Способ выявления grероnема раlliduм

(51)5 ЗОБРЕТЕН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(22) 16.12,8746) 15.10.92. Бюл. М 3871) Киевский медицинский институт им.акад. А. А, Богомольца(56) Справочник по микробиологическим ивирусолагическим методам исследованияпод ред. М. О. Биргера, М., 1982, стр. 299304,(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ТЙЕРОМЕМАРАШООМ(57) Изобретение относится к медицинскоймикробиологии и может быть использованопри диагностике сифилиса. Цель изобретения - повышение точности способа: Для выявления возбудителя сифилиса Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса,Цель изобретения - повышение точности способа,Способ иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Больной К, поступил в стационар с подозрением на сифилис, В стационаре больной всесторонне обследаван: общий анализ крови и мочи беэ патологии, серологические реакции (реакция Вассермана, РИФ, РИБТ) отрицательные. Общепринятые, ежедневные исследования (в течение 6 дней) тканевой жидкости из эрозии на половом члене на бледную трепанему в темнополевом микроскопе не исследуемый материал помещают в камеру, выполненнуо из полиакриламиднсго геля и абеспечивающуо анаэробные условия, в которую затем вводят питательную среду, содержащую в равных абьемных соотношениях плазмол и 1-2 О-ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидрализа молочной сыворотки смесью микроорганизмов 51 герососсо з 1 ас 11 з 121/4, 81 гер 1 асосс(1 з сгещагз 244 хб/1,ас(аЬас 1 ег ит сазе 18, Асе(аЬас(ег асеО РД, 1 астоЬас 1 егйпэ Ьццагсва в пропорциях 1;1:2:2:1. Каме ры и н кубируют в течение 48 часов при 37 С с постоянным микроскопическим контролем посевом.Способ позволяет выявлять возбудитель в тех случаях, когда серолагический и микро- З скапический методы исследования не эффективны. аеаспОзволили обнаружить возбудителя сифилиса, Исследования пчнктата увеличенного пахового лимфоузла также не позволили обнаружить бледные трепанемы. На 7-й день СО обследования у больного параллельно с ис- О следованием тканевой жидкости из эрозии фь, пад микроскопом в темном поле зрения а проведена инокуляция исследуемого материала в углубление камеры из полиакриламидного геля.ееВДля изготовления микрокамер используют предметные и покравные стекла, гелевые блоки и герметизирующая замазка. С этой целью на предметное стекло кладут заранее приготовленный гелевый блок размерам 5 х 5 - 10 х 10 мм с углублением 2 х 2 - 6 х 6 мм. В углубление гелевага блока микро 1768641пипеткой вносят материалы для исследования на бледные трепонемы и накрывают блок покровным стеклом, Покроаное стекло скрепляют с предметным стеклом герметизирующей замазкой, оставляя лишь небольшое отверстие ( .; 3-4 мм) для заполнения камеры питательной средой. Затем в камеру микропипеткой вводят жидкую питательную среду, в состав которой входит смесь. в обьемном соотношении 1:1 плазмола и 1 ОД- ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиэа молочной сыворотки смесью микроорганизмов Я 1 гертососсцз ась з 121/4, Ятгертососсцз сгевогз 244 х б/1,1 астоЬассег 1 цгп сазе 1 18, Асе 1 оЬассег асет 1 РД,1 астоЬастегца Ьц 1 цаг 1 сцгп в пропорции 1;1:2,2,1, после чего закрывают герметизирующей замазкой отверстие, через которое вводится питательная среда. Таким образом в камере создаются анаэробные условия. Камеру помещают в термостат при температуре +35 - 37 С и периодически проводят диагностический контроль в течение 48 часов содержимого микрокамеры под микроскопом в темном поле зрения или в фаэовоконтрастном микроскопе на наличие возбудителя сифилиса, Для удобства наблюдения камеру можно помещать в термостатный столик, который устанавливают на креплении предметного столика микроскопа. Диагностическое бактериоскопическое исследование посева микрокамер необходимо проводить периодически в течение двух дней, т,к, тканевые бледные трепонемы делятся через каждые 30-33 часа, Вместе с тем необходимо проводить тщательное бактериоскопическое исследование содержимого микрокамер и в первые часы после посева, поскольку труднодиагностируемые формы устойчивого выживания трепонем-а-формы, цисты - в созданных благоприятных условиях могут реверсироаать а обычные спиралевидные формы, которые возможно обнаружить при микроскопическом исследовании в темном поле, Через 36 часов от момента посева исследуемого материала при микроскопии выявлены обычные спиралевидные бледные трепонемы с характерными для них видами движений, равномернымизавитками и другими морфологическими свойствами, характерными для бледных трепонем, Больному поставлен диагноз; сифилис 1 серонегативный и назначено специфическое лечение.П р и м в р 2, Больной А, обратился к врачу по повому эрозии на половом члене. Диагноз - эрозивный баланопостит. Стандартные серологические реакции на сифи 10 вания и помещением микрокамер в термо 15 стат при +37 С. Проведенный микроскопический диагностический конт 30 35 40 45 50 55 лис на момент обследования отрицательные. В отделяемом из эрозии и пунктатв лимфоузла при обычной темнополевой микроскопии бледные трепонемы не обнаружены в течение 3-х дней исследования, Начиная с 4-го дня обследования больному параллельно с общепринятым методом исследования проведена инокуляция исследувмого материала из эрозии в микрокамеру, заполненную питательной средой в соответствии с примером 1, но с использованием 2-го гидролизата с последующим созданием анаэробных условий инкубирорОль позволил через 6 ч после проведенного посева обнаружить в посевном материале типичные бледные трепонемы с характерными для них морфологическими свойствами и поставить больному диагноз: Сифилис 1 серонегативный и назначить специфическое лечение.Таким образом, использование способа позволяет повысить способ диагностики сифилиса в тех случаях, когда бактериоскопический и серологический методы дают отрицательные результаты.Данный способ может также использоваться для исследования цикла развития бледных трепонем, стадийности образования их форм, условий, при которых они возникают, и изучения действия антибиотикотерапии в системеи ч 1 чо,П р и м е р 3. В отмытые в физиологическом растворе камеры, размером 1 см х 1 см х 0,3 см из полиакриламидного геля через шприц или пастеровской пипеткой вводят в имеющиеся одну или более полостей путем прокола исследуемый материал, содержащий бледные трепонемы, Затеял камеры имплантируют внутри брюшинно лабораторным животным (кроликам, белым мышам, а через определенное время извлекают иэ организма и подвергают микроскопироаанию. При необходимости из полостей камеры пастеровской пипеткой можно извлекать пробы для микроскопии под покровным стеклом или других целей, а камеру повторно имплантировать в организм лабораторного животного.Формула изобретения: Способ выявления Тгеропепа ра 1 Ыцт в исследуемом клиническом материале, о т личающийся тем,что,сцельюповышения точности способа, исследуемый материал инокулируют в жидкую питательную среду, содержащую в равных обьемных соотношениях плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сывоЗаказ 3622 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ротки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Зтгертососсоз 1 асба 121/4, Згертасоссл сгеглог 1 в 244 хб/1, 1.астоЬастегйгп сазе 1 18, Асе 1 оЬастег асеб РД, .цстоЬастегШп ЬШцагсов в соотношении 1:1:2,2:1, и инкубацию посевов проводят в аназробных условиях в микрокамере, выполненной из полиакриламидного геля.