Д-рибозы, а также ее производных, заключающийся в том, что ца питательной среде, содержащей источники углерода, азота, неорганические соединения (соли магния, марганца, железа, цинка, кальция) и активаторы роста, выращивают различные микроорганизмы, содержащиеэнзимы, превращающие данную питательную среду в Д-рибозу через различные промежуточные соединения, подвергаемые дальнейшей обработке.Предлагаемый способ проще известного, так как он обеспечивает получение Д-рибозы одноступенчатой ферментацией, т. е, превращением питательной среды непосредственно в Д-рибозу, Это достигается использованием следующих микроорганизмов: ВгеюЬас 1 егтцтп агпгпоптадепев АТССб 872, М 1 сгоссцз д 1 ц 1 атптсцв АТСС15455 и Вас 111 цз сегецз АТСС9139.При получении Д-рибозы по предлагаемому способу вышеуказанную питательную среду следует готовить таким образом, чтобы неорганические соединения, входящие в нее, содержали 0,01 - 0,2% по весу соли магния (в виде иона магния), 0,1 - 1,5% тто весу соли калия (в виде иона калия) и 0,0001 - 1% (вес/объем) марганца цлц железа, цлц цинка цлц цх Отношение вес/ооьем выражает количествограммов вещества в 100 11 л раствора, Для по лученця по предлагаемому способу процзводнои Д-рибозы - Д-рибозо-фосфата неорганические соединения питательной среды следует подбирать цз расчета содержания в ццх 0,2 - 2.0% по весу фосфата (в виде радикала О фосфорной кислоты), 0,01 - 0,2% по весу голимагния (в виде иона магния) ц 0,1 - 1,5% по весу соли калия (в виде иона калия).Предлагаемый способ получения Д-рцбозызаключается в следующем.На культуральной питательной среде, в коорой имеются в необходимых количествах источники углевода (глюкоза, крахмал цлц его гидролизат, меласса), источники азота (моче- вина, хлористый аммочцй, азотнокислый ам- О моний), неорганические соединения, предпочтительно содержащие 0,01 - 0,2% по весу магния (в виде иона магния), 0,1 - 1,5% по весу соли калия (в визе иона калия) и 0,0001 - 1% (вес/объем) ионов марганца илц железа цли 25 цинка, или любых их смесей, активаторы ростя45 5 О 55 60 65 щающие вышеуказанную питательную средунепосредственно в Д-риоозу,К таким микроорганизмам относятся ВгепЬас 1 епцтп аттоп 1 аоепез АТСС6872, М 1 сгососсцз рц 1 аппсцз АТСС15455, Вас 111 цэсегецз АТСС9139.Ферментацпю ведут в присутствии кислорода, например, при взбалтыванпп плп аэрации,прп температуре питательной среды в пределах от 20 до 40 С, Период роста длится от 2до 8 дней, Во время этого периода в ферментационной жидкости и в клетках образуетсябольшое количество Д-рибозы.После окончания процесса ферментации Дрибозу выделяют путем обработки ионообменной смолой, осаждения, экстракции и другимпизвестными приемами,В случае получения производной Д-рибозы - Д-рибозо-фосфата берут питательную. среду в основном указанного выше состава, нов нее вводят не соли таких металлов, как марганец, железо, цинк, а соединения фосфата,имеющие радикал в количестве предпочтительно составляющем 0,2 - 2 О/о, в остальном процесс ведут так же, как при получении Д-рибозы,Для пояснения предлагаемого способа нижеприведены примеры получения Д-рибозофосфата и Д-рибозы. П р и м е р 1, Для приготовления посевного материала 30 мл водной питательной среды, содержащей, о/о: 2 глюкозы, 1 пептона, 1 дрож. жевого экстракта и 0,25 хлористого натрия, вносят в коническую колбу, стерилизуют и в этой среде выращивают ВгелЬасЕепц 1 п агпп 1 оп)адепез, взбалтывая в тсченпе 24 час при 30 С, Отдельно в колбах емкостью в 250 мл приготавливают порциями по 20 мл ферментационную среду, содержащую, о/о: 10 г,ч 1 окозы, 1,0 КЕ 1,Р 04, 1,0 мочевины, 1,0 К. НР 01, 1 МАЗО71-1 гО, 0,01 СаС 12 ЕО, 30 у/л биотина, стерилпзуют, инокулпруют приготовленным посевным материаломвзбалтывают и выдерживают при 30 С. После стерилизации устанавливают рН, равным 8,0. Через 100 час в ферментационной жидкости накапливается 13,5 мг/мл Д-рибозо-фосфата, продукт накаплпвается и в клетках. Последние удаляют к фильтрату, добавляют гидроокись кальция, а затем путем центрифугования отделяют неорганический сульфат. Надосадочный слой жидкости пропускают через колонку с сильно- кислой катионообменной смолой и Д-рибозо-фосфат адсорбируют. Десорбируют его 1 и. водным раствором едкого патра. Полученную фракцию Д-рибозо-фосфорной кислоты пропускают через колонку с сильнощелочной анионообменной смолой, устанавливают рН, равным 6,5, а затем концентрируют при пониженном давлении. Сконцентрированный раствор обесцвечивают активированным углем,довсдят рН до 8 с помощью водного раствора едкого патра и добавляют необходимое количество уксуснокислого бария. Затем спирт и 5 1 о 15 20 25 зо 35 4 О 4образующуюся бариевую соль Д-рибозо- фосфата осаждают,Количество бариевой соли Д-рибозо-фосфата, полученной из осадка после сушки, составляет 18,4 г.П р и м с р 2, ВгеОЬас 1 епшгп ап 1 гпоп 1 адепеэ АТСС6872 выращивают при 30 С в течение 24 час при взбалтыванпи в среде, содержащей, о/о. 2 глюкозы, 1 пептона, 1 дрожжевого экстракта, 0,25 хлористого натрия и налитой по 30 мл в конические колбы емкостью 250 мл. Ферментационную среду, содержащую следующие вещества, г: 100 глюкозы, б моче. вины, 10 КНР 04, 10 КНР 04, 10 МАЗО 7 НО, 0,1 двухводного хлористого кальция, 2 г Мд 804 4 НгО и 30 у биотина, растворенные в воде с получением при этом объема, равного 1 л, наливают порциями по 20 мл в конические колбы емкостью 250 мл. После этого в нее вносят вышеуказанную культуру. Ферментаци. снную среду взбалтывают при 30 С.Спустя 120 час в ферментационной жидко. сти образуется 11 мг/мл Д-рибозы, накапли. вается она и в клетках. Их удаляют из фер. ментационной жидкости и, установив рН + 5,0, жидкость пропускают через колонку с сильно. щелочной анионообменной смолой. Затем колонку элюируют дистиллированной водой и собирают фракции, содержащие рибозу, которые пропускают через колонку с. сильнокислой катионообменной смолой прп поддержании постоянного значения рН. Фракции, содержащие рибозу, объединяют, устанавливают рН, равным 6,5, и концентрируют при пониженном давлении и 50 С. Концентрированный раствор обесцвечивают порошкообразным активированным углем прп добавлении спирта ц выдерживают в спокойном состоянии в холодильной камере. В результате получают 8,6 г кристаллической рибозы. П редм ет изобретения 1, Способ получения Д-рибозы путем выращивания продуцирующих ее микроорганизмов на питательной среде, содержащей источники углевода, азота, неорганические соединения - соли магния, марганца, железа, цинка, калия и активаторы роста, отличаоиийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве продуцентов Д-рибозы используют штамм ы ВгечЬас 1 ег 1 цгп агпгпоп)аоепез АТСС6872, М 1 сгососсцз д 1 ц 1 агп 1 сцв АТСС15455, Вас 11- 1 цз сегецз АТСС9139, ферменты которых превращают питательную среду непосредственно в Д-рпбозу.2, Способ по и, 1, отличтощийся тем, что неорганические соединения питательной среды содержат 0,01 - 0,2% по весу соли магния (в виде иона магния), 0,1 - 1,5% по весу соли калия (в виде иона калия) и 0,0001 в % (вес/объем) ионов марганца или железа, или цинка, или их смеси,3. Способ по п, 1, отличаощийся тем, что, с целью получения производных Д-рибозь 1 -251504 кислоты), 0,01 - 0,2% по весу соли магния (в виде иона магния) и О,1 - 1,5% по весу соли калия (в видс иона калия),Составитель М, АндрееваТекред Л. К. Малова Редактор А. Бер Заказ 381/18 Тираж 480 Подписное11 НИИПИ Когиите 1 а ио делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква Ж, Раушская иаб., и. 4/5 Типография, пр. Саптпова, 2 Д-рибозо-фосфата, неорганические соединения питательной среды содержат 0,2 - 2% по весу фосфата (в виде радикала фосфорной Корректоры: В. Петрова и Е. Ласточкина