Способ проведения микрохирургических операций с яйцеклетками и эмбрионами

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК О 19/04, С 12 й 5/ОО О 1/24 55 кии институт жиПолесья УССР глый и Н.А,Гор.8) вап 1 ро 1 ат 1 оП о 1везт 1 с врес 1 ев , С,Абавз,. 1982,Изобретен гии, в частнос ческих объект оболочку, и м трансплантац щих,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(56) Ю 11 абвеп Я.М. М 1 сгоевЬгуо 01 т 1)е 1 агде бовавва 11 ап едд сгапэ 1 ег/ Ебр, 186-208,(54) СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ МИКРОХИРУРГИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЙ С ЯЙЦЕКЛЕТКАМИ И ЭМБРИОНАМИ ие относится к биотехнолоти к микрохирургии биологиов, имеющих внеклеточную ожет быть использовано в ии эмбрионов млекопитаюЦелью изобретения является повышение сохранности биологического объекта и повышение технологичности операции.Поставленная цель достигается тем, что биологический объект извлекают из внеклеточной оболочки в гипертоническом растворе непроникающих через мембрану клетки веществ концентрации 1,2-1,5 М в среде, обеспечивающей жизнеспособность,Через оболочку вводят капилляр, втягивают в него клеточную массу биологического объекта и извлекают ее иэ оболочки, проводят микрохирургические операции с клеточной массой в растворе, обеспечивающем жизнеспособность, затем при необхо 1727822(57) Использование; биотехнология, трансплантация эмбриочов млекопитающих. Сущность изобретения: эмбрионы крупного рогатого скота на стадии морулы получают на 7-й день после осеменения. Помещают их в 1,5 М раствор сахарозы в фосфатно-солевом буфере Дюльбекко. Заточенной микро- пипеткой делают прокол оболочки и извлекают содержимое клетки, Зародыш без оболочки переносят в изотонический раствор. Производят разделение зародыша на две половинки. Две части эмбриона переносят в 1,5 М раствор сахарозы. Каждую из частей зародыша помещают во внекле-. точную оболочку и переносят в физиологический раствор, 2 ил., 1 табл. димости помещают снова ее в одну или несколько внеклеточных оболочек в гипертоническом растворе и переносят в изотонический физиологический раствор. Способ проведения микрохирургических операций основан на том, что внеклеточная оболочка биологического. объекта, в частности прозрачная оболочка (зона пеллюцида) яйцеклеток и эмбрионов, не обладает избирательной проницаемостью, в то время как цитоплазматические мембраны клеток, в частности яйцеклеток и бластомеров эмбрионов, обладают избирательной проницаемостью. Это приводит к тому, что при помещении в гипертонические растворь 1 непроницаемь:х через цитоплазматические мембраны качеств, например хлористого натрия, сахарозы осмомолярностью 1.2 - 1,5 М, обьем клеточной массы биологического объекта уменьшается ч 2.5-2 Я1727822 35 40 45 50 5 10 15 20 25 30 позиционеровмикроманипулятора, эмбрионы удерживают микроприсоской. Заточен-. ной микропипеткой с диаметром, сравнимым с размерами внутриклеточной массы, находящейся в гипертоническом растворе, делают прокол оболочки и извлекают содержимое клетки, При этом разрыв внеклеточной оболочки незначителен, а собственно эмбрион извлекают из нее без повреждений. Зародь 1 ш без оболочки переносят в изотонический раствор, где эмбрион восстанавливает свой первоначальный объем, и производят разделение зародыша стеклянной иглой на две половинки. Затем две части эмбриона переносят в 1,5 М раствор сахарозы снова, где размеры половинок уменьшаются, Одну из частей зародыша помещают через отверстие во внеклеточную оболочку, из которой эмбрион был извлечен, а вторую часть зародыша - в другую оболочку, из которой предварительно извлечено содержимое, После проведения микрохирургической операции половинки эмбрионов, находящиеся во внеклеточной оболочке, переносят в физиологический раствор,Результаты эксперимента показывают, что использование гипертонического раствора при удалении внеклеточной оболочки позволяет манипулировать с эмбрионами без риска их повреждения и, следовательно, повысить процент жизнеспособных половинок после разделения зародышей. Формула изобретения Способ проведения микрохирургических операций с яйцеклетками и эмбрионами, включающий извлечение их из внеклеточной оболочки с последующим возвращением в пустую оболочку, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения сохранности биологического объекта и повышения технологичности операции; извлечение яйцеклеток и эмбрионов из внеклеточной оболочки и возвращение их в пустую оболочку осуществляют в гипертоническом растворе непроникающих веществ осмомолярностью 1,2-1,5 М в среде, обеспечивающей жизнеспособность, объектов,1727822 ский раствор, выдерживают вловия и культивируют вне оргаещают в гипертон в физиологические Биологические объекты по течение 1 ч, возвращают низма.Биологические объекты кул тивируют вне орга эма в изотоническом растворе. оставитель М.Усцелемовехред М.Моргентал Корректор О. Кравцова Шмако еда аказ 1357 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5