Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мышцы

:ВИДЕТЕЛЬСТВ ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИИ(71) Казанский государственный медицинский институт им.С.В.Курашова (72) Н.П.Резвяков и А,П.Киясов (53) 616-089 (088.8)(56) Согю А, ега 1 КеппегхагопБргоогпд, вупарве Иогшагоп апй гергеввоп. - Иецговсепсе, 1983, ч,8, ч.3, р.403-416.Фросин В,Н., Никольский Е,Е., Воронин В.А, О полиаксональной иннервации фазных мышечных волокон л гушки, - Физиол. ж. 1978, т,64, В б, с.741. ОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ КОНЦЕВЫХ ПЛАСНЕРВНЫХ ТЕРИИНАЛЕЙ СКЕЛЕТНОЙ ТИНОК ИМЬП 1 ЦЫ(57) Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения - более четкое окрашивание концевых пластинок,Гистологические препараты высушиваюти инкубируют в среде с индоксилацетатом, этанолом, красителем прочнымсиним РР и 4 юсфатным буфером. Послепромывания препараты фиксируют, инкубируют в среде с хлоралгидратом ипиридином и импрегнируют. Затем переносят в среду с гидрохиноном исульфатом натрия. После этого фиксируют в растворе тиосульфата натрия,обезвоживают в спиртах, просветляютв ксилоле и заключают в бальзамИзобретение относится к медицине,а именно к гистологии, и может бытьиспользовано при Физиологических иморфологических исследованиях скелетных мышц человека и животных при 5изучении иннервации и реиннервацииих, при определении моно- и полисинаптичности мышечных волокон, полиаксойальности концевых пластинок впроцессе развития и регенерации скелетной мьппцы.Целью изобретения является болеечеткое окрашивание концевых пластинок путем включения в инкубационнуюсреду индоксилацетата и использования в качестве красителя прочногосинего РР,П р и м е р 1. Криостатные срезыскелетной мышцы крысы, наклеенныена предметные стекла, высушивают навоздухе при комнатной темнературе иинкубируют в среде состава; индоксилацетат 10 мг этанол 2 мл; краситель прочный синий РР 100 мг, Фосфатный буфер остальное при рН 5,6,при 37 С в течение 1 - 2 мин с послеодующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: Формалин 20 мл,хлорид натрия 4,25 г, вода дистиллированная .180 мл, После промывки вдистиллированной воде, инкубированияв течение 30 мин при 37 С в средесостава: хлоралгидрат 10 г, пиридин1 г, вода дистиллированная 100 мл,импрегнируют в течение 30 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании30 мг сульфата меди, промывают в дис 40тиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г сульфитнатрия 5 г, вода дистиллированная100 мл, разлитую в два стаканчика, впервый на 5 с, во второй - на 4 мин,45и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируютв 57.-ном тиосульфате натрия, послечего промывают в воде, обезвоживаютв спиртах, просветляют в ксилоле и50заключают в бальзам.П р и м е р 2. Криостатные срезыскелетной мьппцы морской свинки, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной тем 55пературе и инкубируют в среде состава; индоксилацетат 40 мг, этанол3 мл, прочный синий РР 70 мг, Фосфатный буфер остальное при рН 5,6, прио37 С в течение 0,5 - 1 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25 г, вода дистиллированная 180 мл. Промывают в дистиллированной воде, инкубируют в тече. оние 30 мин при 37 С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 20 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульФата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5 г, вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй - на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, Фиксируют в 57,-ном тиосульфате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.П р и м е р 3. Криостатные срезы скелетной мьппцы крысы, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной температуре и инкубируют в среде состава: индоксилацетат 15 мг, этанол 4 мл, проч - ный синий РР 140 мг, фосфатный буФер остальное при рН 5,6, при 37 С в течение 2-3 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, Фиксированием в течение 15 мин в среде: Формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25 г, вода дистиллированная 180 мл. Промывают в дистиллированной воде, инкубируют в течение 30 мин при 37 С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 40 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кйльция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульфата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5 г, вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй - на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в 57-ном тиосуль10678 4нол и краситель с последующей импрегнацией срезов нитратом серебра и определением концевых пластинок и нервных терминалей по почернению структуры, отличающийся тем,что, с целью более четкого окрашивания концевых пластинок, инкубационная среда дополнительно содержит индоксилацетат, а в качестве красите- О ля - прочный синий РР, при следующихсоотношениях компонентов, мас,7.: 13 фате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах,просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет выявить концевые пластинки за более короткий период времени за счет исключения ряда этапов. Для получения одного гистологического препарата с выявленными концевыми пластинками и их нервными терминалями известным способом затрачивается 4 ч, а предлагаемым способом 2 ч О мин. 70 - 40 Составитель М.Позняк Техред А. Кравчук Редактор К.Волощук Корректор А.Тяско Заказ 1882/38 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раувская наб., д.4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная, 4 Формула изобретения Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мышцы путем приготовления гистологического препарата, инкубации в среде, содержащей фосфатный буфер, этаИндок силацетат 1 О - 40 Этанол 2-4 Прочныйсиний РРФосфатныйбуферрН 5,0-7,0 Остальное при этом инкубацию проводят в течение 0,5 - 3 мин, а импрегнацию сереб ром осуществляют в течение 20-40 мин,