Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного

(51)5 6 09 В 23 о илиала риев, В.Е Ю.Гнутов ии./Под ред Я УСТОИЧИ ННОЙ СИС ТАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(71) Институт, биологии ЯкутсСО АН СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИВОСТИ ТЕРМОРЕГУЛЯЦИОТЕМЫ ЭКСПЕРИМЕНЖИ ВОТН ОГО Изобретение относится к медицине,енно к физиологии. Цель изобретения - повышение точности определения.Способ осуществляют следующим образом,Получают ацетоновый порошок из мозга животного - донора. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте сразу же после убоя животного, В лаборатории навеску ткани мозга 20 г заливают 200 мл обезвожен ного охлажденногоацетона(не вышеС). Растирают кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносят в стакан размельчителя тканей. После гомогенизации центрифугируют 10 мин при 20009. Ацетон сливают. Осадок снова заливают ацетоном. Гомогенизируют. Эту операцию повторяют 3 раза, Осадок после последнего осаждения высушивают в вакууме.(57) Изобретение относится к медицине и может применяться при определении устойчивости терморегуляционной системы животного. Цель - повышение точности определения, Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте, готовят экстракт мозга 1-10 кД. У подопытного животного измеряют температуру "ядра" тела. Далее с животным проводят манипуляции при 18-22 ОС, предварительно введя экстракт в дозе 0,5-1,0 мг/г. Устойчивость терморегуляционной системы животного определяют в случае, если температура после выделения экстракта снижается менее, чем на 10 О/о,СНавеску ацетонового порошка заливают охлажденной (до 0 С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е. на 1 гпорошка берут 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизируют на холоде втонком гомогенизаторе, после этого прогре-вают в кипящей бане в течение 30 мин. Ох 1лаждают, Гомогенат центрифугируют при 1 Я400009 в течение 60 мин. Супернатант пере-К)носят в ультрафильтрационную ячейку с (лфильтром, отсекающим соединения с мас 1 ГЬсой выше 10,кД. Затем фильтрат пропускают нерее фильтр, отсекающии соединения с чьимассой ниже 1,0 кД. Осадок смывают с по-- аследнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивают на лиофилизаторе,расфасовывают и хранят при -20 С без доступа воздуха. В итоге получают пептиднуюфракцию мозга от 1 до 10 кД,Определяют температуру тела мышейпутем введения в ободочную кишку на глубину 3 см ректального датчика электротермометра.Препарат вводят внутрибрюшин ной инъекцией, так как это наиболее простой и всем доступный способ. Шприц, - объемом 1 мл, инъекционные иглы наименьшего размера, Доза препарата 0,5-1,0 мг/л. Определяют температуру через 30 мин после введения и в случае, если она по сравнению с исходной снижается менее чем на 10;( определяют устойчивость терморегуляционной системы.П р и м е р 1. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживали в жидком азоте сразу же после убоя животного. В лаборатории навеску ткани мозга 20 г заливали 200 мл обезвоженного ацетона (охлажденного не выше -20 С), Растирали кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносили в стакан размельчителя тканей, После гомогенизации центрифугировали 10 мин при 2000 д. Ацетон сливали. Осадок снова заливали ацетоном. Гомогенизировали. Эту операцию повторяли 3 раза, Осадок после последнего осаждения высушивали в вакууме.Навеску ацетонового порошка заливали охлажденной (до 0 С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е, на 1 г порошка брали 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизировали на холоде в тонком гомогенизаторе, после этого прогревали в кипящей бане в течение 30 мин. Охлаждали. Гомогенат центрифугировали при 40000 д в течение 60 мин. Супернатант переносили в ультрафильтрационную ячейку с фильтром, отсекающим соединения с массой выше 10 кД. Затем фильтрат пропускали через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1,0 кД. Осадок смывали с последнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивали на лиофилизаторе и хранили при -20 С без доступа воздуха.Температура в ободочной кишке составила 38,7 С. Затем животному ввели 0,5 мг/кг экстракта внутрибрюшинно. Через 30 мин после введения температура животного составила 35,1 С, что на 9 ниже исходной, У животного определили устойчивость терморегуляционной системы. Подопытное животное помещали в камеру, имеющую свободное сообщение с атмосферой, Через камеру создавали поток воздуха с помощью насоса, создавающего разрежение, Скорость потока воздуха контролировали по газовому счетчику. Пробы воздуха проходящего через камеру с животным отбирали аспираторами, а сам анализ проводили на химиче 25 тром, отсекающим соединения с массой выше 10000 Д, Затем фильтрат пропускают через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1000 Д. Смывают фракцию с. последнего фильтра и лиофилизуют. Хранят 30 в холоде без доступа воздуха,Перед опытом экстракт разводится в бидистиллированной воде в расчете 0,5-1,0 мг/г массы животного, У подопытного животного измеряют температуру "ядра" тела электротермометром, После внутрибрюшинной инъекции 1,0 мг/кг экстракта температуру тела измеряют через 30 мин. Манипуляции с животным проводят при стандартных температурах, а именно 18-22 С. Через 30 мин 40 температура понизилась по сравнению с исходной на 21, Определяется отсутствие устойцивости терморегуляцйонной системы животного. Использование способа непрямой колориметрии с оценкой зависимости 45 уровня потребления кислорода от температуры среды подтвердило полученные результаты.Применение способа позволяет повысить по сравнению с прототипом точность 50 определения устойчивости терморегуляционной системы животного. Формула изобретения Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного, включающий. оценку его температуры, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения, температуру измеряют до и через 30 мин после введения экстракта мозга холодоа 55 ском анализаторе. Измерение потребления кислорода проводили при следующих температурах внутри камеры: 5; 10; 15; 20 С.При каждой температуре животное выдер живали в течение 30 мин. Затем отбиралипробы воздуха. С каждым животным проводили трехкратное измерение и брали среднее.П р и м е р 2, Источником материала 10 служила ткань головного мозга холодоадаптированного животного (якутской лошади).Материал собирают во время зимнего забоя лошадей. Сразу же после убоя лошади ткань мозга замораживают в жидком азоте, 15 Навеску ткани заливают охлажденнымобезвоженным ацетоном (до -20 С), Гомогенизируют 3-5 раз в соотношении 10-20 мл ацетона на 1 г ткани. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 2000 д, осадок высушива ют под вакуумом, Порошок заливают 1 МСНзСООК в соотношении 1:20, Гомогенизируют на холоде, центрифугируют при 400009 в течение 1 ч. Супернатант переносят в ультрафильтрационную ячейку с филь1712956 10 15 20 25 30 35 40 50 Составитель А,БобровТехред М.Моргентал Корректор Л,Бескид Редактор С.Лисина Заказ 537 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 даптированного животного 1-10 кД в дозе температура после введения экстракта сни,5-1,0 мг/г, а устойчивость терморегуляци- жается по сравнению с исходной менее, чем онной системы определяют в случае, если на 10.