Способ моделирования опухоли легкого и устройство для его осуществления

(51 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТО ний опухолены клеток. Цель достигажинотному внутривеннолевых клеток в дозе ется инъяз кпиен единичных опухо 5 к леток и боле спортируемого м клетки аффините блдгоддря своей ной ткани с ныс е. В качестве трандтерндлд используют тного штамма, который тропности к легочокой вероятностью образу г метдстдзы зола не и каком-либо дрнотного. Изоляция ивых клеток осущестнлвом, представляющимкапилляр Э, соединени 6 одним концомой 2, другим4 шприца 1. Им ько в ле гко угом органе жиинъекция опухоленется устройстсобой гтеклянныйный переходникам с поршневой ми 5 систеиглой с инъекционнои нно использова ие метдстдзирующего в легкиеаемого дффинитетного штамма ереви- сочетднин с предлагаемым устройством для изоляции и инъекции единичных клеток позволяет с выгокой эффективностью получать отдельные метастазы н легких лабораторных животных. 1 ил. ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) фонбрюн П, Методы микроманипулирования, 1951,Степаньян Л,И. и Вахтин Ю,Б. Отбор на аффини 1 ет к легочной ткани в популяции экспериментальных опухолей. - Цитология, 1980, с, 198-204. 54 ) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОПУХО 31 И ЛЕГКОГО И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ1 57) Изобретение относится к медицине и может быть применено при моделировании опухолей. Цель изобретения повышение избирательности и эффективности образования метастатических опухолей, повышение производительности устройства и снижение понреждед 92 К 76 А 1Нзобрететттте относится к. биологии и медицине, в частности, к экспериментальной онкологии, ц может бьп ь применено цри моделировании метастазов легких у лабораторных жттвотттьтх.Цель изобретения - повышение избирательности ц эфективносттт образования одиночных метасстатчческих опухолей, а также повышение производительности и снижение повреждений едштичцых опухолевых клеток.На чертеже изображено устройство для изоляции ц инъекции отдельных клеток. 10 15 Способ осуществляется следующимобразом,Втвотттьи-рецттпттентам трансплантируют аффинитетцый к лагким перевиваемьттт опухолевый штамм путем внутривенной ттттъекцтттт одиночных опухолевыхклеток в дозе 5 клеток и более. Вводимые через вену единичные опухолевыеклетктт, попадая с током крови в большой круг кровообращения и далее в капилляры легочной ткани, закрепляютсяв легком благодаря тропности в этойткани ц дают начало отдельным опухолевым метастазам, которые затем могутбыть удалены хирургическим путем,Дттч,осутяествлеция изоляции отдельных клеток применены взаимозаменяемыесъеттттьте кали.тляры, причем для введенияопухолевых клеток животно;ту-реципиенту кап;т чяр с из олттрованньтт ттт единичньтлттт клетками присоединяют с однойстороны через селикоцовый и стальнойпереходттцки к штьекционттой игле шприца, а с другой - посредством гибкого 40капилляра к поршневой системе, чтообеспечивает достаточную жесткостьконструкции устройства и дает возможность осуществлять прокол кожного покрова и ввесзц отдельные опухолевыеклетки в любой участок тела животцому-реццпцецту, в том числе ц в хвостовую вену.Устройство содержттт поршневые систеттьт 1,2 и съемный взаттмозаттеттяеттьтй стеклттттттьтй капттлляр 3, Одна из поршцевьтх с;тстем 1 представляет собой ицсу,ттттттоттттй штттцтц емкостью 1 мл с насажетттой ца ттего глазной ицъекционцой иглой 4. Стекляттньш капилляр 3 с од 55 цой стороны посредством гибкого, например селиконового тт жесткого, например стального переходттттков 5,6 соединен с ицъекццонной иглой 4 шцрица, с другой - через гибкий капилляр7 с поршневой системой 2,Стекляштый капилляр благодаря своейпрозрачности и малому поперечномудиаметру (1-2 мм) позволяет визуаль-но наблюдать с помощью стереоскопического микроскопа непоследовательноепроникновение в него отдельных клеток, Клетки заходят в капилляр вместе с током жидкости под действием капиллярных сил или же за счет разрежения, создаваемого поршневой системой 2. Регулируя давление в поршнечой системе 2, можно выделить любоенужное количество клеток, Кроме того,визуальный контроль позволяет выбратьнеповрежденные клетки, что значительно увеличивает вероятность образования опухолевых узлов и повышает эффективность метода. Устройство функционирует следующим образом,Перед инъекцией капилляр с выделенными клетками вставляют в переходник 5. При увеличении давления в поршневой системе 2 опухолевые клетки вместе с питательной средой попадают через переходники 5, 6 и инъекционную иглу 4 в организм животного.Инсулицовый шприц в момент инъекции играет роль держателя капиллярац иньекциоцной иглы, После введенияклеток с его помощью промывается игла и переходник от возможного попадания в них сгустков крови и пузырьков воздуха, представляющих опасностьдля жизни животного,П р и м е р. Крысе вводят клеткиперевиваемой рабдолтиосаркомьт РА.У животного с выросшими в легких метастазами предварительно перевитойаффинитетной опухоли РАсразу жепосле его гибели (или забоя) извлекают легкие и вылущивают 20-30 опухолевых узлов, После кратковременной (12 мин ) механической гомогенизацитт всолевом буфере приготовляют слабуюсуспензию опухолевых клеток и подконтролем микроскопа с помощью капилляров изолируют отдельные опухолевыеклетки. Капилляр с выделенными клетками (по 5 клеток на капилляр) дотрансплантации их животным находятсяпри пониженной температуре (на льду),что способствует сохранению жизнедеятельности этих клеток.1 б 280 76 Форчун в из о бр ет ения 1, Способ моделирования опухоли легкого путем вцутрцвенного введения единичных оцухолевых клеток эксперии при своем размцожеццц л бра уют отдельные опухолевые узлы клоцальцогопроисхождения (т.е. от одной единственной клетки),ным капилляром. Составитель АЪчкова Редактор М. Келемеш Техред 1.Олийнык Корректор М. КучеряваяЗаказ 342 Тираж 283 -- -ПодписноеВНИИПИ Государственного комитата по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 Непосредственно перед ицъекцией капилляр с клетками одним концом соединяют с инсулицовым шприцом, другим - через гибкую тонкую трубку с поршневой системой. И уже этим устройством осуществляют иньекццю клеток, Для чего вводят ицъекциоцную иглу в хвостовую вену животного и с помощью 20 мл шприца создают давление в системе. Под действием повышенного давления клетки вместе с соловым буЬером попадают через ицъекциоцную иглу в хвостовую вену и далее в кровяное русло животного. ф 5Так как клетки перевиваемоо штамма РАобладают аффинитетом (сродством, тропностью) к легочной ткани и высокой клоногенцой сцособвгстью, т,е, изолированные едицицпяе оцухолевые 20 клетки в благоприятных условиях сре - ды, размножаясь могут дать начало клонам опухоли (рецидивировавие илцметастазы), то попавшие в кровяное ру-. - ло опухолевые клетки даже в таком мц- ;5 нимальном количестве, проходя через легочную ткань, задерживаются в цей Опыты показали, что при вцутривенном введении клеток РАв дозс 50, 25,10 клеток у 80-907 животы х в лег 35 ких возникают опухолевые узлы, число которых примерно соответствует числу введенных клеток, т.е, при инъекции 50 клеток в легких крыс образу ется в среднем 43-48 узлов, при ведении 25 клеток - 20-23 узла, доза 10 клеток дает 5-7 узлов ца легкое, а при введении 5 клеток у 70-807животных в легких возникает по 2-3 узла, и даже доза 3 клетки при 60- 703 прививаемости дает по 1-2 удара на животное. 6Таким образом, примгцецце аФфи.итетного к легким перевиваемого ытамма со способностью его клеток избирательно клонироваться в легочной ткани совместно с устройством, позволяющим одновременно как изолировать под визуальным коцгролем отдельные опухолевые клетки, так ц шгьеццровать эти же клетки животному-реципиецту, дает возможность с высокой эффективностью получить отдельные опухолевые метастазы и легочной ткани лабораторных животныхх. В свою очередь, рс ст метастазов в виде ограниченных, едицичцыу опухолевых узлов обеспечивает их оперзбельцость,тельному животному, о т л и ч а юи и й с я тем, то, с целью повышения ибир;,тельц сги и эффективности образовация одиночных метастатических опухолей, ццъеццряют оцухолевые клетки оргццотропцо-метастазирующего перевивавчого штамма в дозе 5 клеток и бу 1 е2. Устройство для моделирования опухоли л ского, содержащее стеклянцый капилляр, олццм концом соединенный через гибкую трубку с поршневойсцс:емой, о т л и ч а ю щ е е с ятем, цто, с целью повышения производительности и снижения поврежденийединичных оцухолевых клеток, в неговведена вторая поршневая система ввиде шприца с насаженной на его открытый конец инъекционной иглой, соединенный с полостью канала инъекционной иглы гибкий переходпк и жесткийпереходник, с одной стороны соединенный с гибким переходником, а с другой - с возможностью съема со стеклян