Колонка электрофореза и электрофокусирования

(19) (И 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРИТИ,(МПРИ ГКНТ СССР ЭЛЕКТРООРЕЗ носится"Оло ии ицине, Ц надежно полняют иала. Он ль изобти работы из токо- СОСТОИТ(57) Изобр:тение от биотехнологии и мед ретения - повыщенис колснки. Колонку в чепроводящего матер из камеры разделени злектродными сосуда1535898 лость камеры отделена от электродныхсосудов полупроницаемыми мембранами.Электродные сосуды содержат штуцерыдля обменного прокачивания электродИзобретение относится к электро"форетическому разделению и можетбыть использовано в биологии и медицине,Целью изобретения является повышение надежности работы колонки,На чертеже показана колонка.Колонка выполнена из токонепроводящего материала. В ее состав входиткамера разделения 1, соединеннаяс электродными сосудами 2. Внутренняя полость камеры отделена от электродных сосудов полупроницаемымимембранами 3. Электродные сосудысодержат штуцеры 1 для обменного прокачивания электродного буферногораствора. В камере разделения колонки 1 имеется токопроводящий герметизирующий подвижный поршень 5.Устройство работает следующим об 30разом.Камера разделени я 1 и;, я;,трод ь есосуды 2 заполняются соогветстгующнмибуферными растворами, Через узел выода 6 в колонку подается биообъект,подлежащий разделению электродамподводится напряжение, диктуемоеусловиями эксперимента, проводитсяэлектрофорез или электрофокусирование биообьекта. После окончания разделения г пространство между полу 40проницаемой мембраной 3 и гелевымпоршнем 5 через штуцер 8 при помощинасоса 9 подается вытесняющая жидкость или газ, в результате чегопоршень 5 плавно скользит в полости.камеры разделения и вытесняет содержимое колонки через штуцер сборафракций 10, После окончания сбора материала гелевый поршень 5 при помощитого же насоса 9 может снова быть50приведен в исходное положение,1. Работа в режиме электрофокусирования,зВ колонку с рабочим объемом 25 смпри помощи перистальтического насосавведен 21-ный раствор амфолина ЛКБ,стабилизированный градиентом концентрации глицерина (5-204). В раствор ного буферного раствора. В камереразделения колонки имеется токопроводящий герметизирующий подвижный поршень. 1 ил,введен бычий сывороточный альбумин3 мг. В нижней части рабочего объемаколонки сформирован подвижный герметизирующий поршень из 104-ного полиакриламидного геля. Электродные отсекизаполнены соответственно 0,01 н,ИаОН(катодный) и 0,01 н, НРОу (анодный),В процессе фокусирования напряжениена электродах плавно повышалось от 50до 300 В, Длительность фокусирования21 ч. После окончанля фокусированиянапряжение на электродах отключенои в пространство под гелевым поршнемначата плавная подача дистиллированной воды. Одновременно при помощиколлектора фракций начат сбор разделяемых фракций по 0,5 мл, В каждойфракции определены величина рН и концентрация белка,Результат. В процессе изоэлектрофокусирования в колонке сФормировался градиент рН в пределах 1,0-9,5,Белок сфокусирован в 3 фракциях с максимальным содержанием в области рН,9.2. Фракционирование белков сыворотки крови методом электоофореза вусловиях измененного рабочего объема.Путем закачивания буферного раствора в пространство под токопроьодящий поршень последний перемещенвверх, что привело к изменению рабочего объема колонки до 15 см . Рабочий объем колонки заполнен раствором0,05 М трис.боратного буфера, с абилизированного градиентом концентрации глицерина (5-20), общий объем15 мл. Электродные отсеки соединеныс дополнительными емкостями (по300 мл) магистралями, через ко 1 орыеосуществляется непрерывное прокачивание буферных растворов того жесостава при помощи перестальтическихнасосов. Через соответствующий штуцер на поверхность градиента осторожно нанесено 0,3 мл сыворотки крови человека, содержащей 0,01 бромфенолового синего. Электроды подключены к источнику постоянного напоя898 формула изобретения Колонка электрофореэа и электро- фокусирования, включающая электродные камеры, между которыми помещена камера разделения, отделенная от электродных камер полупроницаемыми мембранами, штуцера для ввода и вывода рабочих растворов, о т л и ч а ю щ ая с я тем,цто, с целью повышения надежности работы колонки, она снабжена перегородкой, выполненной иэ полупроницаемого токопроводящего материала и размещенной с возможностью перемещения в камере разделения.Составитель 0,3 обнинРедактор А,Долидиц Техред М.Дидык , Корректор С.1.1 екмар Заказ 85 Тираж 528 Подписное ВН 11 И 111 Госуд=.рственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб д 1/5 Производстве но-издательский комбинат "Патент, г. Ужгород, ул, Гагарина 101 5 1535 жения 150 В. Продолжительность процесса контролировалась визуально по подвижности маркерного красителя в рабочем пространстве колонки. После5 достижения красителя нижнего конца колонки напряжение отклюцено. В пространство под подвижным гелевым поршнем начата подача воздуха. Одновременно при помощи автоматического 10 коллектора начат сСор фракций содержимого колонки по 0,5 мл, В пробах определено содержание белка.Белки сыворотки крови расфакционированы на 5 фракций, наибольшую 15 по обьему и наиболее подвижную из которых представляет альбумин.Разра"сганлая колонка может быть использован для процессов разделения биополимеров методами электро фореза и электрофокусирования. Использование подвижной токопроводящей пеоегородки расширяет рабочие возможности колонки и исключает необходимость использования растворов 25 высокой плотности для фракционирования ее содержимого. Извес-на конструкция установки для электрсфореза 3, содеожащая колонкУ 30 и электродные камеры, отделяемые от колонки полупро; ицаемьи; мембранами, блок перисталь-нцеских насосов и кап ",лярный коллектор фракций, Последний работает та им образом, что в капиллярную трубку через заданные интеряэлы времени при помощи дополнительного насоса вводятся пузырьки воздуха, предупреждающие перемешивание собранных проб40Недостатком даной конструкции ляеся возможносгь перемешивэния содержимого колонки с вытесняющей жидкостью либо с воздухом, или сбор фракций осуществляется методом отка-, чивания беэ заполнения освобождающе- гося пространства инертной жидкостью. Этот недостаток особенно проявляется в условиях микрогравитации, когда любые жидкости имеют одинаковую плотностьИспользование в составе колонки для электрофореэа и иэоэле трического фокусирования токопроводящей герметизирующей перегородки, установленной с воэможностью перемещения, позволяет более эффективно осуществлять сбор разделяемых в колонке фракций, исключая их перемешивание, что существенно повышает надежность ее работы. При этом отпадает необходимость применения вытесняющей жидкости высокой плотности. Кроме того,это позволяет менять рабочий обьем колонки без изменения ее конструкции, что расширяет возможности ее использования. Наиболее целесообразным является применение устройства в условиях микрогравитации, когда использование жидкости с высокой плотностью не гарантирует от перемешивания ее с содержимым колонки,