Способ оценки биологической совместимости материала с роговицей
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1732975
Авторы: Джарулла-Заде, Ермаков, Каспаров, Писцов
Текст
Т 5 союз сОВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1 Т п 9) НИ ЕЛЬСТВУ ВТОРСКОМУ СВ 7) дицине, а ь изобресоба. Для ют культука (КРЭЧ), спенэией инкубируиал помеубируют в отмывают ния. 2 з,п. имен тени-заде,ру ро тверд КРЭЧ ютвт щают течен и зал ф-лы. 85, М 5,ЕСКОИ РОГОцине, в ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТГ 10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБ) СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОЛОГИ ВМЕСТИМОСТИ МАТЕРИАЛОВ ИЦЕИ Изобретение относится к меди частности к офтальмохирургии,Цель изобретения - повышение достоверности способа за счет большей его физи- ОЛОГИЧНОСТИ,Способ осуществляют. следующим образом;Источником роговичного эндотелия слукат 20-36-недельные эмбрионы человека, Эндотелий роговиц энуклеированных глаз соскабливают скальпелем, помещают в ячейки планшета и инкубируют в культурной среде 2 - 3 сут, Прикрепившиеся в виде монослоя клетки промывают и в дальнейшем смену среды производят через день. Получают конфлуентный (плотный) монослой культуры роговичного эндотелия человека (КРЭЧ с плотностью (в среднем) 2000 кл,/мм, соответствующей норме для взрослого человека. Для получения суспензии с2,) см поверхности монослоя снимают примерно 2 млн,клеток и пассируют через 7 - 10 дн. раствором трипсина с коэффициентом пересева 1,10. После 2-3-го пассажа суспенэию используют для опыта,я)5 А 61 Р 9/00//С 12 й 5 зобретение относится к мено к офтальмохирургии, Цел - повышение точности спо ствления способа испольэу овичного эндотелия челове ый материал заливают су в среде культивирования иечение 3 сут, а жидкий матер на монослой КРЭЧ и инкие 40 мин, затем монослойивают средой культивирова Образец испытуемого твердого материала диаметром 5 мм закрепляют на дне чаш- (/) ки Петри (35 мм в диаметре) с помощью силиконовой смазки, После этого в каждую чашку наливают по 4 мл суспензии КРЭЧ в среде культивирования и помещают в СО 2- инкубатор при 37 С на 3 сут. Начиная с 4-х суток, с помощью фазоконтрастного микро-, ф скопа в динамике оценивают совмести. ина мость материала с эндотелием путем (Д подсчета количества прикрепившихся к об- Я разцу клеток, количества и размера образо- (0 вавшихся островков клеток, выявления наличия или отсутствия распластывания клеток.При испытании жидких материалов из чашки Петри с монослоем КРЭЧ удаляютд среду культивирования и наливают жидкий испытуемый материал в количестве, позволяющем полностью покрыть монослой. Затем образец помещают в СО 2-инкубатор при 37 С на 40 мин. Испытуемый материал сливают, монослой дважды промывают средой культивирования и заливают последней (если испытуемый материал прозрачен, томикроскопию можно проводить, не удаляяего), Оценку совместимости материала с эндотелием роговицы производят с помощьюфазоконтрастного микроскопа на основеподсчета потерь плотности клеток и выявления качественных изменений монослоя.П р и м е р 1. Образец полиметилметакрилата диаметром 5 мм закрепили на днечашки Петри с помощью силиконовой смазки, В чашку налили 4 мл суспензии КРЭЧ всреде культивирования и поместили в СО 2 инкубатор при 37 С на 3 сут, Начиная с 4-хсуток, с помощью фазоконтрастного микроскопа "М 1 сог 1" оценивали взаимодействиеэндотелиальных клеток с испытуемым образцом, На 4-е сутки отмечалось прикрепление и распластывание эндотелиальныхклеток на поверхности образца (до 1 б - 18кл /мм ), Затем продолжали инкубацию, Кб-му дню эндотелиальные клетки располагались на поверхности образца, образуяостровки монослоя по 8 - 10 кл, (в среднем2до 20 островков на 1 мм поверхности полиметил метакрилата),П р и м е р 2, Образец силикона диаметром 5 мм закрепили на дне чашки Петри спомощью силиконовой смазки. В чашку налили 4 мл суспензии КРЭЧ в среде культивирования и поместили в СО 2-инкубаторпри 37 С на 3 сут. Оценку взаимодействияэндотелиальных клеток с образцом проводили, начиная с 4-х суток, с помощью фазоконтрастного микроскопа "Юсоп". На 4-есутки отмечалось прикрепление эндотелиальных клеток к образцу, однако количествоих было значительно меньшим, чем в случаес образцом полиметилметакрилата (5 - бкл./мм ), кроме того, не отмечалось расплагстывания клеток, К 7-м суткам обнаруживались редкие (бна 1 мм ) небольшие (4-52кл.) островки монослоя эндотелия,Приведенные примеры свидетельствуют о меньшем влиянии силикона на роговичный эндотелий по сравнению сполиметилметакрилатом (и, следовательно,о большей биосовместимости силикона сроговицел), что полностью соответствуетданным, полученным в результате клинических исследований.П р и м е р 3, После подсчета плотности2эндотелиальных клеток (2030 кл,/мм ) изчашки Петри с монослоем КРЭЧ удалилисреду культивирования и монослой залилижидким протектором эндотелия "Хилон".После инкубации при 37 С в течение 40 мин(среднее время хирургической операции наглазу) испытуемый препарат слили, дваждыпромыли средой культивирования и залилипоследней, Взаимодействие препарата смонослоем оценивали с помощью фазоконтрастного микроскопа "Юсоп". В качествеконтроля использовали интактный монослой КРЭЧ, при микроскопии которого быливидны четко очерченные удлиненные клетки5 с хорошо видимым ядром.При микроскопии монослоя эндотелияпосле удаления "Хилона" плотность эндотелиальных клеток осталась неизменной(2030кл./мм ). Отмечалось незначительное набу 10 хание отдельных клеток (до 50 кл, на 1 мм ).П р и м е р 4. После подсчета плотностиэндотелиальных клеток (1950 кл,/мм ) изгчашки Петри с монослоем КРЭЧ удалилисреду культивирова ия и монослой залили15 протектором эндотелия "Хонсурид". Послеинкубации при 37 С в течение 40 мин провели оценку взаимодействия препарата сэндотелием с помощью фазоконтрастногомикроскопа "Ксоп". В качестве контроля20 использован интактный монослой КРЭЧПри микроскопии монослоя с "Хонсуридомотмечалось уменьшение плотности клетокдо 1820 кл,/мм", До 20% сохранившихсяклеток отечны, границы их размыты.25 Полученные данные свидетельствуютоб отсутствии отрицательного действия нароговицу препарата "Хилон" и о наличиинекоторого токсического влияния на эндотелий препарата "Хонсурид", что полностью30 подтверждается данными клинических наблюдений,Предлагаемый способ в силу своей физиологичности позволяет с большой точностью проводить количественную и качест 35 венную оценку биологической совместимости как твердых, так и жидких материалов сроговицей глаза,Формула изобретения1, Способ оценки биологической совме 40 стимости материала с роговицей путем совмещения испытуемого материала скультурой ткани роговицы, культивирования впитательной среде с последующей оценкойсовместимости микроскопическим методом45 по изменению клеточной культуры, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышениядостоверности способа за счет большей егофизиологичности, используют культуру роговичного эндотелия человека.50 2. Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения специфичности способа, твердый материал заливаютсуспензией культуры роговичного эндотелия человека в среде культивирования и ин 55 кубируют в течение не менее 3 сут, а оценкусовместимости проводят на основе подсчета количества прикрепившихся к образцуклеток, количества и размера образовавшихся островков клеток, выявления наличияраспластывания клеток,1732975 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Составитель Н,ЕрмаковТехред М,Моргентал Корректор С,Шевкун Редактор А.Огар Заказ 1615 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж, Раушская наб 4/5. Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 3. Способпоп 1,отличающийся тем, что, с целью расширения возможностей, повышения специфичности при работе с жидкими материалами, помещают их на монослой культуры роговичного эндотелия человека и инкубируют не менее 40 мин, а оценку совместимости производят на основе подсчета потерь плотности клеток и выявления качественных изменений 5 монослоя,
СмотретьЗаявка
4769914, 13.12.1989
В Н. Каспаров Ч Дж. Джурулла-заде, М Ю Писцов и Н В Ермаков
КАСПАРОВ АРКАДИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ, ДЖАРУЛЛА-ЗАДЕ ЧИНГИЗ ДЖАРУЛЛА ОГЛЫ, ПИСЦОВ МИХАИЛ ЮРЬЕВИЧ, ЕРМАКОВ НИКОЛАЙ ВЛАДИМИРОВИЧ
МПК / Метки
МПК: A61F 9/00
Метки: биологической, оценки, роговицей, совместимости
Опубликовано: 15.05.1992
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-1732975-sposob-ocenki-biologicheskojj-sovmestimosti-materiala-s-rogovicejj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ оценки биологической совместимости материала с роговицей</a>
Предыдущий патент: Эректор зусмановского
Следующий патент: Способ лечения кератоконуса
Случайный патент: Способ измерения силы натяжения гибкой оттяжки высотных сооружений