Способ моделирования дыхательной вспышки полиморфоядерных лейкоцитов

)а ,в. К АВТОРСКОМ Иэ свежеся к фармакологиииспользовано для ьной вспышки поитов (ПМЯЛ), упрощение спосоретение относи 1 и и может быт вания дыхател дерных лейкоц изобретения -( ,фь ПРИГОТОВЛЕННЫИ и биохим моделир ЛИМОРфоЦель ерениячто исптидов ость изпроводят включает вок стенкам с мерения,ба.Спо а ес- поле ти ценции ц койном с индукции ренового на кювету метре. Дл (ХЛ) испол ро,4-фт тельно ра раствоое ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт химической физики АН СССР(54) СПОСОБ МОД:ЛИРОВАНьЯ ЯЬХАТЕЛЬНОЙ ВСПЫШТИ ПОЛИМОРФОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЦИ ГОВ(57) Изобретение относится к фармакологиии биохимии и может быть использовано длямоделирования дыхательной вспышки полиморфоядерных лейкоцитов. Цель изобреосуществляется следующим об В цельную кровь, разбавленную оизиологическим раствором в соотношении 1:9, добавляют следующие пептидные препараты: даларгин (тироэил-О-аланил-глицил-фенилаланил-лейцил-аргинин) в концентрации 10 -10 М, тимоген ( -глутамид-триптофан) в концентрации 109 - 10 М, гликопептид (Й-ацвтил-глюкозаминил-И-ацетил-мурамил--аланил-О-изоглутамин) в концентрации 10 - 10 М, гексапептид (аргинил-лиэил-глутамил-валил-тирозил-аргинин) в концентратения - упрощение способа за счет сокрашения числа трудоемких Операций. Поедложение состоит о том, что при моделировании дыхательной вспышки в качестве источника лейкоцитов используют цельную кровь, а регистрацию люминол-зависимой хемилюминесценции проводят в присутствии пептидов тирозил-О-аланило глицил-фенилаланил-лейцил-аргинина 10 10 М, 1-глутамил-триптофана 10 - 10 М,-5 .а 7 й-ацетил-глюкозам ин ил-К-а цетил-мурамил-дланил-О-изоглутамина 10- 10 М или аргинил-лиэил-глутамил-вамил-тирозил-аогинина ",0 - 10- М. Изобретение по зволяет упростить способ за счет сокращения Операций по обработке крови и использования доступных препаратов. 1 табл. ии 10 - 10М, используя всякий ра ения и последующие иэь 1 олистиреновых кювета:, можность прилипания пе осудов, увеличивает точн мальные значения хемилюмин льной крови определяют в с остоянии лейкоцитов и пос фагоцитоза добавлением полис атекса диаметром 0,82 мкм (4 1 Измерения проводят налюмин я усиления хемилюминесценц ьзуют люминол (б-аино,3 дип лази ндио н, Серва), п редва р зведенный в физислогическо добавкой триэтанолэмн;:.а в коцентрации 9 мкмlмл. Конечная концентрация люминола в кювете составляет 10 М.Регистрируют интегрированный сигнал ХЛ за 10 с в сериях опытов со спонтанной и индуцированной фагоцитозом ХЛ при добавлении в кюветы растворов пептидных препаратов изученных концентраций, Измерения проводят в трипликатах образцов. Результаты измерений анализируют по максимальным значениям интегрированного сигнала в сериях экспериментов по каждой концентрации каждого пептидного препарата (ХЛэп) и в контрольных образцах, куда добавляют эквивалентное количество физиологического раствора без пептида(ХЛконтр.) Затем вычисляют изменения ХЛ = ХЛэксп. - ХЛконтр. при всех изученных концентрациях взятых для изучения пептидных препаратов в покое и при фагоцитозе.П р и м е р, В цельную кровь 20 белых мышей, беспородных самцов весом 18 - 20 г, половозрелых, предварительно собранную в общую гепариниэированную емкость и затем помещенную в полистиреновые кюветы с физиологическим раствором в соотношении 1:9, добавляют тимоген в концентрации 10 а М.Для измерения ХЛ используют 4 трипликата образцов: с концентрацией тимогена 10 М в кювете с латексом для фагоцитоза, с концентрацией тимогена 10 М в кювете с физиологическим раствором, с цельной кровью без тимогена с латексом для фагоцитоза и с цельной кровью без тимогена и без латекса с физиологическим раствором, Измерения в таких трипликатах проводят одновременно после одновременной инкубации в течение 10 мин при 37"С. Измерения фиксируют один раз в 10 мин до резкого уменьшения интенсивности ХЛ и отбирают максимальный результат.Это и есть максимальный показатель интегрированного сигнала ХЛ за 10 с. Одновременно измеряют фоновую ХЛ, для чего перед началом измерений образуов измеряют ХЛ пустой (бланковой) кюветы, значение которой в дальнейших измерениях автоматически вычитается из измеренных значений ХЛ изучаемых образцов.После подготовки образцов к измерению (помещение в кюветы цельной крови с физиологическим раствором 1:9, добавление тимогена 10У в кювету или аналогичного объема физиологического раствора), заполняют диспенсер латексом и отдельно физиологическим раствором, затем добавляют во все, кроме бланковой кюветы, люминол в концентрации 10 М в кювете и инкубируют образцы 10 мин при 37 С. Затем измеряют ХЛ всех образцов, с помооьюдиспенсеров добавляют латекс по 4 10 накювету или соответственно тот же объемфизиологического раствора в те образцы,5 куда не следует добавлять латекс. Записывают значения ХЛ, индуцированной латексом (при фагоцитозе), и неиндуцированнойв кюветах, где нет латекса.Запись значений продолжается до до 10 стижения низких значений ХЛ (в течениечаса),Величина прироста ХЛ составляет262 ф,Описанным способом проведены изме-15 рения уровня ХЛ и при других концентрациях тимогена, пептида и других.Данные представлены в таблице,Таким образом, предлагаемый способобеспечивает в сравнении с известным уп.20 рощение за счетсокращения числа трудоемких операций по обработке крови путемиспользования цельной крови и замены дорогостоящего импортного пептидного фактора значительно более дешевыми25 пептидными препаратами при одновременном повышении специфичности способа,так как применение впервые пептидногофактора после добавления корпускулярногостимула обнаружило добавочный однонап 30 равленный эффект от применения обоихстимулов, что позволяет усилить ХЛ при добавлении корпускулярного стимула, при надобности . по ходу эксперимента,дополнительно усилить ХЛ внесением рас 35 .творимого стимула из числа предложенныхпептидных факторов,Ф ар мула из обретенияСпособ моделирования дыхательной40 вспышки полиморфоядерных лейкоцитовпутем обработки полииорфоядерных лейкоцитов активаторами дыхательной вспышки и пептидными факторами споследующей регистрацией интенсивно 45 сти дыхательной вспышки по уровню люминол-зависимой хемилюминесценции, о тличающийся тем, что, с цельюупрощения способа, в качестве источникаполиморфоядерных лейкоцитов используют50 цельную кровь, а в качестве пептидных факторов - тирозил-О-аланил-глицил-фенилалиллейцил-аргинин в концентрации 10-10 М1:гл 7 утамил:триптофан в концентрации 101644206 Составитель Н.ГуляеваТехред М,Моргентал Корректор Т,Палий актор кова 10 Производственно-издательский комбинат "Патент город, ул,Гагар Заказ 1243 Тираж 317 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5