Способ определения уровня секреции норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных

(54) СПОСОБСЕКРЕЦИИ НОР ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) САНИЕ ИЗО МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ л,%21облем криобиологии и криССР.Ломакин, Л.Н.Марченко и н. СССР 1979, т. 65, с. 141- ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ АДРЕНАЛИНА В ГИПОТАИзобретение относится к области физиологии и может быть использовано для изучения механизмов синаптических процессов центральной нервной системы.Целью изобретения является повышение выживаемости экспериментальных животных эа счет уменьшения травматиэации головного мозга,Поставленная цель достигается тем, что в способе определения уровня секреции норадреналина в гипоталамусе, включающем введение эН-норадреналина в организм и последующее определение радиоактивности гипоталамуса, предварительно проводят краниоцеребральную гипотермию (КЦГ) до температуры мозга 33 - 29 С, а Н-норадреналин вводят внутрибрюшинно,П р и м е р 1, Перед началом эксперимента для блокировки терморегуляторных реакций организма животных (40 крыс весом 200-250 г) наркотиэировали внутрибрюшиннцми иньекциями смеси 5 ф-ного раствора тиапентала натрия и 30-ного раствора гаммаоксимасляной кислоты иэ расчета 30 мг/кг и 100 мг / г массы животного, соответственно. КЦГ до АМУСЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИНЫХ(57) Использование: в области физиологии, Сущность изобретения: животным проводят краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29 С, после чего внутрибрюшинно вводят Н-норадреналина и3определяют радиоактивность гипоталамуса, по которой судят об уровне секреции норадреналина. Изобретение позволяет снизить травматичность способа. 5 табл. температуры мозга 33-29 С проводили на установке для программного охлаждения. Для проведения КЦГ. на черепе животного устанавливали стеклянные трубки, залитые в протакрил; по которым продували пары азота. В ходе экспериментов измеряли ректальную температуру и температуру в среднем ухе, которая соответствует температуре гипоталамуса, Температуру коры 1,ольших - ф полушарий головного мозга измер,ци тер- . ОО модатчиком, стереотоксически вво;.:;:инымЯ через специальную направляащук трубку, ( укрепленную на черепе животного протак- ( р ридом, Измерение температуры осуществля-р ли электронным термометром с диапазоном измерения (-50 К+ 50) С (разрешающая способность 0,1 С) и 4-мя датчиками температуры(терморезисторы СТЗ), размещенными а на конце медицинскойиглы, После самоотогрева животного изучали секрецию Н - НАэ радиоизотопнцм методом с использованием "роэЬ-рц 11" канюли, которую вводили по стереотоксическим координатам в переднюю и заднюю области гипоталамуса. Канюлю с")- едйняли с перистальтическим насосом и1820331 Таблица 1 всю систему заполняли раствором Кребса - Рингера. После заполнения системы раствором канюлю вводили в передние и задние отделы гипоталамуса, животному внутрибрюшинно вводили 20 мкл раствора Н - НА (1 мкл/мин) при помощи микро- шприца. Перфуэию проводили со скоростью 25-30 мкл раствором КребсатРингера Собирали 20-минутные фракции. Измерение радиоактивности собранных фракций проводили, регистрируя возникающие при радиоактИвном распаде Р -частицы в сцинтилляционном счетчике. Коэффициент высвобождения (К 8) рассчитывали из отношения радиоактивности исследуемой фракции к радиоактивности последней фракции отмывки, имеющей стабильный уровень радиоактивности: адиоактивиость послед емой кции, импlмин Ь радиоактивностьпоследней фракции отмывки, имп мин щЯ- м 2, 082 (передний отдел эпоталамуса ) 3114, 24 К в- у-И- = 2, 097 (аадний отдел гипоталамуса )2924, 89в, 1252,ИРезультаты представлены в табл,1 в сравнении с прототипом,Из забл.1 видно, что предлагаемый способ позволяет определять уровень секреции.норадренолййа в гипоталамусе с такой жечочностью, каки способ по прототипу.После определения уровня секреции проводили наблюдение за выживаемостью крыс.Результаты представлены в табл.2, Из табл,2 видно, что к 10-м суткам вы.живаемость крыс выше, чем в прототипе в 2 раза, что обусловлено меньшой травматичностью предлагаемого способа,П р и м е р 2. Три группы животных ( в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) ох.лаждали, соответственно, до температуры мозга 36, 35 и 34 С. После самоотогрева исследовалиуровень секреции Н-норадрезналина о передних и задних отделах гипоталамуса. Результаты свидетельствуют о том,что,при данном температурном режиме уровень секреции существенно ниже, чем в прототипе (табл.З).П р и м е р 3. Три группы животных (в 5, каждом по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры 33, 31, 29 ОС (заявляемый режим). Исследовали уровень секреции Н-норадреналина в передних и задних отделах гипоталамуса.Результаты представлены в табл.4.Из табл.4 видно, что в заявляемом температурном режиме (33-29 С) секреция эН-норадреналина в гипоталамусе не отличается от прототипа.15 П р и м е р 4. Три группы животных (в .каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры мозга 28, 25, 22 С (температурный режим ниже заявляемого) и исследовали уровень 20 секреции Н-норадреналина, Результатыуказывают нато, что при данных температурах уровень секреции практически не определяется, Результаты представлены втабл,5,25 Из приведенных примеров следует, чтозаявляемый способ позволяет определять уровень секреции Н-норадреналина в гиэпоталамусе головного мозга экспериментальных животных с минимальной 30 травматиэацией мозга, что,обеспечиваетвысокую выживаемость после окончания.эксперимента.Формула изобретения Способ определения уровня секреции .35 норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных, включающий введе-ние Н-норадреналина в организм животного и последующее определение радиоактивности гипо-:аламуса, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выживаемости жиъотных эа счет уменьшения травматиззции головного мозга, предварительно осуществляют краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 45 33-29 С, а эН-норадреналин вводят внутрибрюшинно.1820331 7- й ень 98 ф 02 98 й 02 100 100 70 ф 2,0 95 ф 1,0 85+ 1,0 50 ф 10 Темпе а а С Передние огделы гипоталаму- са ректум мозг Контрольнормотермия ) 35 38Хомяки Крысы Хомяки Крысы Хомяки Крысы Хомяки Крысы Хомяки Крысы 0,008 + 0,007 .ф.0,008 й 0,006 + 0,009 .ф.0,0080,010 .ф.0,01 .ф.2,2 + 2,1 ф. О,ООЗ 0,002 0,001 0,001 0,001 0,002 0,001 0,006 0,1 0,09 Таблица 2 10 йень Таблица 3 Задние отделы гипоталамуса