Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1835516 ЗЗ/5 5 Э ЕТ ЕИ ОПИ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Кемеровский государственный медицинский институт,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ПРИ ОЖОГАХ ГЛАЗ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунологического .состояния при ожогах глаз. Целью изобретения является повышение чувствительности упрощения способа. Изобретение относится к медицине", в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз.Целью изобретения является повышение чувствительности способа и исключение необходимости забора крови у больного за счет исследования среды непосредственно из зоны ожога,Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бластной трансформации лимфоцитов в биологической среде с ФГА с включением Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, одновременно проводят опытную и контрольную прЬбы, причем в обеих пробах Способ заключается в том, что в опытной пробе ойределяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу больного, на функциональную активность лимфоцитов здоровых доноров, Одновременно в контрольной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которЬй используют слезу здорового человека, на функциональную активность лимфоцитов здорового донора, О наличии нарушения иммунологического состояния судят по индексу Подавления (стимуляции), величина которого может выходить эа пределы + 25 относительно нулевого уровня, что зависит от включения Н-тимидина в пробах со слезой больных с ожогами глаз и здоровых лиц..используют лимфоциты здорового донораа в качестве биологической среды используют соответственно слезу больных с ожогами глаз и здоровых лиц,Способ осуществляется следующим образом.Формируют две пробы - опытную и контрольную. Обе пробы содержат одинаковую культура 41 ную среду, которую готовят следующим образом; иэ гепавинизированной крови донора в градиенте плотности фиколлверографина (плотностью 1077) получают чистую суспензию лимфоцитов, которую трижды отмывают в растворе Хенкса по 5 мин при 75 д, доводят до концентрации 2 х 10 клеток в 1 мл. Готовят взвесь иэ 150 мкл лимфоцитов в среде 199 с 25 мкл 10 сывороткой крови телят и ФГА (рабочая кон 1835516центрация 20 мкг/мл) и помещают в планшет для иммунологических реакций, В опытную пробу (в опытную лунку планшета) к культуральной среде добавляют 30 мкл слезы больного, в контрольную пробу (в контрольную лунку) - слезу здорового человека. Пробы культивируют 48 ч при Т =37 С в атмосфере с 5 содержанием углекислого газа, Через 48 ч в каждую лунку (опытную и контрольную) добавляют Н-тимидин по 253мкл (доза 1 мкКИ), оставляют на 24 ч при тех же условиях. Затем пробы пропускают через миллипоровый фильтр "Владипор" и фиксируют по общепринятой методике (5 ТХУ, спирт, эфир). Пробы просчитывают на стинцилляционном счетчике Бета. Все пробы ставятся в дублированном варианте. Рассчитывают индекс подавления (стимуляции) по формуле:ИП(С) =(1 -- А) х 100 ,Вгде ИП(С) - индекс подавления (стимуляции);А- включение Н-тимидина в пробах со3слезой обожженных;В - включение Н-тимидина в пробах со3слезой здоровых людей.П р и м е р 1. Больной С. Диагноз - легкий химический ожог роговицы и коньюнктивы правого глаза. В 1, 3, 7 сутки после ожога взята слеза на иммунологическое исследование. Величина ИП(С) составила: в 1 сутки - (-)303, на 3 сутки - (-)183%, на 7 сутки - (-)29 . фТаким образом, у больного наблюдалась стимулирующая активность слезы, что характеризовалось отрицательными значениями индекса, величина которого значительно отклонялась от нормы (больше (-)25%) (фиг,1).При обследовании группы больных с легкими ожогами глаз ИП(С) в 1 сутки после ожога составил (-)348,7 +58,6, на 3 сутки - (-)188,7 + 33,4, на 7 сутки - (-)34,0 + =14,1;П р и м,е р 2. Больная М. Диагноз - химический ожог роговицы и коньюнктивы средней тяжести правого глаза. В 1, 3, 7, 14 сутки после ожога взята слеза для иммунологического исследования, Величина ИП(С) составила: в 1 сутки - (+)18, на 3 сутки - (+)877 ь, на 7 сутки - (-)50, на 14 сутки - (+)29.Таким образом, на 3 сутки после ожога наблюдался максимальный подъем подавляющейся активности слезы, характеризующейся положительными значениямиФ о р мул а изобретен и я Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз, включающий определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бласттрансформации лимфоцитов в биологической среде, содержащей фитогемагглютинин (ФГА) с включением Н-тимидина3в бласттрансформированные клетки; о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, используют лимфоциты здорового донора, причем в отдельные пробы добавляют слезу больных и здоровых лиц, далее высчитывают индекс подавления или стимуляции по формуле 45 50 55 ИП(С) = (1 -- ) х 100 ,А В индекса, величина которого значительно от клонялась от нормы (больше (+)25), К 7 суткам после ожога она сменялась стимулирующей активностью, величина которой так же отклонялась от нормы (больше (-)257 ь), споследующим ее приближением к 14 суткам после ожога к уровню иммуномодулирующей активности слезы здоровых лиц (фиг.2).При обследовании группы больных с "0 ожогами глаз средней тяжести ИП(С) в 1сутки после ожога составил (+)15,3 .ф. 2,2 ф на 3 сутки - (+)65,0 ф 8.4 ь, на 7 сутки - (-)42,8 + 4,5, на 14 сутки - (+) 25,2 + 4,2 6.П р и м е р 3. Болвной Г. Диагноз - 15 тяжелый Мимический ожог роговицы и кОньюнктивы правого глаза. На 3, 7, 14, 28 сутки после ожога взята слеза для иммунологического исследования, Величина ИП(С) составила: на 3 сутки - (+)18, на 7 сутки - (+)617 ь, на 14 сутки - (+)41 о , на 28 сутки - (+)29 6Таким образом, наблюдалась подавляющая активность слезы во все сроки наблюдения с максимальным ее подъемом и значительным отклонением от нормы (больше (+)25%) на 7 сутки после ожога (фиг,З).По сравнению с прототипом заявленный способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз обладает следующими преимуществами: повышается чувствительность, так как он может быть использован для определения нарушения иммунологического состояния при легких, средней тяжести, тяжелых и особо тяжелых ожогах, в то время как по иэве стному способу лишь при тяжелых.и особотяжелых ожОгах глаз; исключается необходимость забора крови из вены больного, что устраняет возможность ВИЧ-инфицирования.401835516 Составитель Е.БелобородоваТехред М,Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор Заказ 2981 Тираж . Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская нэб 4(5 Проиэводстеенно-издательский комбинат "Патент",.г, Ужгород, ул.Гагарина, 101где ИП(С- индекс подавления или стимуляции;А - включение Н-тимидина в пробах созслезай больных;В - включение Н-тимидина в пробах созслезой здоровых лиц, 5 и при величине индекса, выходящей за пределы + 25 относительно нулевого уровня, определяют наличие нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз.